李汝佳

病理學(xué)教學(xué)切片的染色方法是關(guān)系到整個(gè)教學(xué)切片的質(zhì)量的重要環(huán)節(jié)，現(xiàn)在主要采用HE染色。我們發(fā)現(xiàn)在外面購買的切片有的質(zhì)量很差，使用沒多久就出現(xiàn)了褪色現(xiàn)象，為了保證教學(xué)質(zhì)量，我們都是自己制作教學(xué)切片。經(jīng)過我們多次試驗(yàn)，對(duì)其染色方法進(jìn)行了改良，提高了切片質(zhì)量，延長了使用周期?，F(xiàn)將改進(jìn)的染色方法總結(jié)如下。

1 資料與方法

1.1 材料 蘇木素，無水乙醇，冰醋酸，硫酸鋁鉀，甘油，伊紅，冰乙酸，95%乙醇，蒸餾水等。

1.2 染液配制方法

1.2.1 我們采用的是歐立式蘇木素，它的配制方法基本不變，但是改變了試劑的用量:蘇木素10 g溶解于無水乙醇500 ml中，然后加冰醋酸50 ml為A液。蒸餾水500 ml和硫酸鋁鉀30 g加熱攪拌溶解為B液。A液和B液混勻后倒入一個(gè)長頸三角瓶中，再加甘油500 ml，然后用棉花紗布做瓶塞塞好，置陽光下曬三個(gè)月后即可使用［1］。

1.2.2 伊紅的配制方法:伊紅3～5 g，蒸餾水1000 ml，冰乙酸50 ml，混勻后用濾紙過濾，把濾紙上的沉淀物烤干后再用95%乙醇1000 ml稀釋即可。

1.3 染色步驟:

1.3.1 脫蠟:二甲苯I 10 min→二甲苯II 5 min→95%乙醇I、95%乙醇II、95%乙醇III各片刻→流水洗2 min;

1.3.2 染色:蘇木素5 min→流水洗1 min→1%鹽酸乙醇分化數(shù)秒→流水洗10～15 min→0.5%伊紅乙醇10～15 s→75%乙醇、85%乙醇0.5 min、95%乙醇、100%乙醇各0.5 min。

1.3.3 吹干，封片。

2 結(jié)果

HE染色方法改良后切片色彩鮮艷，細(xì)胞核呈深藍(lán)色，細(xì)胞質(zhì)呈粉紅色，核膜、核仁、染色質(zhì)清晰，細(xì)胞界限明顯，整個(gè)染色對(duì)比度清晰。

3 結(jié)論

HE染色中配方甚多，染色效果也存差異，其中蘇木素是組織切片中最常用的細(xì)胞核染料。本文研究采用的改良?xì)W力式蘇木素染液中含有乙醇和冰醋酸，乙醇主要是對(duì)細(xì)胞質(zhì)固定作用，對(duì)細(xì)胞質(zhì)染色效果好。而冰醋酸是良好的核蛋白固定劑，適宜對(duì)細(xì)胞核的染色，特別是對(duì)染色質(zhì)的染色效果甚佳，由于它能使細(xì)胞膨脹，防止收縮又不凝固細(xì)胞漿中的蛋白，和乙醇起到互補(bǔ)作用［2］。

需要注意的是，染色中所給的時(shí)間只能做為參考，染色時(shí)間應(yīng)根據(jù)不同的組織，溫度濕度具體而定。封片用的中性樹膠在其中加少量二甲苯，這樣既能達(dá)到透明的目的，又能避免吸入過多的二甲苯氣體［3］。

通過改良染色技術(shù)，避免教學(xué)切片短時(shí)間內(nèi)因染色方法的問題而出現(xiàn)褪色的現(xiàn)象，提高了切片的整體效果，延長了使用周期，很多年后仍能用于教學(xué)，可以節(jié)省很多教學(xué)成本，為教學(xué)的順利進(jìn)行提供保證?？偠灾?，只有把各個(gè)環(huán)節(jié)都把好關(guān)了，才能制作出合格的病理教學(xué)切片。

［1］銀平章.臨床病理學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù).鄭州:中原農(nóng)民出版社，1997:43.

［2］楊麗.淺談石蠟切片HE染色技術(shù)改進(jìn).黔南民族醫(yī)專學(xué)報(bào)，2005，18(1):15-16.

［3］楊永平，張勇等.教學(xué)切片透明、封固技術(shù)的改進(jìn).菏澤醫(yī)專學(xué)報(bào)，2000，12(3):136.