孫鑫鑫 王超群 黃必飛 王艷 曾悅

胃癌中表皮生長(zhǎng)因子受體2蛋白的表達(dá)及其臨床意義

孫鑫鑫 王超群 黃必飛 王艷 曾悅

目的 探討表皮生長(zhǎng)因子受體2（HER2）蛋白在胃癌及癌旁胃組織中的表達(dá)，分析其與胃癌臨床病理特征的關(guān)系。方法用免疫組織化學(xué)EnVision法檢測(cè)579例胃癌組織和65例癌旁胃組織中HER2蛋白表達(dá)并進(jìn)行比較。結(jié)果胃癌和癌旁胃組織中HER2過表達(dá)率分別為10．54%（61/579）和0（0/65），兩者HER2過表達(dá)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．01）。腸型胃癌HER2蛋白過表達(dá)率（17．90%）明顯高于彌漫型胃癌（4．18%）和混合型胃癌（8．57%），均P＜0．01；高-中分化胃癌HER2過表達(dá)率（14．91%）明顯高于低分化胃癌（6．58%），P＜0．01。HER2蛋白表達(dá)與胃癌臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及漿膜浸潤(rùn)無關(guān)（均P＞0．05）。結(jié)論胃癌中HER2表達(dá)增強(qiáng)，其高表達(dá)與腸型胃癌和高-中分化胃癌密切相關(guān)。腸型胃癌和高-中分化胃癌中HER2高表達(dá)的機(jī)制有待進(jìn)一步探索。

表皮生長(zhǎng)因子受體2 胃癌 免疫組化 蛋白表達(dá)

胃癌是我國(guó)乃至全球最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率和病死率在惡性腫瘤中均位于前列[1]。目前，胃癌的治療以手術(shù)切除加化療為主，但腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移仍然導(dǎo)致患者生存率低下[2]。因此，尋找與胃癌發(fā)生、發(fā)展相關(guān)的生物標(biāo)記物，并對(duì)其進(jìn)行干預(yù)，對(duì)提高患者生存質(zhì)量和生存率有著重要意義。目前，雖然有較多關(guān)于胃癌中表皮生長(zhǎng)因子受體2（HER2）蛋白表達(dá)狀態(tài)的研究，但由于研究人群和評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)的差異，導(dǎo)致各研究報(bào)道的HER2蛋白陽性率（4%～53%，中位數(shù)18%）[2]有較大的偏差。本研究采用Hofmann等[3]建立的胃癌中HER2蛋白表達(dá)的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)用免疫組化方法檢測(cè)579例胃癌組織和65例癌旁胃組織中HER2蛋白表達(dá)，以求進(jìn)一步研究并驗(yàn)證HER2蛋白在胃癌中的表達(dá)及其與臨床病理意義。

1 對(duì)象和方法

1.1 對(duì)象 2006-01—2013-03我院手術(shù)切除的胃腺癌患者579例，男394例，女185例；年齡32～86歲，中位年齡67歲。Lauren分型：腸型257例，彌漫型287例，混合型35例；組織學(xué)分級(jí)：高-中分化腺癌275例，低分化腺癌304例；臨床分期：Ⅰ/Ⅱ期298例，Ⅲ/Ⅳ期281例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移340例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移239例；侵及漿膜者391例，未侵及漿膜者188例?；颊咝g(shù)前均未做化療、免疫及放射治療。其中65例另取癌旁胃組織。

1.2 試劑 兔抗人HER2蛋白單克隆抗體、EnVision二步法試劑盒購自基因科技（上海）有限公司，均為丹麥Dako公司產(chǎn)品。

1.3 方法 所有組織均以10%甲醛溶液固定，石蠟包埋，4μm連續(xù)切片，分別做HE及免疫組化染色。免疫組化實(shí)驗(yàn)采用檸檬酸鹽緩沖液高壓熱修復(fù)，EnVision二步法染色，DAB/H2O2顯色，蘇木素復(fù)染。用已知陽性片作陽性對(duì)照，PBS代替一抗作為陰性對(duì)照，具體步驟按說明書進(jìn)行。染色結(jié)果由兩位病理醫(yī)師閱片核實(shí)診斷。

1.4 結(jié)果判斷 HER2蛋白染色主要定位于細(xì)胞膜，其結(jié)果判定采用Hofmann等[3]建立的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，0（陰性）：無著色或＜10%細(xì)胞有細(xì)胞膜著色；1+（陰性）：＞10%細(xì)胞有弱的、不連續(xù)的細(xì)胞膜著色，需要高倍物鏡（×40）觀察染色；2+（意義不明確的）：＞10%細(xì)胞有弱到中等的、完整的或底外側(cè)的細(xì)胞膜著色；3+（陽性）：＞10%細(xì)胞有中到強(qiáng)的、完整的或底外側(cè)的細(xì)胞膜著色，只需要低倍物鏡（×2.5～5）即可觀察染色。本研究中以0～1+為HER2蛋白表達(dá)陰性，2+～3+為HER2蛋白過表達(dá)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件，應(yīng)用χ2檢驗(yàn)對(duì)胃癌和癌旁胃組織中HER2蛋白表達(dá)、胃癌中HER2蛋白表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系進(jìn)行分析。

2 結(jié)果

2.1 HER2蛋白在胃癌及癌旁胃組織中的表達(dá) HER2蛋白在胃癌中的過表達(dá)率為10.54%（61/579，其中3+45例，2+16例），在癌旁胃組織中的過表達(dá)率為0（0/65），胃癌組織與癌旁胃組織HER2蛋白過表達(dá)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）（圖1）。

圖1 HER2蛋白免疫組化染色[A：胃癌組織HER2蛋白表達(dá)3+（×400）；B：癌旁胃組織HER2蛋白表達(dá)陰性（×200）]

2.2 胃癌組織HER2蛋白表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系 見表1。

由表1可見，HER2蛋白過表達(dá)率與胃癌Lauren分型及組織學(xué)分化程度相關(guān)（均P＜0.01），腸型胃癌HER2蛋白過表達(dá)率明顯高于彌漫型胃癌和混合型胃癌；高-中分化胃癌HER2蛋白過表達(dá)率明顯高于低分化胃癌（P＜0.01）。HER2蛋白表達(dá)與胃癌臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及漿膜浸潤(rùn)無關(guān)（均P＞0.05）。

表1 胃癌組織HER2蛋白表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系

3 討論

HER2是表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）家族重要成員，編碼一個(gè)相對(duì)分子質(zhì)量1.85×105的具有酪氨酸激酶活性的跨膜糖蛋白受體（又稱p185）。目前有研究認(rèn)為，HER2自身磷酸化后激活下游PI3K/AKT和RAF/ERK1/ 2兩條主要的信號(hào)通路，在細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、分化以及腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移過程中起了重要作用[4-5]。

HER2基因擴(kuò)增和蛋白過表達(dá)存在于20%～30%的乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者，且與患者預(yù)后不良相關(guān)[6]，針對(duì)HER2的分子靶向藥物Herceptin使部分HER2蛋白過表達(dá)乳腺癌患者受益。因此，關(guān)于各種惡性腫瘤中HER2表達(dá)成為研究的熱點(diǎn)。已有研究表明，HER2基因擴(kuò)增和蛋白過表達(dá)不僅存在于乳腺癌中，還見于卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌、結(jié)腸癌、食管癌等[7]。

目前，雖然有較多關(guān)于胃癌中HER2蛋白表達(dá)狀態(tài)的研究，但各研究報(bào)道的HER2蛋白陽性率從4%～53%不等[2]，存在較大偏差。近年來，有4項(xiàng)研究報(bào)道中國(guó)胃癌患者HER2蛋白陽性率（3+）從5.8%～9.8%不等[8-11]，他們均采用了Hofmann等[3]建立的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)。本課題檢測(cè)了579例胃癌HER2蛋白表達(dá)，發(fā)現(xiàn)45例為3+（7.77%），16例2+（2.76%），總體HER2蛋白過表達(dá)率為10.54%（61/579），在文獻(xiàn)報(bào)道的范圍內(nèi)。與癌旁胃組織比較，胃癌組織中HER2蛋白表達(dá)明顯增強(qiáng)，為HER2蛋白陽性胃癌患者抗HER2分子靶向治療提供了理論基礎(chǔ)。我們還發(fā)現(xiàn)，腸型胃癌HER2蛋白過表達(dá)率明顯高于彌漫型和混合型胃癌，高-中分化胃癌HER2蛋白過表達(dá)率明顯高于低分化胃癌，這些結(jié)果與多數(shù)國(guó)、內(nèi)外研究報(bào)道相符[11-12]，提示HER2蛋白過表達(dá)與特定類型癌細(xì)胞亞群相關(guān)。因高-中分化胃癌多數(shù)是腸型胃癌，低分化胃癌多數(shù)是彌漫型胃癌，所以上述結(jié)果是一致的。然而，亦有文獻(xiàn)報(bào)道HER2蛋白在腸型胃癌和低分化胃癌中高表達(dá)，而在彌漫型胃癌和高-中分化胃癌中低表達(dá)[13]。多數(shù)研究報(bào)道HER2蛋白過表達(dá)與患者預(yù)后不良相關(guān)，而與臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤浸潤(rùn)深度等臨床病理特征無關(guān)[2，11-12]。

腸型胃癌及高-中分化胃癌中HER2蛋白高表達(dá)的機(jī)制，有學(xué)者認(rèn)為腸型胃癌和彌漫型胃癌的發(fā)生是受不同的信號(hào)傳導(dǎo)途徑影響，不同組織病理學(xué)特征的胃癌之間存在不同模式的遺傳學(xué)改變[12]。彌漫型胃癌結(jié)合乳腺浸潤(rùn)性小葉癌HER2蛋白表達(dá)狀態(tài)分析，可以找到一些共同點(diǎn)，即這兩種腫瘤均HER2蛋白低表達(dá)，且E-cadherin表達(dá)缺失，而腸型胃癌和乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌則正好相反。因此，我們提出疑問，HER2蛋白表達(dá)是否與E-cadherin通路相關(guān)？我們將在下一步研究中繼續(xù)驗(yàn)證這個(gè)問題。

[1]Jemal A,Bray F,Center M M,et al．Global cancer statistics[J]．CA Cancer J Clin,2011,01：1-22．

[2] Chua T C,Merrett N D．Clinicopathologic factors associated with HER2-positive gastric cancer and its impact on survival outcomes-A systematic review[J]．Int J Cancer,2012,130：2845-2856．

[3] Hofmann M,Stoss O,Shi D,et al．Assessment of a HER2 scoring system for gastric cancer：results from a validation study[J]．Histopathology,2008,52：797-805．

[4]Hausherr C K,Schiffer I B,Gebhard S,et al．Dephosphorylation of p-ERK1/2 in relation to tumor remission after HER-2 and Raf1 blocking therapy in a conditional mouse tumor model[J]．Mol Carcinog,2006,45：302-308．

[5]McCubrey J A,Steelman L S,Abrams S L,et al．Roles of the RAF/MEK/ERK and PI3K/PTEN/AKT pathways in malignant transformation and drug resistance[J]．Advan Enzyme Regul,2006, 46：249-279．

[6]Ross J S,Fletcher J A．HER-2/neu（c-erb-B2）gene and protein in breast cancer[J]．Am J Clin Pathol,1999,112：S53-S67．

[7]Menard S,Casalini P,Campiglio M,et al．HER2 overexpression in various tumor types,focusing on its relationship to the development of invasive breast cancer[J]．Ann Oncol,2001,12：S15-S19．

[8]Wu H M,Liu Y H,Lin F,et al．Association of HER2 protein expression with clinicopathologic features and prognosis in Chinesepatientswith gastric carcinoma[J]．Chinese JournalofPathology,2011,40：296-299．

[9] Yan S Y,Hu Y,Fan J G,et al．Clinicopathologic significance of HER2/neu protein expression and gene amplification in gastric carcinoma[J]．World J Gastroenterol,2011,17：1501-1506．

[10]Wang Y K,Gao C F,Yun T,et al．Assessment of ERBB2 and EGFR gene amplification and protein expression in gastric carcinoma by immunohistochemistry and fluorescence in situ hybridization[J]．Mol Cytogenet,2011,4：14．

[11]Shan L,Ying J M,Lu N．HER2 expression and relevant clinicopathological features in gastric and gastroesophageal junction adenocarcinoma in a Chinese population[J]．Diagnostic Pathology,2013,8：76．

[12] Moelans C B,Diest P J,Milne A N,et al．HER2/neu Testing and Therapyin Gastroesophageal Adenocarcinoma[J]．Patholog Res Int,2011,6：74-182．

[13]王士娜,馬靜,楊立宇,等．HER2/neu和Akt2在胃癌中的表達(dá)及意義[J]．中國(guó)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2013,42(1)：131-134．

Expression of HER2 in gastric carcinoma and its clinicopathological significance

Objective To investigate the expression of epidermal growth factor receptor 2(HER2)protein in gastric carcinoma and its clinicopathological significance．MethodsThe expression of HER2 was detected with immunohistochemical EnVision method in 579 specimens of gastric carcinoma and 65 specimens of adjacent gastric tissue．ResultsThe positive expression rates of HER2 protein in gastric carcinomas and adjacent gastric tissues were 10．54%(61/579)and 0(0/65),respectively(P＜0．01)．The HER2 expression rate in intestinal type gastric carcinomas(17．90%)was significantly higher than that in diffuse type gastric carcinomas(4．18%)and mixed type gastric carcinomas(8．57%)(P＜0．01)．The expression rate of HER2 in well and moderately-differentiated gastric carcinomas was significantly higher(14．91%)than that in poorly differentiated ones(6．58%)(P＜0．01)．No association was observed between HER2 expression and clinical stage,lymph nodes metastasis and serosal invasion(P＞0．05)．ConclusionHER2 expression is up-regulated in gastric carcinoma,particularly in intestinal type gastric carcinomas and well and moderately-differentiated gastric carcinomas．

HER2 Gastric carcinoma Immunohistochemistry Protein expression

2013-08-12）

（本文編輯：沈昱平）

浙江省醫(yī)藥衛(wèi)生科技計(jì)劃項(xiàng)目（2012KYB230）

322100 東陽市人民醫(yī)院病理科（孫鑫鑫、王超群、黃必飛、曾悅），腫瘤內(nèi)科（王艷）

王超群，E-mail:chaoqunw869@sohu.com