姚德蛟 陳 玉 蔡 懿 楊 俊 丁芋友 劉 俊 孟春芹

1成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院腫瘤科，成都 610072

2成都中醫(yī)藥大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院，成都 610075

化療被公認(rèn)為惡性腫瘤的三大治療手段之一。但化療在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時，也影響了人體的消化系統(tǒng)，最常見的毒性反應(yīng)為惡心嘔吐，其發(fā)生率為60%～90%[1]。消化道反應(yīng)不但影響患者的情緒及進(jìn)食，還可能造成營養(yǎng)不良、代謝紊亂等并發(fā)癥，甚至導(dǎo)致患者抗拒或放棄化療，影響治療療效。

化療誘發(fā)惡心嘔吐的機(jī)制尚不十分清楚，就目前的研究[2]結(jié)果顯示，化療藥物刺激胃腸道黏膜，導(dǎo)致黏膜釋放5-羥色胺(5-HT)，與5-HT受體結(jié)合產(chǎn)生神經(jīng)沖動傳入嘔吐中樞引起嘔吐。5-HT3受體拮抗劑，如昂丹司瓊、格拉司瓊等能明顯減輕化療所致惡心嘔吐，對預(yù)防和治療急性嘔吐療效確切，但對遲發(fā)性嘔吐療效較差[3]。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，毒物(化療藥物)攻伐脾胃，使正氣耗傷，健運失司，氣機(jī)阻滯，胃氣上逆而作嘔，而“腎在液為唾”、“腎為胃之關(guān)”，毒物入臟入腑，傷及脾胃，久之及腎，因此化療后患者多有惡心嘔吐、神疲乏力、厭油、納差、腹脹、腹瀉、盜汗、脫發(fā)、腰膝酸軟等脾腎虧虛之癥。故本文以香砂六君子湯合腎氣丸加減組成脾腎合劑，并建立順鉑誘導(dǎo)的SD大鼠胃腸損傷模型，探討脾腎合劑減輕化療引起的胃腸損傷的機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

普通SD大鼠80只，雌雄各半，體重(190±25) g，40 d齡，由成都中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物研究中心提供(實驗動物許可證號：川實動管使第9號)。

1.2 藥物與試劑

脾腎合劑由人參10 g，茯苓10 g，炒白術(shù)10 g，陳皮10 g，木香10 g，法夏10 g，砂仁10 g，山茱萸10 g，熟地10 g，制附子5 g，肉桂5 g，牛膝10 g，甘草5 g組成。上述藥物均購自成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)生藥教研室鑒定。用約8倍于藥的蒸餾水浸泡藥物30 min，水煎20 min后濾液，再予6倍于藥蒸餾水煎30 min濾液，兩次煎煮而成的濾液混勻，并水浴濃縮成1 g/ml，置于5 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩ｍ樸K注射液，規(guī)格10 mg/2 ml，由江蘇豪森藥業(yè)股份有限公司提供；鹽酸格拉司瓊注射液，規(guī)格3 mg/3 ml，由南通精華制藥股份有限公司提供。

血清表皮生長因子(EGF)試劑盒由上海森雄科技實業(yè)有限公司提供。5-HT抗體由武漢博士德生物工程有限公司提供。10%中性福爾馬林溶液由成都中醫(yī)藥大學(xué)生物實驗室配制。二抗試劑盒由北京中山生物技術(shù)有限公司提供。高嶺土由蘇州中國高嶺土有限公司提供。1 kg高嶺土粉和10 g阿拉伯樹膠加水?dāng)嚢韬筮^篩網(wǎng)，80 ℃烘干，制成小顆粒狀，與大鼠飼料同時放入飼養(yǎng)籠中。

1.3 動物分組和實驗方法

SD大鼠經(jīng)適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為4組，即對照組、模型組、格拉司瓊組、脾腎合劑組，每組20只。除對照組外，其余三組大鼠均于第7天按4 mg/kg尾靜脈注射順鉑，對照組、模型組、格拉司瓊組大鼠每日予以生理鹽水20 ml/kg灌胃，格拉司瓊組大鼠按2 mg/kg劑量在注射順鉑0、4、8 h后給予尾靜脈注射格拉司瓊，脾腎合劑組大鼠在格拉司瓊治療基礎(chǔ)上，每日予以脾腎合劑20 ml/kg灌胃，連續(xù)14 d。將大鼠迅速頸椎脫臼處死，腹主動脈采血，立即取出胃、十二指腸組織，胃條取1 cm×1 cm，十二指腸取胃竇與十二指腸交界處2 cm，其中1 cm腸段與胃條一并放入10%福爾馬林液固定48 h，逐級酒精脫水，二甲苯透明、浸臘，石蠟包埋，常規(guī)切片4 nm，蘇木精-伊紅染色。因操作不當(dāng)，實驗第9天模型組有2只大鼠死亡，格拉司瓊組第10天有1只大鼠死亡，其余各組無死亡。

1.4 觀察和檢測指標(biāo)

1.4.1 一般情況 毛色、神態(tài)、體重、進(jìn)食量、“異食癖”表現(xiàn)。每日17：00 pm記錄其進(jìn)食量，18：00 pm稱各組大鼠體重。

1.4.2 組織學(xué)觀察 觀察各組大鼠胃及十二指腸標(biāo)本絨毛、肌層、漿膜層等形狀、出血情況、炎性滲出等。

1.4.3 酶聯(lián)免疫法(ELISA)測定大鼠血清EGF水平 腹主動脈采血，離心取血清，按試劑盒說明檢測EGF水平。

1.4.4 免疫組化法檢測大鼠十二指腸嗜鉻細(xì)胞(ECL細(xì)胞)5-HT的表達(dá) 取上述蘇木精-伊紅染色剩余十二指腸段，在10%中性福爾馬林溶液中固定，用免疫組化法測定十二指腸5-HT。染色過程采用SP法，即用生物素標(biāo)記的第二抗體與鏈霉菌抗生物素蛋白連接的過氧化物酶染色及基質(zhì)素混合液來測定細(xì)胞和組織中的抗原。IHC染色陽性結(jié)果判定：ECL細(xì)胞內(nèi)5-HT表達(dá)陽性物質(zhì)呈黃至棕色橢圓形顆粒狀，大多數(shù)均勻分布于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，胞核內(nèi)無表達(dá)，少部分因ECL細(xì)胞具有長突伸入腸腔而在腔內(nèi)可見。用OLYMPUS BX50光學(xué)顯微鏡觀察染色結(jié)果。每張切片選一定范圍，輸入圖像分析系統(tǒng)，在200倍鏡下測量ECL細(xì)胞5-HT陽性物質(zhì)積分密度。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 脾腎合劑對各組大鼠進(jìn)食量的影響

第1天，各組大鼠之間的進(jìn)食量差異無統(tǒng)計學(xué)意義。第7天和第14天，與對照組比較，模型組大鼠進(jìn)食量明顯減少(P<0.05，P<0.01)；與模型組比較，格拉司瓊組大鼠進(jìn)食量差異無統(tǒng)計學(xué)意義，但脾腎合劑組大鼠進(jìn)食量均明顯增加(P<0.05)。見表1。

2.2 脾腎合劑對各組大鼠體重的影響

第1天和第7天，各組大鼠之間的體重差異無統(tǒng)計學(xué)意義。第14天，與對照組比較，模型組大鼠體重明顯減輕(P<0.05)；與模型組比較，格拉司瓊組大鼠體重差異無統(tǒng)計學(xué)意義，但脾腎合劑組大鼠體重明顯增加(P<0.05)。見表2。

表1 各組大鼠進(jìn)食量的比較

表2 各組大鼠體重的比較

2.3 各組大鼠異食癖情況比較

對照組大鼠進(jìn)食高齡土量為(0.28±0.03) g，模型組大鼠進(jìn)食高齡土量為(0.86±0.05) g，模型組較對照組進(jìn)食高齡土量明顯增加(P<0.01)；與模型組比較，格拉司瓊組和脾腎合劑組大鼠進(jìn)食高齡土量為(0.52±0.02) g和(0.46±0.06) g，明顯減少(P<0.05)。

2.4 胃及十二指腸黏膜蘇木精-伊紅染色結(jié)果

對照組大鼠胃及十二指腸絨毛及肌層平整，絨毛表面沒有滲出物；模型組大鼠胃及十二指腸漿膜層波浪狀，肌層內(nèi)出血，絨毛表面滲出(主要是白細(xì)胞)；格拉司瓊組大鼠胃及十二指腸輕度痙攣，絨毛表面無滲出；脾腎合劑組大鼠胃及十二指腸漿膜層輕度波浪形，肌層沒有痙攣，絨毛表面無滲出。見圖1-2。

2.5 ECL細(xì)胞5-HT的表達(dá)情況

依據(jù)平均光密度檢測結(jié)果，與對照組比較，模型組大鼠ECL細(xì)胞5-HT的表達(dá)明顯增加，與模型組比較，格拉司瓊組和脾腎合劑組大鼠ECL細(xì)胞5-HT的表達(dá)明顯降低。見圖3。

A：對照組；B：模型組；C：格拉司瓊組；D：脾腎合劑組

A：對照組；B：模型組；C：格拉司瓊組；D：脾腎合劑組

A：對照組；B：模型組；C：格拉司瓊組；D：脾腎合劑組

2.6 各組大鼠血清EGF水平的比較

對照組大鼠血清EGF水平為(1.40±0.21) pg/ml，模型組大鼠血清EGF水平為(1.35±0.14) pg/ml，模型組血清EGF水平較對照組明顯增加(P<0.05)；與模型組比較，格拉司瓊組大鼠血清EGF水平為(1.35±0.02) pg/ml，兩組無明顯差異，但脾腎合劑組大鼠血清EGF水平為(1.41±0.02) pg/ml，較其他各組明顯增加(P<0.05)。

3 討論

化療嘔吐歸屬于中醫(yī)“嘔吐”范疇，是使用了化療藥物后出現(xiàn)的外邪致內(nèi)傷的疾病，多數(shù)醫(yī)家認(rèn)為毒物攻伐脾胃，使正氣耗傷，脾胃健運失司，氣機(jī)阻滯，胃氣上逆，臨床表現(xiàn)為惡心、嘔吐，常伴厭油、納差、神疲、腹脹、腹瀉等。脾胃之癥在化療時即可出現(xiàn)，亦有化療后出現(xiàn)嘔吐者。徐氏[4]指出：腎和脾胃關(guān)系為“先天”滋“后天”、“后天”養(yǎng)“先天”。若反復(fù)或長期嘔吐，“后天”不足以養(yǎng)“先天”，必?fù)p及腎?！蹲C治匯補》中記載：“若久嘔延及肝腎皆虛，沖氣上逆者，用溫通柔潤之補下焦主治”。腫瘤患者在化療過程中，脾失溫煦，健運失司，聚而為痰、飲、水、濕，阻滯中焦致胃失和降。腎陽不足，命門火衰，臨床上出現(xiàn)盜汗、脫發(fā)、腰膝酸軟等腎虛之癥晚于脾胃虧虛之癥。因此在化療時僅顧護(hù)脾胃不夠，應(yīng)同時固腎。因此，本文以香砂六君子湯合腎氣丸加減組成脾腎合劑。方由人參、茯苓、地黃、法夏、炮姜、山茱萸、砂仁、木香、制附片、肉桂等組成。方中人參具有大補元氣，補脾益肺，生津止渴，安神智之功，善治氣虛欲脫，脾氣不足，肺氣虧虛以及血虛陽萎等證?！侗静萁?jīng)疏》言：“人參能回陽氣于垂絕，……益真氣，則五臟皆補矣”。茯苓、法夏、炮姜、山砂仁等健脾和胃，理氣止痛。《名醫(yī)方論》張璐言：“氣虛者，補之以甘?！w人之一身，以胃氣為本，胃氣旺，則五臟受蔭；故凡病久不愈，惟有益胃補腎兩途，……?！狈街械攸S、山茱萸溫補腎元，以補益脾胃?！睹t(yī)方論》柯琴言：“……腎得氣而土自生也。且形不足者溫之以氣，則脾胃因虛寒而致病者固痊，……”。地黃甘微溫，歸肝腎經(jīng)，功效養(yǎng)血滋陰，補精益髓。《本草綱目》云：“填骨髓長肌肉，生精血，補五臟內(nèi)傷不足，通血脈，利耳目，黑須發(fā)”。法夏性溫，歸脾胃、肺經(jīng)?！端幮哉摗费裕骸啊_胃健脾，止嘔吐”。山茱萸味酸微溫，歸肝腎經(jīng)，功效補益肝腎，收斂固腎?！秳e錄》云：“強陰益精，安五臟”?，F(xiàn)代研究[5]表明，香砂六君子湯能減少胃黏膜瘀血、水腫，減輕炎癥細(xì)胞的浸潤，促進(jìn)胃液的分泌，改善胃腸道內(nèi)分泌功能，調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫劑體液免疫等。健脾益氣藥物，如人參、白術(shù)、茯苓能提高對化療的耐受力，對多種化療藥物均有明顯的整體解毒作用[6]。半夏生物堿能阻斷5-HT受體、多巴胺受體，抑制腸管的興奮作用[7]。健脾益氣中藥調(diào)節(jié)消化道功能，增加胃腸酶和胃泌素分泌，增加小腸吸收功能，促進(jìn)RNA和蛋白質(zhì)合成[8]，改善機(jī)體營養(yǎng)狀況。腎氣丸源自《金匱要略》，功用補腎助陽，主治腎陽虛損。明末清初名醫(yī)傅山辨治嘔吐時總結(jié)經(jīng)驗特色，病在脾胃，本在腎心[9]?，F(xiàn)代很多醫(yī)家亦從腎論治嘔吐，莫劍鋒等[10]觀察64例采用補脾益腎湯防治胃癌化療的惡心嘔吐反應(yīng)療效確切。

本研究建立順鉑誘導(dǎo)的SD大鼠胃腸損傷模型，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，脾腎合劑組大鼠進(jìn)食量、體重均高于模型組，病理檢查胃腸黏膜反應(yīng)輕，血清EGF增高，同時ECL細(xì)胞內(nèi)5-HT表達(dá)較低。EGF增高可抑制胃酸分泌，促進(jìn)胃腸上皮增生，增加黏膜血流，或促進(jìn)胃腸黏膜生長，抑制胃腸黏膜的分泌，保護(hù)胃腸黏膜。這些是健脾和胃補腎中藥增強機(jī)體“正氣”的表現(xiàn)。綜上所述，通過以上研究驗證了脾腎合劑減輕化療后胃腸道的損傷，值得在臨床上運用。

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