鄭芹林，王明明，李宗恒

(瀘州醫(yī)學院附屬醫(yī)院，四川瀘州646000)

子宮腺肌病(AM)是一種常見婦科病，其雖為良性病變，卻有類似惡性腫瘤的侵襲轉移行為。目前AM的確切病因和發(fā)病機制尚不清楚，手術及藥物治療效果差。近年來“在位內(nèi)膜決定論”［1］逐漸成為AM發(fā)病機制研究的新方向，即異位內(nèi)膜能否在完成黏附—侵襲—血管形成這三步，在位內(nèi)膜是關鍵，后者的黏附性、侵襲性增強和血管生成才是AM的主要原因，同時該過程的發(fā)生需要多種細胞因子、轉移因子、生長因子的協(xié)同作用。促肝細胞再生磷酸酶-3(PRL-3)作為臨床診斷惡性腫瘤浸潤轉移的標志物［2］;血管內(nèi)皮生成因子(VEGF)有促內(nèi)皮增殖、促血管生成作用，是目前發(fā)現(xiàn)的最重要的血管生成因子［3］。本研究采用免疫組化法檢測了PRL-3、VEGF在AM患者異位內(nèi)膜、在位內(nèi)膜和正常子宮內(nèi)膜中的表達，觀察二者在AM發(fā)生發(fā)展中的作用及相互關系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 異位內(nèi)膜(異位組)、在位內(nèi)膜組織(在位組)和正常子宮內(nèi)膜組織(對照組)均隨機取自我院婦產(chǎn)科2012年2月～2013年2月行開腹或腹腔鏡手術的患者。其中AM患者30例，年齡35～50(43.52±6.35)歲，取其異位內(nèi)膜及在位內(nèi)膜，包括增生期16例，分泌期14例;正常子宮內(nèi)膜組織30例取自同一時期因子宮肌瘤行子宮切除術的患者，年齡30～53(42.05±5.74)歲，所取組織為非瘤區(qū)內(nèi)膜組織且不合并子宮內(nèi)膜異位癥，增生期12例，分泌期18例。所有患者術前半年均無抗AM藥物治療史及激素治療史。

1.2 主要試劑 鼠抗人PRL-3單克隆抗體(美國Santa Cruz公司)，兔抗人VEGF單克隆抗體(北京中杉金橋生物工程有限公司)，兔二步法免疫組化檢測試劑盒(PV-6001，北京中杉金橋生物工程有限公司)，通用型二步法免疫組化檢測試劑盒(PV-6000，北京中杉金橋生物工程有限公司)。

1.3 PRL-3、VEGF表達檢測 采用二步法免疫組化檢測試劑盒測定各組子宮內(nèi)膜組織中的PRL-3、VEGF。采用Image Pro6.0專業(yè)圖像分析系統(tǒng)，每張切片隨機選取5個視野測量陽性細胞平均光密度(MOD)值，每個視野測定3次后取均值，以OD值作為相對表達量。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料以ˉx±s表示，兩樣本均數(shù)比較用t檢驗，多樣本均數(shù)比較用方差分析，相關性分析用Pearson相關分析法。P≤0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 各組 PRL-3、VEGF的表達比較 PRL-3及VEGF表達異位組 ＞在位組 ＞對照組(P均 ＜0.05)。見表1。

表1 三組PRL-3、VEGF的相對表達量比較(ˉx±s)

2.2 PRL-3、VEGF在各組月經(jīng)周期不同時相子宮內(nèi)膜組織的表達比較 異位組、在位組增生期與分泌期內(nèi)膜中PRL-3的表達均高于同時相對照組(P均＜0.05)。對照組中VEGF在分泌期內(nèi)膜中的表達高于增生期(P＜0.05)。見表2。

表2 各組月經(jīng)周期不同時相子宮內(nèi)膜中的PRL-3、VEGF相對表達量比較(ˉx±s)

2.3 VEGF與PRL-3表達的相關性 在位組VEGF與 PRL-3表達呈正相關關系(r=0.439，P ＜0.05)，二者在異位組及對照組中的表達未發(fā)現(xiàn)相關性(P均 ＞0.05)。見圖 1、2。

圖1 在位組PRL-3與VEGF相關性分析散點圖

圖2 對照組PRL-3與VEGF相關性分析散點圖

3 討論

PRL是一個新發(fā)現(xiàn)的基因，可通過激活細胞內(nèi)的Rho、MAPK信號通路使細胞增殖和分化，提高浸潤轉移能力，PRL-3過表達于細胞則表現(xiàn)出細胞運動能力增加和體外侵襲能力增強，可調(diào)節(jié)腫瘤細胞與細胞外基質的黏附［4］。目前研究發(fā)現(xiàn)，PRL-3過表達與多種腫瘤的轉移有關，其可促進細胞遷移和侵襲。有研究發(fā)現(xiàn)轉染PRL-3基因的中國倉鼠卵巢癌細胞的浸潤、侵襲、轉移能力顯著提高，如果PRL-3失活則不引起明顯的轉移［5］。目前已發(fā)現(xiàn)PRL-3在胃癌、卵巢癌、結直腸癌、肝癌的發(fā)生、侵襲、轉移中起重要作用。PRL-3作為臨床診斷腫瘤浸潤的標志物，其具體作用機制尚不明確［6］。已有研究顯示PRL-3與子宮內(nèi)膜異位癥異位內(nèi)膜的浸潤有關［7］。

本研究結果顯示，異位組中PRL-3的表達高于在位組和對照組，提示PRL-3的高表達可能與AM異位內(nèi)膜的浸潤轉移有關。PRL-3可能通過激活一系列信號通路增強內(nèi)膜細胞的增殖分化能力和浸潤轉移能力，導致子宮內(nèi)膜在肌層種植、生長、浸潤、轉移。在位組PRL-3的表達高于對照組則說明AM在位內(nèi)膜組織已與正常子宮內(nèi)膜有不同的生物學特征，即更容易發(fā)生浸潤、轉移的特征，易于在卵巢、腹膜等處浸潤、種植生長。

VEGF是目前己知最強的直接而特異作用于血管內(nèi)皮細胞的生長因子，被認為是介導內(nèi)膜血管生成的重要因子［8］，在血管形成過程中起著重要調(diào)控作用。它能特異地與其受體結合，刺激第二信使的形成，促使細胞變形、遷移、增殖及分裂，并增加微血管通透性［9］?，F(xiàn)已證實VEGF及其家族成員在生理與病理的血管生成過程中都是必不可少的誘導因子［10］，它可通過旁分泌機制刺激血管內(nèi)皮細胞增生、異位和結構形成，具有強大的促內(nèi)皮增殖、促血管生成作用。已有研究表明VEGF可以促進異位內(nèi)膜及其周圍血管生成并維持其活性，加速異位內(nèi)膜的種植和增殖［11］。本研究中對照組、在位組、異位組VEGF的表達逐漸增強。這說明AM患者在位及異位內(nèi)膜可能具有更強的促血管生成活性，此種內(nèi)膜碎片隨經(jīng)血逆流至異地后更容易促進新生血管的形成，以獲得充分的血液供應而存活。與Hur等的研究結果一致［12］。VEGF在正常月經(jīng)周期中受雌孕激素調(diào)節(jié)，而在異位內(nèi)膜中其表達失調(diào)，因此異位組和在位組VEGF在增生期及分泌期內(nèi)膜的表達無規(guī)律。

本研究結果表明，PRL-3、VEGF在AM的形成中可能存在某些相互關系。各種細胞外信號傳遞至細胞內(nèi)主要依靠MAPK通路介導［13］。研究發(fā)現(xiàn)，MAPK表達異常在細胞惡變和浸潤轉移過程中起重要作用。MAPK通路包括 ERK1/2 MAPK、JNK/SAPK MAPK、p38MAPK、BMK1/ERK5四條通路。有研究顯示［14］PRL-3可通過提高下游 ERK1/2、p130CaS、STAT3等的磷酸化水平從而開啟多條下游信號通路。在AM形成中，PRL-3可能通過與特定蛋白結合增強MAPK通路表達從而上調(diào)VEGF表達，誘導新血管生成，而VEGF也可通過一些途徑上調(diào)PRL-3表達，其具體機制還需進一步研究。

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