邵 紅

（鄭州人民醫(yī)院，河南 鄭州 450000）

鍵合纖維素衍生物手性固定相拆分酮洛芬對(duì)映體

邵 紅

（鄭州人民醫(yī)院，河南 鄭州 450000）

目的建立用鍵合纖維素衍生物手性固定相拆分酮洛芬對(duì)映體的高效液相色譜法。方法采用Chiralpak IB色譜柱（250 mm×4.6 mm，5μm）在正相條件下拆分酮洛芬對(duì)映體，流動(dòng)相為正己烷-異丙醇（95∶5），流速0.8 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm，柱溫25 ℃。結(jié)果酮洛芬對(duì)映體在鍵合纖維素衍生物手性固定相上能夠基線分離，分離度為5.44。結(jié)論本法簡(jiǎn)便、快速、重復(fù)性好，適用于酮洛芬對(duì)映體的分離。

高效液相色譜；鍵合纖維素衍生物手性固定相；酮洛芬；對(duì)映體拆分

酮洛芬是非甾體抗炎藥（NSAIDs），具有解熱鎮(zhèn)痛和抗炎作 用，用于治療骨節(jié)炎和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。酮洛芬分子結(jié)構(gòu)中含有1個(gè)手性中心，存在1對(duì)對(duì)映體。藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，只有S-型對(duì)映體才具有抗炎抗風(fēng)濕和鎮(zhèn)痛作用，若以S-型對(duì)映體給藥可減少給藥劑量，降低毒副作用[1]。對(duì)酮洛芬對(duì)映體的拆分主要有手性柱法[2,3]，手性流動(dòng)相添加劑法[4]，柱前衍生化法[5]和毛細(xì)管電泳法[6]。但未見采用鍵合纖維素-三（3，5-二甲苯基氨基甲酸酯）色譜柱，即Chiralpak IB色譜柱進(jìn)行拆分的報(bào)道。因此，本文采用Chiralpak IB色譜柱對(duì)酮洛芬對(duì)映體進(jìn)行拆分，并考察了流動(dòng)相組成、流速和柱溫對(duì)分離的影響。

1 儀器與試藥

Agilent HΡ1100高效液相色譜儀（1100VWD紫外可見檢測(cè)器，1100自動(dòng)進(jìn)樣器，HΡ化學(xué)工作站）；Chiralpak IB色譜柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm；日本大賽璐公司）；BΡ211D1/10萬天平（德國(guó)Sartorius公司）；酮洛芬（外消旋體，中國(guó)食品藥品檢定研究院）；正己烷、異丙醇、乙醇和三氯甲烷（色譜純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Chiralpak IB柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：正己烷-異丙醇（95∶5）；流速：0.8 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm；柱溫：25 ℃。

2.2 樣品溶液的制備與測(cè)定

精密稱取酮洛芬1.0 mg置10 mL容量瓶中用異丙醇溶解并定容至刻度，得濃度為0.1 mg/mL的樣品溶液，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾并超聲脫氣后取10 μL進(jìn)樣，按所選色譜條件操作，色譜結(jié)果見圖1。

圖1 酮洛芬對(duì)映體手性拆分色譜圖

3 討 論

3.1 流動(dòng)相改性劑種類對(duì)分離的影響

在以正己烷為流動(dòng)相的正相體系中，固定流速為0.8 mL/min，柱溫為25 ℃，分別以乙醇和異丙醇為流動(dòng)相改性劑考察了醇的種類對(duì)拆分的影響（表1），其中乙醇和異丙醇量均為5%。結(jié)果表明，與使用乙醇為流動(dòng)相改性劑相比，異丙醇有更強(qiáng)的選擇性，分離度高于乙醇。流動(dòng)相中醇分子能夠以氫鍵形式在固定相表面與酮洛芬對(duì)映體發(fā)生吸附性競(jìng)爭(zhēng)，減弱酮洛芬對(duì)映體的過強(qiáng)吸附，使其得到分離。當(dāng)由乙醇更換為異丙醇，醇碳鏈長(zhǎng)度增加，流動(dòng)相與固定相作用的能力降低，從而使酮洛芬對(duì)映體與固定相的作用增強(qiáng)，表現(xiàn)為保留增強(qiáng)，分離度增加，而出峰時(shí)間相差不大。因此，選擇異丙醇為流動(dòng)相改性劑。

表1 醇的種類對(duì)分離的影響

3.2 流動(dòng)相改性劑比例對(duì)分離的影響

在流速為0.8 mL/min，柱溫為25 ℃的條件下，通過改變流動(dòng)相正己烷和異丙醇的比例，考察醇的比例對(duì)拆分的影響（表2）。結(jié)果表明，異丙醇量為5%時(shí)，分離度最好，隨著異丙醇量的增加，出峰時(shí)間變短，分離度降低。隨著異丙醇量的增加，流動(dòng)相和固定相的分子作用增強(qiáng)，從而使酮洛芬對(duì)映體的柱保留作用減弱，洗脫速度加快，同時(shí)分離度和分離因子隨之降低，分離能力下降。故選擇流動(dòng)相正己烷-異丙醇（95∶5）。

表2 醇的比例對(duì)分離的影響

3.3 流速對(duì)分離的影響

在流動(dòng)相為正己烷-異丙醇（95∶5），柱溫為25 ℃的條件下，考察流速對(duì)酮洛芬對(duì)映體分離的影響（表3）。結(jié)果表明，隨著流速的增加，酮洛芬對(duì)映體的分離因子沒有變化，這說明流速對(duì)手性空穴的空間構(gòu)型沒有影響。酮洛芬對(duì)映體的分離度在流速為0.6 mL/min時(shí)達(dá)到最大，流速＜0.6 mL/min，由于出峰時(shí)間延長(zhǎng)，峰形擴(kuò)展，導(dǎo)致分離度降低。流速＞0.6 mL/min，隨著流速的增加，使藥物對(duì)映體與固定相的作用時(shí)間減少，從而不利于分離，且流速越大，柱壓越高。綜合考慮分離度、出峰時(shí)間和柱壓等因素，選擇流速為0.8 mL/min。

表3 流速對(duì)分離的影響

3.4 柱溫對(duì)分離的影響

在流動(dòng)相為正己烷-異丙醇（95∶5），流速為0.8 mL/min的條件下，考察柱溫（20～35 ℃）對(duì)對(duì)映體出峰時(shí)間和分離度的影響。結(jié)果表明，隨著溫度的升高，出峰時(shí)間加快，對(duì)映體分離度減小。這是由于溫度降低，對(duì)映體與固定相之間有充分的時(shí)間形成非對(duì)映體結(jié)合物，使分離度增加。但溫度過低，使出峰時(shí)間延長(zhǎng)，峰形擴(kuò)展，分離度下降。25 ℃接近室溫，且低溫有利于延長(zhǎng)色譜柱的壽命，因此選擇25 ℃作為柱溫。

4 結(jié) 論

使用Chiralpak IB色譜柱對(duì)酮洛芬對(duì)映體進(jìn)行拆分，考察了流動(dòng)相組成、流速和柱溫對(duì)拆分的影響，確立了最佳拆分條件：流動(dòng)相為正己烷-異丙醇（95∶5），流速0.8 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm，柱溫25 ℃。

[1] 梅之南,裴小平,蔡鴻生.右旋酮洛芬的藥動(dòng)學(xué)和藥效學(xué)性質(zhì)[J].中國(guó)新藥雜志,1998,7(5):339-341.

[2] Boisvert J,Caillé G,McGilveray IJ,et al.Quantification of ketoprofen enantiomers in human plasma based on solid-phase extraction and enantioselective column chromatography[J].J Chromatogr B,1997,690(1-2):189-193.

[3] 李小梅,周鳳,趙華,等.酮洛芬對(duì)映體的分離、分析方法的研究及其應(yīng)用[J].重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2010,35(4):586-590.

[4] 楊青,唐瑞仁,曾莎莎.高效液相色譜手性流動(dòng)相法拆分酮基布洛芬對(duì)映體[J].分析試驗(yàn)室,2007,26(8):84-86.

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1671-8194（2014）10-0057-03