李 爽，沈曉慶，章 琦，伊麗波，賈天柱＊

（1.遼寧中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，遼寧 大連 116600；2.國(guó)家中醫(yī)藥管理局中藥炮制重點(diǎn)研究室，遼寧省中藥炮制工程技術(shù)研究中心，遼寧 大連 116600）

薏苡仁，性甘、淡、涼，歸脾胃肺經(jīng)，具有健脾止瀉、利水滲濕之功效［1］。《藥品化義》載 ：“能健脾陰，大益腸胃，主治脾虛泄瀉?！敝兴幣谥茖W(xué)提出麩炒薏苡仁增強(qiáng)健脾止瀉作用，用于脾虛泄瀉，如治療脾虛泄瀉食少便溏的參苓白術(shù)散。而生薏苡仁更善于清熱利水除濕，主治小便不利，濕熱痹癥，如濕熱痹顆粒，且二者均被《中國(guó)藥典》收錄。本研究旨在了解薏苡仁炮制前后對(duì)動(dòng)物胃腸動(dòng)力的影響及其比較，以探討其治療脾虛泄瀉的機(jī)制和炮制工藝的原理意義，為藥品的生產(chǎn)和臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 儀器＼試劑與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器

SUNRISE酶標(biāo)儀：瑞士TECAN公司；UV－1800型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)：北京瑞利分析儀器公司；HH－4型數(shù)顯恒溫水浴鍋：國(guó)華電器有限公司；TGL－16C型離心機(jī)：上海安亭科學(xué)儀器廠；電子天平：上海光正醫(yī)療儀器有限公司。

1.2 藥材與試劑

薏苡仁生品購(gòu)自四川、貴州，經(jīng)本校中藥鑒定教研室翟延君教授鑒定為禾本科；植物薏苡Coix lacryma－jobi L.var.mayuen（Roman.）Stapf的干燥成熟種仁，薏苡仁麩炒品，按照國(guó)家藥典規(guī)定于中藥炮制實(shí)驗(yàn)室自制；利血平注射液：購(gòu)自天津金耀氨基酸有限公司，批號(hào)： 1003011；5%炭末混懸液（用10%的阿拉伯膠配制）；大鼠血管活性腸肽（VIP）酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒、大鼠胃泌素（GAS）酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒、大鼠胃動(dòng)素（MTL）酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒、大鼠生長(zhǎng)抑素（SS）酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自美國(guó)R＆D公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

昆明種小鼠，雌雄各半，體重18～22g，由大連醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：SCXK遼2008－0002。SD大鼠，雌雄兼用，體重200～250g，由大連醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：SCXK遼2008－0002。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 薏苡仁、麩炒薏苡仁混懸液制備

生品混懸液的制備：取薏苡仁生品，粉碎，將過(guò)120目篩粉末加蒸餾水制成濃度為0.8g·mL－1的生品混懸液。制品混懸液的制備：取麩炒薏苡仁樣品，粉碎，將過(guò)120目篩粉末加蒸餾水制成濃度為0.8g·mL－1的制品混懸液。

2.2 統(tǒng)計(jì)處理

2.3 薏苡仁、麩炒薏苡仁混懸液對(duì)正常及利血平致脾虛小鼠腸推進(jìn)和胃排空的測(cè)定［2，3，4］

60只小鼠隨機(jī)數(shù)字表法分為6組：空白對(duì)照組A，正常小鼠薏苡仁生品混懸液組（0.8g／mL）B，正常小鼠麩炒薏苡仁混懸液組（0.8g／mL）C，脾虛小鼠薏苡仁生品混懸液組（0.8g／mL）D，脾虛小鼠薏苡仁生品混懸液組（0.8g／mL）E和利血平模型組F，10只／組，除空白對(duì)照組A和利血平模型組F外均按0.1mL／10g體重劑量灌胃給藥，空白對(duì)照組和模型組給予等體積的生理鹽水。連續(xù)灌胃7天后，除空白對(duì)照組外各給藥組在給藥同時(shí)還皮下注射利血平，注射用量為0.15mg／kg。模型組小鼠皮下注射利血平，注射用量為0.15mg／kg。每天給藥1次，連續(xù)7天，末次給藥前禁食不禁水24h。第7天給予生理鹽水或給藥及注射利血平30min后，灌胃給予小鼠新鮮配制的5%炭末混懸液。10min后，脫頸椎處死小鼠，開(kāi)腹，結(jié)扎胃賁門(mén)和幽門(mén)，取胃，用濾紙拭干后稱(chēng)全重，然后沿胃大彎剪開(kāi)胃體，洗去胃內(nèi)容物后拭干，稱(chēng)凈重。以胃全重和胃凈重的差值為胃內(nèi)殘留物重，計(jì)算胃內(nèi)殘留物占所灌炭末混懸液重量的百分比為胃內(nèi)殘留率。結(jié)果見(jiàn)表1。同時(shí)迅速取出小腸，輕輕剝離腸系膜后鋪平，測(cè)量小腸全長(zhǎng)與炭末混懸液從幽門(mén)括約肌推至小腸末端的距離。以幽門(mén)至黑色炭末混懸液前沿的距離占幽門(mén)至盲腸部全長(zhǎng)的百分率為小腸推進(jìn)率。結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 薏苡仁、麩炒薏苡仁混懸液對(duì)正常及脾虛小鼠腸推進(jìn)的測(cè)定 （）

表1 薏苡仁、麩炒薏苡仁混懸液對(duì)正常及脾虛小鼠腸推進(jìn)的測(cè)定 （）

注：與空白組比較，△P＜0.05；與模型組比較，＊P＜0.05

組別 n 小腸推進(jìn)率（%）A 10 57.14±1.06正常薏苡仁生品組B 10 58.93±3.01正常薏苡仁麩炒組C 10 60.05±2.48脾虛薏苡仁生品組D 10 50.55±5.16＊△脾虛薏苡仁麩炒組E 10 56.63±4.05＊△脾虛模型組F 10 29.67±10.13空白對(duì)照組△

由表中數(shù)據(jù)可知，模型組小鼠相對(duì)于空白組小鼠小腸推進(jìn)率明顯降低，與空白組比較有顯著性差異（P＜0.05）；生薏苡仁混懸液組和麩炒薏苡仁混懸液組也可明顯提高利血平致脾虛小鼠小腸推進(jìn)率，與模型組比較有顯著性差異（P＜0.05）；薏苡仁麩炒品混懸液對(duì)小鼠小腸推進(jìn)率的提高影響強(qiáng)于薏苡仁生品，且二者具有顯著性差異（P＜0.05）；但是薏苡仁生品及麩炒品對(duì)于正常小鼠的小腸推進(jìn)率影響無(wú)顯著性差異。

表2 薏苡仁、麩炒薏苡仁混懸液對(duì)正常及脾虛小鼠胃排空的測(cè)定（）

表2 薏苡仁、麩炒薏苡仁混懸液對(duì)正常及脾虛小鼠胃排空的測(cè)定（）

注：與模型組比較，＊P＜0.05；與空白組比較，△P＜0.05

組別 n 胃排空率（%）A 10 58.42±3.02正常薏苡仁生品組B 10 59.67±1.17正常薏苡仁麩炒組C 10 60.45±4.43脾虛薏苡仁生品組D 10 46.51±6.26＊脾虛薏苡仁麩炒組E 10 51.63±7.05＊脾虛模型組F 10 28.98±10.83空白對(duì)照組＊△

模型組小鼠胃殘留率相對(duì)于空白組小鼠明顯升高，與空白組比較有顯著性差異（P＜0.05）；薏苡仁生品混懸液組和薏苡仁麩炒品混懸液組也可明顯降低利血平致脾虛小鼠胃殘留率，與模型組比較有顯著性差異（P＜0.05）；薏苡仁麩炒品混懸液對(duì)小鼠胃排空率的降低作用強(qiáng)于薏苡仁生品，且二者具有顯著性差異（P＜0.05）；但薏苡仁生品及麩炒品對(duì)正常小鼠的胃排空率的影響無(wú)顯著性差異。

2.4 薏苡仁、麩炒薏苡仁混懸液對(duì)脾虛小鼠腹瀉指數(shù)以及脾虛指數(shù)的測(cè)定

2.4.1 薏苡仁、麩炒薏苡仁混懸液對(duì)脾虛小鼠腹瀉指數(shù)的測(cè)定

40只小鼠隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為4組：空白對(duì)照組A、脾虛模型組B、脾虛小鼠生薏苡仁混懸液（0.8g／mL）組C、脾虛小鼠麩炒薏苡仁混懸液（0.8g／mL）組D，10只／組，C、D組按0.1mL／10g體重劑量灌胃給藥，A、B組灌喂等體積生理鹽水，連續(xù)灌胃7天后，除空白對(duì)照組外各給藥組在給藥同時(shí)還皮下注射利血平，注射用量為0.15mg／kg。模型組小鼠皮下注射利血平，注射用量為0.15mg／kg。每天給藥1次，連續(xù)7天，第7天給予生理鹽水或給藥及注射利血平后，把小鼠放在單個(gè)放有濾紙的鼠籠內(nèi)，每隔1h換濾紙并記錄小鼠稀糞點(diǎn)數(shù)，連續(xù)觀察5h，比較組間腹瀉指數(shù)。根據(jù)文獻(xiàn)［5］，糞便次數(shù)以每粒或每堆為1次。

檢測(cè)指標(biāo)：腹瀉指數(shù)＝稀便率×稀便級(jí)。稀便率＝每只動(dòng)物所排稀便數(shù)與總便數(shù)之比。稀便級(jí)＝以稀便污染濾紙形成污跡面積的大小等級(jí)，分為4級(jí)，見(jiàn)表3。

表3 小鼠糞便分級(jí)

統(tǒng)計(jì)時(shí)先逐個(gè)統(tǒng)計(jì)每一堆稀便的級(jí)數(shù)，然后將該鼠所有稀便級(jí)數(shù)相加除以稀便次數(shù)，得到稀便的平均級(jí)數(shù)（稀便級(jí)數(shù)直徑的測(cè)量：糞便形狀為圓形則直接測(cè)量直徑；若糞便形狀為橢圓形則測(cè)量最長(zhǎng)和近似圓的直徑，相加除2）。結(jié)果見(jiàn)表4。

由表中數(shù)據(jù)可知，脾虛模型小鼠脾虛指數(shù)大于空白組，且具有顯著性差異（P＜0.05），薏苡仁生品混懸液組和生品混懸液組與脾虛模型組比較均可降低腹瀉指數(shù)，且麩炒品作用強(qiáng)于生品，均有顯著性差異（P＜0.05）。

表4 薏苡仁，麩炒薏苡仁混懸液對(duì)脾虛小鼠腹瀉指數(shù)的測(cè)定（）

表4 薏苡仁，麩炒薏苡仁混懸液對(duì)脾虛小鼠腹瀉指數(shù)的測(cè)定（）

注：與空白組比較，＊P＜0.05；與模型組比較，△P＜0.05

A 10 0±0 0±0 0±0模型組B 10 1±0＊ 1.9±2.13＊ 1.9±2.13＊薏苡仁生品組C 10 0.87±3.24＊△ 1.7±5.24＊△1.48±4.76＊△薏苡仁麩炒品組D 10 0.63±2.89＊△ 1.1±2.77＊△0.69±2.81組別 只數(shù) 稀便率 稀便級(jí) 腹瀉指數(shù)空白組＊△

2.4.2 薏苡仁、麩炒薏苡仁混懸液對(duì)脾虛小鼠脾虛指數(shù)的測(cè)定

將“2.4.1”實(shí)驗(yàn)記錄完腹瀉指數(shù)后的小鼠脫椎處死，解剖腹部，取出脾臟剝離表面脂肪，準(zhǔn)確稱(chēng)重并計(jì)算脾指數(shù)：

脾指數(shù)＝脾重量（mg）／小鼠重量（g）×10，結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 薏苡仁，麩炒薏苡仁混懸液對(duì)脾虛小鼠脾虛指數(shù)的測(cè)定（）

表5 薏苡仁，麩炒薏苡仁混懸液對(duì)脾虛小鼠脾虛指數(shù)的測(cè)定（）

注：與空白組比較，＊P＜0.05；與模型組比較，△P＜0.05

A 10 448±10.30 31±9.89 1.45±9.98模型組B 10 388±8.21＊ 28±3.57＊ 1.36±4.76＊薏苡仁生品組C 10 401±3.11＊△ 29±2.88＊△ 1.38±2.97＊△薏苡仁麩炒品組D 10 436±7.62＊△ 30±3.51＊△ 1.44±5.80脾指數(shù)空白組組別 只數(shù) 脾重量（mg） 體重（g）＊△

由表中數(shù)據(jù)可知，利血平致脾虛模型組小鼠脾指數(shù)低于空白組，具有顯著性差異（P＜0.05），薏苡仁麩炒品和生品與模型組比較均可提高脾指數(shù)，且麩炒品作用強(qiáng)于生品，具有顯著性差異（P＜0.05）。

2.5 薏苡仁、麩炒薏苡仁混懸液對(duì)脾虛大鼠胃腸激素的測(cè)定［6］

40只大鼠隨機(jī)分為4組：空白對(duì)照組A，薏苡仁生品混懸液組（0.8g／mL）B，薏苡仁麩炒品混懸液組（0.8g／mL）C，和利血平模型組（0.5mg／kg）D，每組10只，各給藥組均按0.7mL／100g體重劑量灌胃給藥，空白對(duì)照組給予等體積的生理鹽水，連續(xù)7天后，除空白對(duì)照組外各給藥組在給藥同時(shí)還腹腔注射利血平，注射用量為0.5mg／kg。每天給藥1次，連續(xù)7天，末次給藥前禁食不禁水24h。造模成功后，用眼眶取血法取血4mL。將2mL移至含10%肝素的EP管中，用高速臺(tái)式離心機(jī)3 000轉(zhuǎn)離心10min，取上清液即為血漿樣品，轉(zhuǎn)移至新EP管中，－20℃保存。剩余血液移入EP管中，離心10min（3 000轉(zhuǎn)／min），取上清液即為血清樣品，轉(zhuǎn)移至新EP管中，－20℃保存。用ELISA試劑盒測(cè)定血漿中胃動(dòng)素 （MTL）和血管活性腸肽（VIP）的含量；用ELISA試劑盒測(cè)定血清中胃泌素（GAS）和生長(zhǎng)抑素（SS）的含量。具體操作按照試劑盒內(nèi)說(shuō)明進(jìn)行。結(jié)果見(jiàn)表6。

表6 薏苡仁、麩炒薏苡仁混懸液對(duì)脾虛大鼠血漿MTL、VIP和血清GAS、SS含量的測(cè)定（）

表6 薏苡仁、麩炒薏苡仁混懸液對(duì)脾虛大鼠血漿MTL、VIP和血清GAS、SS含量的測(cè)定（）

注：與模型組比較，＊P＜0.05；與空白組比較，△P＜0.05

組別 n MTL（ng／L） VIP（ng／L） GAS（ng／L） SS（μg／L）8±15.75模型組B 10 11.02±0.49△ 76.82±8.91△ 110.17±17.96△ 109.54±8.51△薏苡仁生品組C 10 13.92±3.38△＊ 63.35±9.71△＊ 112.51±13.56△＊ 110.60±8.27△＊薏苡仁麩炒品組D 10 15.46±1.16△＊ 58.22±15.21△＊ 118.73±8.71△＊ 116.86±15.31空白組 A 10 16.20±3.12 51.54±6.07 127.36±9.05 118.0△＊

ELISA法檢測(cè)各組大鼠血漿中MTL、VIP和大鼠血清中GAS、SS的含量，大鼠脾虛造模后，與空白組相比大鼠血漿中MTL含量顯著降低，VIP含量顯著升高。血清中GAS和SS含量均有顯著降低。薏苡仁生品及麩炒品混懸液組均可以升高血漿中MTL含量，降低血漿中VIP含量，并升高血清中GAS和SS的含量。在MTL含量測(cè)定中薏苡仁生品組及麩炒品組與模型組均有顯著性差異（P＜0.05）；在VIP含量測(cè)定中薏苡仁生品組及麩炒品組與模型組均有顯著性差異（P＜0.05）；在GAS和SS含量測(cè)定中僅麩炒薏苡仁組與模型組有顯著性差異（P＜0.05），但薏苡仁生品組與模型組之間未見(jiàn)顯著性差異。

3 討論

中醫(yī)理論中提出，脾為后天之本，乃氣血生化之源。脾胃虛弱，則受納運(yùn)化水谷失職，導(dǎo)致機(jī)體胃脘脹痛，腹痛，腹脹等癥［7］。中藥炮制理論中提出，薏苡仁生品長(zhǎng)于利水滲濕，麩制后則長(zhǎng)于健脾止瀉，因此本次實(shí)驗(yàn)從脾虛病證入手，考察薏苡仁及其麩炒品對(duì)脾虛小鼠（大鼠）胃腸運(yùn)動(dòng)影響并進(jìn)行比較，以便進(jìn)一步解析薏苡仁經(jīng)過(guò)麩炒后如何增強(qiáng)健脾止瀉的功效。

利血平造成動(dòng)物脾虛模型是較經(jīng)典的方法之一，它所表現(xiàn)出的癥狀與臨床脾虛癥狀十分相似，在一定程度上反映了與脾虛類(lèi)似的病理變化，并且具有條件易控制、模型較穩(wěn)定的特點(diǎn)。因此在本次實(shí)驗(yàn)中我們選擇給動(dòng)物注射利血平，造成脾虛模型，以便能更準(zhǔn)確更真實(shí)地反應(yīng)薏苡仁生制品對(duì)脾虛小鼠（大鼠）病癥的影響。本次實(shí)驗(yàn)中利血平模型動(dòng)物出現(xiàn)了脾虛證典型的攝食量減少，被毛粗糙，自發(fā)活動(dòng)減少，倦臥嗜睡，便溏等癥，說(shuō)明此次利血平造模成功。

關(guān)于薏苡仁生品及麩炒品混懸液對(duì)利血平致脾虛小鼠腸推進(jìn)率和胃排空的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，薏苡仁生制品均可提高脾虛模型小鼠小腸推進(jìn)率和胃排空率，麩炒薏苡仁混懸液較生品混懸液效果更好，但薏苡仁生制品對(duì)正常小鼠的小腸推進(jìn)率和胃排空率無(wú)明顯作用。說(shuō)明炮制之后薏苡仁對(duì)小鼠胃腸促進(jìn)作用有所提高，這一差別的藥理機(jī)制還有待于我們進(jìn)一步研究。

關(guān)于薏苡仁生制品對(duì)于脾虛小鼠的腹瀉指數(shù)和脾指數(shù)的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出薏苡仁生制品均可降低脾虛小鼠的腹瀉指數(shù)，提高脾虛小鼠的脾指數(shù)，且麩炒品作用明顯強(qiáng)于生品。進(jìn)一步驗(yàn)證了薏苡仁麩炒后健脾止瀉作用增強(qiáng)的炮制原理。

脾胃學(xué)說(shuō)從宏觀把握脾胃生理病理規(guī)律，胃腸激素則補(bǔ)其不足，從微觀入手。脾胃學(xué)說(shuō)與胃腸激素兩者結(jié)合，互補(bǔ)不足、相輔相成，為脾胃病的生理病理研究提供更好的研究思路8。脾虛證是中醫(yī)脾胃證候中的常見(jiàn)證型，患者常因素體脾虛或飲食不節(jié)、情志因素、勞逸失調(diào)等原因引起脾胃的功能衰弱或不足。胃腸激素是由散在分布于消化道的內(nèi)分泌細(xì)胞和腸神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元所分泌的起激素作用的生物活性肽，它們主要分布存在于胃腸道中［9］。許多胃腸激素對(duì)消化道運(yùn)動(dòng)有促進(jìn)或抑制作用。因此在本次實(shí)驗(yàn)中，我們選擇了MTL、VIP、GAS、SS這四個(gè)比較有代表性的胃腸激素，從微觀層面揭示薏苡仁生制品對(duì)脾虛證相關(guān)胃腸運(yùn)動(dòng)的作用機(jī)制，為臨床治療脾虛證提供胃腸激素評(píng)價(jià)指標(biāo)和依據(jù)。胃動(dòng)素（MTL）是由22個(gè)氨基酸組成的直鏈多肽，具有促進(jìn)胃腸收縮及小腸分節(jié)運(yùn)動(dòng)提高食管下括約肌緊張性的作用［10］。研究表明MTL與胃腸動(dòng)力障礙密切相關(guān)。胃泌素（GAS）主要由胃竇和十二指腸的G細(xì)胞分泌，是由7個(gè)氨基酸組成的多肽，幾乎對(duì)整個(gè)胃腸道均有作用，能刺激胃酸、胃蛋白酶的分泌，營(yíng)養(yǎng)胃黏膜，促胃腸肌收縮，從而促進(jìn)胃腸運(yùn)動(dòng)。血管活性肽（VIP）是調(diào)節(jié)消化系統(tǒng)功能的重要胃腸激素之一，它是由28個(gè)氨基酸組成的多肽。VIP具有舒張血管括約肌，刺激胰液和腸液分泌，保護(hù)腸粘膜，調(diào)節(jié)胃腸吸收等功能。血漿中VIP的含量，在一定程度上可反映胃腸道的運(yùn)動(dòng)狀態(tài)。生長(zhǎng)抑素（SS）是存在于胃黏膜、胰島、胃腸道神經(jīng)、垂體后葉和中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的肽激素。它能夠抑制胃酸分泌、胃蛋白酶和胃泌素釋放，進(jìn)而抑制胃腸蠕動(dòng)，并且還能抑制下丘腦及腦垂體中促生長(zhǎng)素的釋放。生長(zhǎng)抑素能夠抑制生理性?xún)?nèi)外分泌反應(yīng)，抑制胃IMC和胃排空，抑制回腸和膽囊收縮以及抑制腸道內(nèi)容物轉(zhuǎn)運(yùn)。利血平造模后出現(xiàn)SS升高，進(jìn)而起到抑制大鼠胃腸蠕動(dòng)以及回腸和膽囊收縮作用，導(dǎo)致消化功能抑制，而出現(xiàn)胃腸動(dòng)力不足［11］。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明脾虛模型組大鼠與空白組相比大鼠血漿中MTL含量顯著降低，VIP含量顯著升高。血清中GAS和SS含量均有顯著降低。薏苡仁及其麩炒品能明顯改善脾虛大鼠的狀態(tài)，并均可升高血漿中MTL含量，降低血漿中VIP含量，在MTL和VIP含量測(cè)定中薏苡仁麩炒品作用強(qiáng)于生品，但GAS和SS含量測(cè)定中僅麩炒薏苡仁組與模型組相比有所提高，但薏苡仁生品組與模型組之間未見(jiàn)顯著性影響。同為一種藥材，但療效有所不同，可能正是由于輔料麥麩的參與，在一定程度上改變了薏苡仁化合物的質(zhì)與量造成的，對(duì)這一方面的研究還有待于我們更進(jìn)一步考察。這一結(jié)果也為我們進(jìn)一步研究薏苡仁生熟的異同提供了一個(gè)研究思路。

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