劉娜娜，闞建英

(天津中醫(yī)藥研究院附屬醫(yī)院，天津300120)

膿毒癥是由病原微生物引發(fā)機(jī)體防御反應(yīng)所導(dǎo)致的復(fù)雜、多系統(tǒng)的臨床動(dòng)態(tài)變化過(guò)程。心功能障礙是嚴(yán)重膿毒癥及膿毒性休克患者的主要表現(xiàn)，也是增加膿毒癥病死率的重要因素［1，2］，但膿毒癥心肌功能抑制的病理生理機(jī)制并不十分清楚。p38信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路是絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)家族重要成員，在炎癥反應(yīng)及細(xì)胞應(yīng)激、遷移、凋亡等方面起重要作用［3，4］。2012 年 8 ～12 月，我們觀察了p38MAPK抑制劑SB203580對(duì)膿毒癥大鼠心功能及心肌組織中炎癥介質(zhì)TNF-α、IL-6水平的影響，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 模型制作及干預(yù) 健康雄性SD大鼠30只，體質(zhì)量180～220 g(由天津醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供)。隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、干預(yù)組各10只。模型組和干預(yù)組采用盲腸結(jié)扎穿刺術(shù)(CLP)方法制作膿毒癥模型;干預(yù)組予 p38MARK抑制劑SB203580 2 mg/kg腹腔注射，12 h后重復(fù)給藥。

1.2 相關(guān)指標(biāo)檢測(cè) 制模后1、3、6、12、24 h抽取兩管股靜脈血各1 mL，分離血清。ELISA法檢測(cè)血清TNF-α、IL-6水平(繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出)。造模后24 h各組行心臟彩超檢查，測(cè)量EF和FS。處死各組大鼠迅速分離左室心肌，置4℃冷生理鹽水中洗盡血污，－70℃低溫保存，取冰凍心肌組織約500 mg，均勻后取上清適量，用Western blot方法檢測(cè)勻漿液p38MAPK蛋白。操作按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以ˉx±s表示。組間比較采用單因素方差分析，多組間比較方差齊選LSD法檢驗(yàn)，方差不齊采用Dunnett's檢驗(yàn)。P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清TNF-α及IL-6水平 各組術(shù)后各時(shí)點(diǎn)血清TNF-α及IL-6水平見(jiàn)表1。由表1可見(jiàn)，模型組術(shù)后血清TNF-α、IL-6水平迅速升高，于24 h到達(dá)高峰，與對(duì)照組各時(shí)點(diǎn)比較，P均＜0.05。干預(yù)組血清TNF-α、IL-6水平也進(jìn)行性增加，與對(duì)照組各時(shí)點(diǎn)比較，P均＜0.05，但其升高幅度明顯小于模型組，各時(shí)點(diǎn)與模型組比較，P均＜0.05。

2.2 左心室EF及FS 術(shù)后24 h各組左心室EF及FS見(jiàn)表2。由表2可見(jiàn)，模型組、干預(yù)組左心室EF和FS較對(duì)照組顯著降低(P均＜0.05)。干預(yù)組左心室 EF和 FS下降程度較模型組小(P均 ＜0.05)。

2.3 心肌組織p38MARK蛋白表達(dá) 對(duì)照組、模型組、干預(yù)組p38MAPK蛋白相對(duì)表達(dá)量分別為0.34±0.15、0.79 ± 0.12、0.38 ± 0.12。與對(duì)照組比較，模型組、干預(yù)組大鼠p38MAPK蛋白相對(duì)表達(dá)量升高，干預(yù)組大鼠p38MAPK蛋白相對(duì)表達(dá)量較模型組降低(P均 ＜0.05)。

3 討論

膿毒癥發(fā)病迅速，臨床救治難度大，病死率高。膿毒癥誘導(dǎo)的心肌功能障礙(SIMD)是造成膿毒癥預(yù)后不良的重要原因之一。目前研究認(rèn)為膿毒性心肌病并不是由病原微生物直接侵?jǐn)_的結(jié)果，而是過(guò)度激活的全身炎癥反應(yīng)造成炎癥因子過(guò)量釋放導(dǎo)致了炎癥瀑布形成，與 TNF-α、IL-1β、IL-6、一氧化氮(NO)等炎癥介質(zhì)有關(guān)。同時(shí)心肌細(xì)胞也通過(guò)自分泌和旁分泌產(chǎn)生炎性介質(zhì)，造成心肌局部炎性浸潤(rùn)、充血水腫、心肌細(xì)胞肥大及心肌收縮力下降［5，6］。本研究結(jié)果顯示，模型組術(shù)后血清TNF-α及IL-6水平迅速升高，其心肌收縮功能受抑制，表現(xiàn)為左室EF及FS下降，提示膿毒癥休克時(shí)心肌結(jié)構(gòu)的損傷可能是導(dǎo)致心功能障礙的基礎(chǔ)，而通過(guò)p38MAPK抑制劑SB203580阻斷炎性介質(zhì)的釋放能有效減少心肌損傷，改善預(yù)后［7，8］。

表1 各組各時(shí)間點(diǎn)血清TNF-α及IL-6水平比較(pg/mL，ˉx ± s)

表2 術(shù)后24 h各組左心室EF及FS比較(%，ˉx±s)

MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑是體內(nèi)重要的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，參與調(diào)節(jié)胚胎發(fā)育、細(xì)胞分化、細(xì)胞增殖和細(xì)胞死亡。p38MAPK是MAPK家族成員之一，可被多種因素激活后通過(guò)Ⅷ區(qū)域蘇氨酸、酪氨酸雙位點(diǎn)磷酸化而激活，從而促進(jìn)炎癥細(xì)胞產(chǎn)生大量的炎性因子，如 TNF-α、IL-6 等［9，10］，在炎癥反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。p38MAPK參與了膿毒癥誘導(dǎo)的心肌抑制介質(zhì)的產(chǎn)生、心肌細(xì)胞的凋亡以及心肌細(xì)胞鈣穩(wěn)態(tài)異常等病理生理過(guò)程，在應(yīng)激條件下對(duì)細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)、炎癥反應(yīng)及細(xì)胞凋亡過(guò)程進(jìn)行調(diào)控，因此p38MAPK被認(rèn)為是多條信號(hào)途徑的交匯點(diǎn)和共同通道。本研究結(jié)果顯示，模型組術(shù)后血清TNF-α、IL-6和心肌中p38MAPK蛋白的表達(dá)進(jìn)行性升高，心臟超聲示EF和FS顯著降低，進(jìn)一步證實(shí)p38激活是介導(dǎo)膿毒癥大鼠心肌TNF-α、IL-6大量釋放及心功能障礙的重要機(jī)制［11～13］。SB203580 為 p38MAPK 的特異性抑制劑，本研究結(jié)果顯示，其能顯著降低膿毒癥大鼠血清TNF-α、IL-6水平，減小EF和FS的下降幅度，提示其可通過(guò)抑制p38MAPK信號(hào)通路顯著改善膿毒癥狀態(tài)下多器官的損傷［14～16］。

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