鄭凝堅

強制降解試驗是指將原料藥或制劑置于比較劇烈的試驗條件下，考察其穩(wěn)定性的一系列試驗。一般而言，該試驗的目的主要有以下兩方面:一是通過考察藥品在一系列劇烈條件下的穩(wěn)定性，了解該藥品內在的穩(wěn)定特性及其降解途徑與降解產(chǎn)物。例如，通過高溫降解試驗，可以了解所考察的藥品在高溫條件下是否穩(wěn)定;如果不穩(wěn)定，大致在何種條件下不穩(wěn)定，該藥品又是通過何種降解途徑得到何種降解產(chǎn)物。其二，這些試驗也能在一定程度上對有關物質分析方法用于檢查降解產(chǎn)物的專屬性進行驗證。對于創(chuàng)新藥，由于對其各方面的性質均不夠了解，因此，通過設計比較完整的強制降解試驗，可以比較全面地了解其穩(wěn)定特性，從而為制劑處方、工藝的設計，以及產(chǎn)品儲存條件的確定等提供有益的參考。所以對于創(chuàng)新藥而言，通過強制降解試驗來了解藥物的穩(wěn)定特性就顯得尤為重要。在《中國藥典》中只有對藥品進行高溫、高濕研究的要求。在ICH中只是對光照試驗有指導文件。而本研究是綜合了《中國藥典》［1，2］、ICH 及外國cGMP的要求，對藥品進行了一個全面的研究。下面是我們對藥品利巴韋林片進行強降解試驗研究的全部內容。

利巴韋林片是抗病毒藥，主要適用于呼吸道合胞病毒引起的病毒性肺炎與支氣管炎，皮膚皰疹病毒感染。國外更大量用于丙型肝炎的配合治療。

為了掌握藥品利巴韋林片在極端惡劣環(huán)境下的降解情況，并證明我們所采用的分析方法對雜質分析的專屬性，我們綜合了國內外對藥品的穩(wěn)定性試驗的要求，制定了負荷降解實驗研究。將利巴韋林片在酸、堿、熱、氧化和光照條件下進行降解，15 d(360 h)內降解量要達到20%(±10%)。所有的樣品都用帶有UV檢測器的HPLC檢測系統(tǒng)進行含量及雜質檢測，峰純度用帶有DAD檢測器的HPLC檢測系統(tǒng)進行檢測。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑 儀器:HP1100高效液相色譜系統(tǒng)(HPLC)，色譜柱:Aminex Fast Acid Analysis陽離子交換柱(9μm，100 mm ×7.8 mm)，檢測方法:USP 利巴韋林測定方法。

1.2 樣品制備

1.2.1 酸處理實驗樣品溶液的制備 酸處理貯備液(平行制備兩份):準確稱取相當于200 mg利巴韋林原料的片劑樣品，置于100 ml容量瓶中，加入適量的 HCL(1N)溶液溶解，并定容至刻度，搖勻。置于暗處，于室溫下放置24～144個小時。

1.2.2 堿處理實驗樣品溶液的制備 堿處理貯備液(平行制備兩份):準確稱取相當200 mg利巴韋林原料的片劑樣品，置于100 ml容量瓶中，加入約70 ml KOH(0.1N)溶液溶解，并定容至刻度，搖勻。置于暗處，于室溫下放置4～144個小時。

1.2.3 熱處理實驗樣品的制備 取5個稱量瓶，每個瓶中放入相當于400 mg利巴韋林原料的片劑樣品，放入130℃的烘箱中，烘24～360個小時。

1.2.4 光照實驗樣品的制備 取5個稱量瓶，每個瓶中放入相當于400 mg利巴韋林原料藥的片劑樣品，置于光照試驗箱日光燈下(照度:10000±1000Lux)，放置24～360個小時。

1.2.5 氧化處理實驗樣品溶液的制備 氧化試驗貯備液(平行制備兩份):準確稱取相當于100 mg利巴韋林原料藥的片劑樣品，置于100 ml容量瓶中，加入約100 ml 3% 雙氧水溶解，然后稀釋至100 ml，搖勻，置于恒溫恒濕箱中(40℃±5℃，避光)，放置24～360個小時。

1.2.6 雜質溶液的制備 雜質標準品貯備液:分別準確稱取10 mg 雜質標準品(RTCOOH、TCOOH、Ribavirin α-Anomer、TCONH2、5’ARTCONH2)，置于五個不同的 50 ml容量瓶中，用稀釋液溶解并定容至刻度，搖勻。再準確稱取25 mg利巴韋林標準品，置于另外一個50 ml容量瓶中，用稀釋液溶解并定容至刻度，搖勻。

1.3 實驗程序 按照上述負荷降解處理條件，將利巴韋林片分別進行酸、堿、熱、光、氧化處理，然后運用HPLC分析系統(tǒng)，根據(jù)設定的儀器及色譜條件，對處理后的樣品溶液進行含量、雜質及峰純度測定。堿處理樣品處理4 h后測定，酸處理樣品在第24、48、144 h分別測定一次，熱處理、光處理和氧化處理樣品在第 24、72、120、240、360 h 分別測定一次。

圖1 酸處理實驗利巴韋林片樣品圖譜

2 實驗結果及分析

2.1 酸處理實驗總結 按照已定的實驗方案，在酸處理實驗第24、48、144 h，我們分別對處理后的利巴韋林片樣品進行了HPLC檢測，結果表明，利巴韋林片經(jīng)過酸處理144 h后，發(fā)生了明顯降解，所檢測出的已知雜質有 RTCOOH、TOOOH、TCONH2等，見圖1。

2.2 堿處理實驗總結 按照已定的實驗方案，在堿處理實驗第4小時，我們對處理后的利巴韋林片樣品進行了HPLC檢測，結果表明，利巴韋林片經(jīng)堿處理4 h后，發(fā)生了明顯降解。這說明:在堿性條件下，利巴韋林片降解產(chǎn)生RTCOOH雜質，見圖2。

圖2 堿處理實驗利巴韋林片樣品圖譜

2.3 光處理實驗總結 按照已定的實驗方案，在光處理實驗第24、72、120、240、360 h，我們分別對處理后的利巴韋林片樣品進行了HPLC檢測，結果表明，利巴韋林片干品經(jīng)過光照處理360 h后，均未發(fā)生明顯降解。這說明:在光照條件下，利巴韋林片相對比較穩(wěn)定。

2.4 熱處理實驗總結 按照已定的實驗方案，在熱處理實驗第24、72、120、240、360 h，我們分別對處理后的利巴韋林片樣品進行了HPLC檢測，結果表明，利巴韋林片干品經(jīng)熱處理360 h后，未發(fā)生明顯降解，這說明:在較高溫度條件下，利巴韋林片干品相對比較穩(wěn)定。

2.5 氧化處理實驗總結 按照已定的實驗方案，在氧化處理實驗第24、72、120、240、360 h，我們分別對處理后的利巴韋林片樣品進行了HPLC檢測，結果表明。在氧化條件下，利巴韋林片中核糖基與三氮唑環(huán)之間的C-N鍵發(fā)生斷裂，由于核糖基不包含能吸收紫外光的發(fā)色團，故而不能被UV檢測器檢出，見圖3。

圖3 氧化處理樣品圖譜

3 結論

本報告以上實驗數(shù)據(jù)及結論表明，利巴韋林片采用USP高效液相測定方法，能夠穩(wěn)定準確地檢測到利巴韋林片的降解雜質，該方法可作為對利巴韋林片進行質量監(jiān)控的有效手段。

［1］ 2010年1月 ISBN 978-7-5067-4438-6《中國藥典》2010版二部附錄XIX C原料藥與藥物制劑穩(wěn)定性試驗指導原則

［2］ 2001年8月，ICH-Q1A(R2)Stability Testing of New Drug Substances and Products