顧華敏　范廣民　曹學(xué)全　章輝　何凱　陳麗麗

NOB-1和CyclinD1在甲狀腺乳頭狀癌中聯(lián)合表達(dá)的意義

顧華敏范廣民曹學(xué)全章輝何凱陳麗麗

【摘要】目的探討NOB-1和CyclinD1在甲狀腺乳頭狀癌中聯(lián)合表達(dá)的意義。方法采用免疫組化Envision二步法染色檢測(cè)68例甲狀腺乳頭狀癌，30例結(jié)節(jié)性甲狀腺腫和30例同期癌旁3～5cm以外的正常甲狀腺組織中NOB-1和CyclinD1的表達(dá)。結(jié)果在正常甲狀腺組織、結(jié)節(jié)性甲狀腺腫、甲狀腺乳頭狀癌組織中：NOB-1陽(yáng)性率分別為6.67%、13.33%、77.94%；CyclinD1陽(yáng)性率分別為0.00%、20.00%、83.82%，兩種蛋白陽(yáng)性率在不同組織中差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.01）。在甲狀腺乳頭狀癌組織中NOB-1陽(yáng)性率Ⅲ、Ⅳ期（91.43%）高于Ⅰ、Ⅱ期（63.64%）；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（96.00%）高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（67.44%）；原發(fā)灶腫瘤有侵犯包膜的（95.65%）高于無(wú)侵犯包膜的（40.91%），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或0.01）；CyclinD1的陽(yáng)性率在Ⅲ、Ⅳ期（94.29%）高于Ⅰ、Ⅱ期（72.73%）；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（100.00%）高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（58.88%）；原發(fā)灶腫瘤有侵犯包膜的（97.83%）高于無(wú)侵犯包膜的（54.55%），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或0.01）。并且隨著腫瘤的進(jìn)展，NOB-1和CyclinD1陽(yáng)性率均增高，兩者出現(xiàn)高度的一致性，呈正相關(guān)（r=0.344，P＜0.01）。結(jié)論NOB-1和CyclinD1在甲狀腺乳頭狀癌中呈過(guò)表達(dá)，兩者聯(lián)合檢測(cè)對(duì)于評(píng)估甲狀腺乳頭狀癌生物學(xué)行為及預(yù)后具有重要的臨床意義。

【關(guān)鍵詞】甲狀腺乳頭狀癌NOB-1CyclinD1

甲狀腺癌是甲狀腺組織中的惡性腫瘤，是近年來(lái)發(fā)病率上升最快的惡性腫瘤之一，其中乳頭狀癌上升最為明顯，其女性發(fā)病率是男性的3倍以上[1]。根據(jù)中國(guó)醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院滕衛(wèi)平教授在2010年9月提出的《中國(guó)十城市甲狀腺疾病流行病學(xué)調(diào)查》的橫斷面研究結(jié)果顯示，我國(guó)甲狀腺結(jié)節(jié)患病率為18.6%,其中惡性結(jié)節(jié)即甲狀腺癌占5%～10%。甲狀腺乳頭狀癌占甲狀腺癌病理類(lèi)型的60%～70%，大多發(fā)展緩慢并且預(yù)后良好[2]，10年生存率在95%以上[3]，但也有部分很快出現(xiàn)局部侵犯發(fā)生轉(zhuǎn)移。NOB-1是近年新發(fā)現(xiàn)的酵母基因NOB-1p的人類(lèi)同源基因，其與細(xì)胞周期調(diào)節(jié)因子如CyclinD1結(jié)合，通過(guò)細(xì)胞內(nèi)泛素-蛋白酶途徑，參與細(xì)胞周期調(diào)節(jié)，對(duì)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移產(chǎn)生影響[4]。本實(shí)驗(yàn)采用免疫組化Envision二步法染色檢測(cè)甲狀腺乳頭狀癌、結(jié)節(jié)性甲狀腺腫腫瘤組織和正常甲狀腺組織中NOB-1和CyclinD1的表達(dá)，探討NOB-1和CyclinD1在甲狀腺乳頭狀癌中聯(lián)合表達(dá)的意義。

1　材料和方法

1.1材料選取2011-12—2013-12我院手術(shù)切除并由病理科確診的甲狀腺乳頭狀癌68例，男11例，女57例；年齡36～78歲，中位年齡50歲；術(shù)前均未行放、化療；68例中，頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移27例，無(wú)頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移41例；腫瘤直徑在1.0cm以?xún)?nèi)的45例，直徑＞1.0cm的23例；原發(fā)灶腫瘤有侵犯甲狀腺包膜的46例，無(wú)侵犯包膜的22例；Ⅰ期13例，Ⅱ期20例，Ⅲ期27例，Ⅳ期8例（臨床分期按TNM分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，根治標(biāo)本淋巴結(jié)清掃后病理確認(rèn)）。另?yè)窠Y(jié)節(jié)性甲狀腺腫30例，男9例，女21例，年齡25～75歲，中位年齡48歲；癌旁3～5cm以外的正常甲狀腺組織30例，男6例，女24例，年齡36～68歲，中位年齡45歲。3組患者年齡、性別差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。所有標(biāo)本均經(jīng)10%中性緩沖甲醛溶液固定,常規(guī)脫水，石蠟包埋切片。

1.2試劑NOB-1與CyclinD1，DAB試劑盒購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)公司。Envision試劑盒購(gòu)自丹麥DaKo公司。

1.3免疫組織化學(xué)方法所有組織塊均為常規(guī)固定包埋，行4μm厚切片，經(jīng)脫蠟、水化后采用檸檬酸高溫修復(fù)，再用Envision二步法染色，DAB顯色，蘇木素復(fù)染胞核，中性樹(shù)膠封片，具體操作過(guò)程按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。用PBS代替一抗作陰性對(duì)照，用已知陽(yáng)性標(biāo)本切片作陽(yáng)性對(duì)照。

1.4結(jié)果判斷NOB-1以細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核中見(jiàn)到棕黃色顆粒分布為陽(yáng)性如圖1；CyclinD1則是棕黃色顆粒分布在細(xì)胞核上為陽(yáng)性如圖2。觀察5個(gè)高倍視野，計(jì)數(shù)≥1 000個(gè)細(xì)胞中的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜10%為陰性，≥10%為陽(yáng)性。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料的比較采用χ2檢驗(yàn)，NOB-1和CyclinD1表達(dá)的相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析。

2　結(jié)果

2.1NOB-1和CyclinD1在正常甲狀腺、結(jié)節(jié)性甲狀腺腫和甲狀腺乳頭狀癌組織中的表達(dá)比較見(jiàn)表1。

由表1可見(jiàn)，3種組織中兩種蛋白陽(yáng)性率比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.01）。

圖1　NOB-1在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)（免疫組化染色，×200）

圖2　CyclinD1在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)（免疫組化染色，×400）

表1　NOB-1和CyclinD1在正常甲狀腺、結(jié)節(jié)性甲狀腺腫和甲狀腺乳頭狀癌組織中的表達(dá)比較[例（%）]

2.2NOB-1與CyclinD1的表達(dá)與甲狀腺乳頭狀癌臨床病理因素的關(guān)系見(jiàn)表2。

由表2可見(jiàn)，NOB-1與CyclinD1的表達(dá)均與患者的性別、年齡、腫瘤大小無(wú)明顯相關(guān)性（均P＞0.05）；NOB-1與CyclinD1的陽(yáng)性率在甲狀腺乳頭狀癌Ⅲ、Ⅳ期高于Ⅰ、Ⅱ期；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；原發(fā)灶腫瘤有侵犯包膜的高于無(wú)侵犯包膜的，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05或0.01）。

2.3NOB-1與CyclinD1在甲狀腺乳頭狀癌組織中表達(dá)的相關(guān)性經(jīng)Spearman等級(jí)相關(guān)分析顯示，NOB-1與CyclinD1在甲狀腺乳頭狀癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.344，P＜0.01），見(jiàn)表3。

表3　NOB-1與CyclinD1在甲狀腺乳頭狀癌組織中表達(dá)的相關(guān)性（例）

3　討論

NOB-1是近年新發(fā)現(xiàn)的酵母基因NOB-1p的人類(lèi)同源基因，是一個(gè)多功能蛋白質(zhì)，主要由位于N端的PIN結(jié)構(gòu)域和位于C端的ZNRD1結(jié)構(gòu)域組成[5]。NOB-1通過(guò)這兩結(jié)構(gòu)與細(xì)胞周期調(diào)節(jié)因子如CyclinD1結(jié)合，參與泛素-蛋白酶體途徑，導(dǎo)致此調(diào)節(jié)系統(tǒng)異常，進(jìn)而可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞增殖失控，基因組不穩(wěn)定和惡性腫瘤的發(fā)生。NOB-1通過(guò)PIN結(jié)構(gòu)參與細(xì)胞核糖體的組裝和蛋白質(zhì)的合成，通過(guò)ZNRD1下調(diào)細(xì)胞周期蛋白D，使細(xì)胞分裂停留在G1期不進(jìn)入S期，從而失去對(duì)細(xì)胞周期負(fù)向調(diào)控，促進(jìn)細(xì)胞增殖和腫瘤的發(fā)生[6]。臨床研究顯示，在細(xì)胞周期調(diào)節(jié)泛素化的改變是許多癌癥發(fā)病的起因[7]。

本研究顯示，NOB-1和CyclinD1在正常組織和良性腫瘤組織中，兩者低表達(dá)，甚至是不表達(dá)，而在甲狀腺乳頭狀癌組織中兩者表達(dá)陽(yáng)性率明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；進(jìn)一步研究顯示，NOB-1在乳頭狀癌Ⅲ期和Ⅳ期的陽(yáng)性率（91.43%）高于Ⅰ期和Ⅱ期（63.64%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（96.00%）高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（67.44%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；原發(fā)灶腫瘤有侵犯包膜（95.65%）高于無(wú)侵犯包膜的（40.91%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；CyclinD1在乳頭狀癌Ⅲ期和Ⅳ期的陽(yáng)性率（94.29%）高于Ⅰ期和Ⅱ期（72.73%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（100%）高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（58.88%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；原發(fā)灶腫瘤有侵犯包膜（97.83%）高于無(wú)侵犯包膜的（54.55%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。本研究表明NOB-1與CyclinD1表達(dá)均與甲狀腺乳頭狀癌臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和包膜侵犯密切相關(guān)。并且隨著腫瘤的進(jìn)展，表達(dá)陽(yáng)性率越高，出現(xiàn)高度的一致性。經(jīng)Spearman等級(jí)相關(guān)分析，兩者表達(dá)呈正相關(guān)。本研究結(jié)果提示NOB-1可能通過(guò)通過(guò)某種信號(hào)通路調(diào)節(jié)CyclinD1高表達(dá)，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的異常增殖，從而在甲狀腺乳頭狀癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中起重要作用，這與馬麗莉等[8]在食管癌臨床研究出現(xiàn)的結(jié)果是一致的。

綜上所述，筆者認(rèn)為NOB-1和CyclinD1在甲狀腺乳頭狀癌中呈過(guò)表達(dá)，在甲狀腺乳頭狀癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中起重要作用，聯(lián)合檢測(cè)兩者對(duì)于評(píng)估甲狀腺乳頭狀癌生物學(xué)行為及預(yù)后具有重要的臨床意義。本研究為下一步從基因水平和采用RNA干擾技術(shù)探討甲狀腺癌的發(fā)病機(jī)制提供理論基礎(chǔ)。

4　參考文獻(xiàn)

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（本文編輯：沈昱平）

收稿日期：（2014-03-19）

作者單位：318000臺(tái)州恩澤醫(yī)療中心（集團(tuán)）臺(tái)州市中心醫(yī)院病理科

Expression of NOB-1 and CyclinD1 in papillary thyroid carcinoma and its significance

【Abstract】ObjectiveTo investigate the expression of NOB-1 and CyclinD1 in papillary thyroid carcinoma and its significance.MethodsImmunohistochemistry was used to detect the expression of NOB-1 and CyclinD1 in 68 cases of thyroid papillary carcinoma,30 cases of nodular goiter and 18 cases of normal thyroid tissue.ResultsIn normal thyroid tissue,nodular goiter,thyroid papillary carcinoma tissues the positive rates of NOB-1 expression were 6.67%,13.33%and 77.94%respectively(P＜0.01);those of CyclinD1 expression were 0.00%,20.00%,83.82%,respectively(P＜0.01).NOB-1 positive rates in thyroid papillary carcinoma stageⅢ,Ⅳwere higher than those in stageⅠ,Ⅱ(91.43%vs 63.64%,P＜0.05);those with lymph node metastasis were higher than those without lymph node metastasis(96.00%vs 67.44%,P＜0.05);those with capsule involvement were higher than those without capsule invasion(95.65%vs 40.91%,P＜0.01).Positive rates of CyclinD1 in stageⅢ,Ⅳcarcinoma were higher than those in stageⅠ,Ⅱ(94.29%vs 72.73%,P＜0.05);those with lymph node metastasis were higher than those without lymph node metastasis(100.00%vs 58.88%,P＜0.01);those with capsule invasion were higher than those without capsule invasion(97.83%vs 54.55%,P＜0.01).With the progress of the disease,the positive rate of NOB-1 and CyclinD1 were increased,and NOB-1 and CyclinD1 were positively correlated with each other(r=0.344,P＜0.01).ConclusionThe combined detections of NOB-1 and CyclinD1 may be of clinical value in evaluating biological behavior and prognosis of thyroid papillary carcinoma.

【Key words】Papillary thyroid carcinomaNOB-1CyclinD1