陳 華，伍 燕，王嬌華

新生兒溶血病 (hemolytic disease of the newborn，HDN)是由于母嬰血型不合引起的同種免疫性疾病，可見(jiàn)于 ABO、Rh、MN等血型系統(tǒng)［1］，早期檢測(cè)診斷和治療可避免造成新生兒膽紅素腦病等嚴(yán)重后果。傳統(tǒng)的試管法因操作步驟多、時(shí)間長(zhǎng)、重復(fù)性較差等得不到重視。微柱凝膠技術(shù)是近年來(lái)應(yīng)用于新生兒溶血病抗體檢測(cè)的新技術(shù)，因其具有靈敏度高、結(jié)果穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)，受到廣泛關(guān)注。本研究對(duì)這兩種方法進(jìn)行比較，分析結(jié)果如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2012－01－01—05－31在海口市人民醫(yī)院住院的臨床表現(xiàn)為高膽紅素血癥、診斷為HDN的患兒62例，其中男38例，女24例;年齡為新生兒出生后12 h～7 d;母親血型均為O型，Rh陽(yáng)性;患兒血型為A型31例，B型31例，Rh均為陽(yáng)性。

1.2 HDN診斷標(biāo)準(zhǔn) 根據(jù)文獻(xiàn) ［2］中標(biāo)準(zhǔn)并符合以下條件:(1)母嬰ABO血型不合;(2)新生兒早期出現(xiàn)高膽紅素血癥 (病理性黃疸)和 (或)貧血;(3)HDN 3項(xiàng)試驗(yàn) (即直接抗人球蛋白試驗(yàn)、游離抗體試驗(yàn)、抗體放散試驗(yàn))中1項(xiàng)陽(yáng)性。

1.3 儀器和試劑 微柱凝膠卡、孵育器及離心機(jī)由達(dá)亞美公司提供，抗A、抗B、Rh定型血清由長(zhǎng)春博德生物技術(shù)有限責(zé)任公司提供;ABO反定型紅細(xì)胞、直接抗人球蛋白試劑由上海市血液生物公司提供。

1.4 方法

1.4.1 血型鑒定 分別對(duì)母親及新生兒進(jìn)行ABO及Rh血型鑒定。

1.4.2 傳統(tǒng)試管法 離心分離患兒血標(biāo)本紅細(xì)胞和血清，紅細(xì)胞用0.9%氯化鈉溶液洗3次后配成濃度為5%的懸液。取紅細(xì)胞懸液1滴加廣譜抗人球蛋白試劑2滴，離心，觀察直接抗人球蛋白試驗(yàn)結(jié)果;取試管3支，分別標(biāo)記 A、B、O，每管加入患兒血清和放散液2滴，按標(biāo)記分別加入 A、B、O試劑紅細(xì)胞 1滴，37℃孵育1 h后，用0.9%氯化鈉溶液洗3次，加入抗人球蛋白試劑2滴，離心，觀察抗體游離試驗(yàn)、抗體放散試驗(yàn)結(jié)果。

1.4.3 微柱凝膠技術(shù)檢測(cè)法 在凝膠卡中加入患兒0.8%三洗紅細(xì)胞50 μl，離心，觀察直接抗人球蛋白試驗(yàn)結(jié)果;在凝膠卡中加入患兒血清或紅細(xì)胞放散液50 μl，按標(biāo)記分別加入 50 μl 0.8%A、B及O型試劑紅細(xì)胞懸液，37℃孵育15 min，離心10 min，觀察抗體游離試驗(yàn)、抗體放散試驗(yàn)結(jié)果。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

62例患兒血標(biāo)本，采用微柱凝膠技術(shù)檢出直接抗人球蛋白試驗(yàn)陽(yáng)性54例(87.1%)，抗體游離試驗(yàn)陽(yáng)性56例(90.3%)，抗體放散試驗(yàn)陽(yáng)性59例(95.2%);采用試管法檢出直接抗人球蛋白試驗(yàn)陽(yáng)性42例 (67.7%)，抗體游離試驗(yàn)陽(yáng)性48例 (77.4%)，抗體放散試驗(yàn)陽(yáng)性52例 (83.9%);兩種方法直接抗人球蛋白試驗(yàn)陽(yáng)性率、抗體游離試驗(yàn)陽(yáng)性率、抗體放散試驗(yàn)陽(yáng)性率比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (χ2=6.64，P=0.01;χ2=3.86，P=0.04; χ2=4.21，P=0.04)。

3 討論

母嬰ABO血型不合所致新生兒溶血在 HDN 中占多數(shù)［3－4］，是新生兒高膽紅素血癥常見(jiàn)的病因。雖然多數(shù)新生兒ABO溶血病臨床表現(xiàn)較輕，預(yù)后較好，但仍有部分表現(xiàn)較為嚴(yán)重的病例［5］。其中高膽紅素血癥可導(dǎo)致神經(jīng)系統(tǒng)損害，嚴(yán)重時(shí)出現(xiàn)核黃疸甚至死亡。因此，早期診斷ABO血型不合新生兒溶血病，并積極治療，可以有效減少后遺癥的發(fā)生率，對(duì)新生兒溶血病的防治和優(yōu)生優(yōu)育均有重要的臨床意義。

HDN傳統(tǒng)的檢測(cè)方法是試管法，該法操作繁雜，靈敏度低，結(jié)果不易判斷，漏檢率高，易造成早期漏檢。目前，微柱凝膠技術(shù)作為一項(xiàng)免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)［6］，在HDN檢測(cè)診斷中已逐漸推廣應(yīng)用［7］。該技術(shù)具有操作簡(jiǎn)單，靈敏度高、重復(fù)性好，結(jié)果穩(wěn)定易判斷、技術(shù)易掌握等優(yōu)點(diǎn)，較傳統(tǒng)的試管法更能準(zhǔn)確地檢測(cè)患兒血液中的免疫性IgG抗體和效價(jià)。本研究利用微柱凝膠技術(shù)和試管法對(duì)62例HDN的患兒血標(biāo)本分別進(jìn)行溶血三項(xiàng)試驗(yàn)，檢測(cè)結(jié)果均高于張勇萍等［8］報(bào)道的結(jié)果。微柱凝膠檢測(cè)技術(shù)的靈敏度明顯高于試管法。

抗體放散試驗(yàn)是新生兒溶血三項(xiàng)試驗(yàn)中最敏感的試驗(yàn)［9］，可直接反映IgG型抗A(B)抗體特異性致敏患兒紅細(xì)胞的狀況，是診斷新生兒溶血病的確診試驗(yàn)［10］。從試驗(yàn)結(jié)果可見(jiàn)2種檢測(cè)方法中抗體放散試驗(yàn)陽(yáng)性率最高，而直接抗人球蛋白試驗(yàn)陽(yáng)性率最低，這可能因剛出生的新生兒ABO抗原發(fā)育仍不完全，抗原位點(diǎn)少，不足以和抗人球蛋白產(chǎn)生明顯可見(jiàn)的凝集反應(yīng)，而結(jié)合有足夠IgG抗體分子的年輕紅細(xì)胞又大部分已被溶解掉等造成。因此在對(duì)HDN的診斷中，除直接抗人球蛋白試驗(yàn)外，還要結(jié)合抗體游離試驗(yàn)和抗體放散試驗(yàn)以及膽紅素的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行綜合分析，以便提高檢測(cè)診斷的準(zhǔn)確性。

1 肖倩，辛榮傳，周益強(qiáng)，等.孕母IgG抗體效價(jià)與新生兒溶血病發(fā)病率的相關(guān)性研究 ［J］.中國(guó)婦幼保健，2009，24(1):71－72.

2 魏曉萍，王明真，付軍，等.孕婦血型抗體效價(jià)與新生兒 ABO血型和ABO溶血的關(guān)系［J］.中國(guó)生育健康雜志，2004，15(1):25.

3 Drabik－Clary K，Reddy VV，Benjamin WH，et al.Severe hemolytic disease of the newborn in a group B African－American infant deliv－ered by a group O mother［J］.Ann Clin Lab Sci，2006，36(2):205 －207.

4 楊紹明，吳巧英，羅洪清，等.韶關(guān)地區(qū)新生兒溶血病與孕婦血清相關(guān)抗體的相關(guān)性分析［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志，2005，13(5):875－877.

5 Miqdad AM，Abdelbasit OB，Shaheed MM，et al.Intravenous immunoglobulin G(IVIG)therapy for significant hyperbilirubinemia in ABO hemolytic disease of the newborn ［J］.J Matern Fetal Neonatal Med，2004，16(3):163－166.

6 武峰，劉亞玲.微柱凝集技術(shù)在血型免疫學(xué)相關(guān)檢測(cè)中的應(yīng)用進(jìn)展［J］.臨床血液學(xué)雜志，2008，21(1):101－104.

7 Cate JC，Reilly N.Evaluation and implementation of thegel test for indirect antiglobulin testing in a communityhospital laboratory ［J］.Arch Pathol Lab Med，1999，123(8):693－694.

8 張勇萍，安寧，李娜，等.微柱凝膠法與試管法檢測(cè)新生兒溶血病免疫性抗體的比較［J］.臨床血液學(xué)雜志，2011，24(12):697－701.

9 柳愛(ài)華，儲(chǔ)穆庭.2537例孕婦ABO血型抗體效價(jià)檢測(cè)結(jié)果及分析 ［J］.現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2011，38(1):49－51.

10 蔡興權(quán)，夏蘭，符小玲，等.259例新生兒溶血病的臨床分析 ［J］.臨床血液學(xué)雜志 (輸血與檢驗(yàn)版)，2010，23(8):490－491.