楊笑瓊??秦亞軍??詹劍峰

[摘要] 目的 探討快速培養(yǎng)法在診斷肺炎支原體導(dǎo)致的呼吸道感染中的作用。 方法 對2011年12月～2013年12月來院就診的疑似肺炎支原體感染患者200例進行研究，留取咽拭子和血清，分別進行快速培養(yǎng)法、熒光定量PCR法和血清抗體法檢驗，并就快速培養(yǎng)法與其余兩種不同的檢測方法的結(jié)果進行對比分析。 結(jié)果 快速培養(yǎng)法、熒光定量PCR法和血清抗體檢驗法檢測陽性率分別為30.0%（60/200）、29.0%（58/200）和16.5%（33/200），快速培養(yǎng)法陽性率與熒光定量PCR法檢測陽性率相比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；而快速培養(yǎng)法檢測陽性率與血清抗體法檢測陽性率相比較，快速培養(yǎng)法檢測陽性率顯著高于血清抗體檢測法，且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。 結(jié)論 快速培養(yǎng)法檢測肺炎支原體的敏感性和靈敏性可與熒光定量PCR法檢測結(jié)果相媲美，但裝備技術(shù)要求和檢測成本明顯低于熒光定量PCR法，同時敏感性和靈敏性顯著高于血清抗體檢測法?？焖倥囵B(yǎng)法檢測肺炎支原體不僅能有效滿足臨床需要，同時兼具有成本低的特點，因此這種方法具有較高的性價比，尤其適用于基層醫(yī)院。

[關(guān)鍵詞] 肺炎支原體；快速培養(yǎng)法；熒光定量PCR法；血清抗體檢驗法

[中圖分類號] R446 [文獻標識碼] B [文章編號] 2095-0616（2014）15-84-03

肺炎支原體是介于病毒和細菌之間的一種較為特殊的微生物[1]。人體呼吸道黏膜存在著多種支原體，已經(jīng)被證實可以引起肺炎的支原體只有肺炎支原體[2]。由于可以引起肺炎的病原體種類較多，醫(yī)生僅僅根據(jù)患者的臨床表現(xiàn)無法確定是哪種病原微生物導(dǎo)致患者發(fā)生肺炎，因而無法對癥下藥[3]，因此，病原體的檢測對于疾病的診斷和指導(dǎo)臨床用藥至關(guān)重要[4]。肺炎支原體常用的檢測方法有快速培養(yǎng)法、熒光定量PCR法和血清抗體檢驗法[5]。本研究就2011年12月～ 2013年12月來院就診的疑似肺炎支原體感染患者200例進行研究，分別使用三種不同的檢測方法對每位患者進行檢測，并將快速培養(yǎng)法的檢測結(jié)果與熒光定量PCR法和血清抗體檢驗法的檢測結(jié)果相比較，探討快速培養(yǎng)法在診斷肺炎支原體導(dǎo)致的呼吸道感染中的應(yīng)用價值。研究取得滿意的結(jié)果，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2011年12月～2013年12月來院就診的疑似肺炎支原體感染患者200例，其中男118例，女82例，年齡3～25歲，平均（11.5±5.2）歲。對每位患者取兩份咽拭子并抽取靜脈血3mL，其中取咽拭子前患者必須先漱口。兩份咽拭子分別用于快速培養(yǎng)和熒光定量PCR檢測，靜脈血分離血清后做肺炎支原體特異性IgM抗體檢測。

1.2 方法

1.2.1 快速培養(yǎng)法 快速培養(yǎng)法檢測使用肺炎支原體快速檢測試劑盒（武漢菁華時間科技有限公司生產(chǎn)，批號2010-3-16-03），將一份咽拭子置于液體培養(yǎng)基中攪拌數(shù)次，放入37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)6h后開始觀察結(jié)果，如必要可將觀察時間延長到1～ 4周。如果液體培養(yǎng)基顏色變?yōu)辄S色，再接著進行40倍光學(xué)顯微鏡觀察，如果顯微鏡下沒有發(fā)現(xiàn)細菌或者真菌，則結(jié)果為陽性，發(fā)現(xiàn)細菌或者真菌則結(jié)果為陰性；如果液體培養(yǎng)基顏色仍保持為原紅色或者非清亮的黃色則結(jié)果為陰性。

1.2.2 熒光定量PCR法 核酸定量檢測試劑盒選擇中山大學(xué)達安基因股份有限公司產(chǎn)品，使用羅氏公司生產(chǎn)的PCR擴增儀進行擴增，所有操作步驟均嚴格按照說明書執(zhí)行，結(jié)果直接以陽性或者陰性報告。

1.2.3 血清抗體檢測法 將患者血清以3000r/min轉(zhuǎn)速離心10min后取出血清，然后進行肺炎支原體特異性IgM抗體檢測，采用肺炎支原體特異性IgM抗體檢測試劑盒（膠體金法）進行測試。嚴格按照試劑盒說明書進行，如果沒有出現(xiàn)質(zhì)控點則表明試驗操作不當(dāng)或者試劑失效，應(yīng)當(dāng)重新按照規(guī)定測試；如果出現(xiàn)質(zhì)控點則表示試驗正常，可以進行結(jié)果判定，若僅有質(zhì)控點則表明結(jié)果為陰性，只有在出現(xiàn)2個斑點的情況下才能確定試驗結(jié)果為陽性。

1.3 評價指標

將快速培養(yǎng)法的檢測結(jié)果（即檢出的陽性率）分別與熒光定量PCR法和血清抗體檢驗法的檢測結(jié)果進行兩兩比較，用陽性檢出率的差異是否具有統(tǒng)計學(xué)意義判定檢驗方法的效果。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)經(jīng)epidata輸入計算機，應(yīng)用SPSS15.0統(tǒng)計軟件分析，兩組間陽性率的比較采用x2檢驗，α=0.05，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

200例疑似患者分別通過快速培養(yǎng)法、熒光定量PCR法和血清抗體檢驗法檢測陽性率分別為30.0%（60/200）、29.0%（58/200）和16.5%（33/200），快速培養(yǎng)法陽性率與熒光定量PCR法檢測陽性率相比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（x2=0.05，P>0.05）；快速培養(yǎng)法檢測陽性率與血清抗體法檢測陽性率相比較，快速培養(yǎng)法檢測陽性率顯著高于血清抗體檢測法，且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（x2=10.21，P<0.05）。具體比較見表1、2。

3 討論

肺炎支原體比較容易引起人肺炎，據(jù)相關(guān)資料表明肺炎支原體引起的肺炎占到非細菌性肺炎的一半以上[6]。肺炎支原體引起的人體肺組織病理變化主要表現(xiàn)為間質(zhì)性肺炎，又稱為原發(fā)性非典型

肺炎[7]。肺炎支原體可以從急性感染者的咽部、肺部、氣管、支氣管以及胸水中分離出來，也有部分人是肺炎支原體攜帶者。攜帶者一般無臨床癥狀，但其可作為重要的傳染源，是疾病預(yù)防控制過程中需要加以重視的環(huán)節(jié)[8]。支原體肺炎的臨床癥狀一般較為輕微，發(fā)病緩慢，患者發(fā)熱、咳嗽以及黏液或者膿性痰甚至血痰等癥狀較常見，一般來說不具有明顯的肺部體征[9]。

支原體肺炎的感染途徑主要是因為健康人接觸了或者吸入了肺炎支原體患者排出的分泌物，人群對于肺炎支原體的抵抗力較弱，普遍易感，患者中兒童和青少年占絕大部分[10]。支原體肺炎的發(fā)生具有明顯的季節(jié)性，大多發(fā)生于夏末秋初，春季和冬季也有少量散發(fā)。研究顯示[11]，近年來肺炎支原體感染引起肺炎的發(fā)病率有逐年增加的趨勢，尤其值得注意的是支原體肺炎在家庭或者醫(yī)院中的爆發(fā)性流行。

本研究顯示快速培養(yǎng)法陽性率與熒光定量PCR法檢測陽性率相比較陽性率比較接近，差異無統(tǒng)計學(xué)意義；快速培養(yǎng)法檢測陽性率與血清抗體法檢測陽性率相比較，快速培養(yǎng)法檢測陽性率顯著高于血清抗體檢測法，且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。相關(guān)研究表明PCR法檢測肺炎支原體具有較高的靈敏度和準確度，但是PCR操作首先需要較好的設(shè)備，其次需要高素質(zhì)的人才，因此成本較高，每次檢測所需費用非常昂貴，目前尚不具備廣泛推廣的條件[12]。而快速培養(yǎng)法檢測肺炎支原體的靈敏度和可靠性與PCR法非常接近，但每次檢測的成本較低，在患者可承受范圍以內(nèi)，因而具備廣泛推廣的條件。

綜上所述，快速培養(yǎng)法檢測肺炎支原體的敏感性和靈敏性可與熒光定量PCR法檢測結(jié)果相媲美，但裝備技術(shù)要求和檢測成本明顯低于熒光定量PCR法，同時敏感性和靈敏性顯著高于血清抗體檢測法?？焖倥囵B(yǎng)法檢測肺炎支原體不僅能有效滿

足臨床需要同時兼具有成本低的特點，因此這種方法具有較高的性價比，可以作為基層醫(yī)院檢測方法的重要選擇。

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（收稿日期：2014-04-15）