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        微柱凝膠法抗人球蛋白試驗(yàn)檢測孕婦IgG抗體效價(jià)診斷新生兒溶血病的應(yīng)用研究

        2012-08-20 05:46:58陳曉軍
        關(guān)鍵詞:抗人微柱效價(jià)

        陳曉軍,艾 清

        (1.長春市婦產(chǎn)醫(yī)院 檢驗(yàn)科,吉林 長春 130042;2.吉林大學(xué)第一醫(yī)院 檢驗(yàn)科)

        微柱凝膠法抗人球蛋白試驗(yàn)檢測孕婦IgG抗體效價(jià)診斷新生兒溶血病的應(yīng)用研究

        陳曉軍1,艾 清2*

        (1.長春市婦產(chǎn)醫(yī)院 檢驗(yàn)科,吉林 長春 130042;2.吉林大學(xué)第一醫(yī)院 檢驗(yàn)科)

        *通訊作者

        微柱凝膠法免疫檢測技術(shù)是20世紀(jì)90年代進(jìn)入我國并逐步廣泛應(yīng)用于臨床的實(shí)驗(yàn)室項(xiàng)目檢測??谷饲虻鞍自囼?yàn)是目前對IgG抗體檢測國際公認(rèn)的最經(jīng)典、可靠的實(shí)驗(yàn)室方法。由于傳統(tǒng)的間接抗人球蛋白試驗(yàn)(試管法)操作繁瑣、時(shí)間長、重復(fù)性不好等缺點(diǎn),一直不能被臨床常規(guī)應(yīng)用。微柱凝膠抗人球蛋白試驗(yàn)比試管法抗人球蛋白試驗(yàn)敏感性高10倍左右[1],且方法簡單、耗時(shí)少、結(jié)果可重復(fù)、試驗(yàn)流程標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點(diǎn)。本文就微柱凝膠抗人球蛋白試驗(yàn)與試管法抗人球蛋白分別對225例懷孕3個(gè)月以上孕婦的血清進(jìn)行IgG抗體效價(jià)檢測,現(xiàn)報(bào)道如下。

        1 材料和方法

        1.1 材料

        1.1.1 檢測對象 2009年8月至2010年6月期間,懷孕3個(gè)月以上到本院進(jìn)行產(chǎn)前檢查的孕婦225例。年齡28-38周歲,ABO血型為O型的孕婦,丈夫ABO血型均為A型、B型、AB型。

        1.1.2 主要試劑 微柱凝膠抗人球蛋白檢測卡(長春博迅生物技術(shù)有限責(zé)任公司生產(chǎn))。廣譜抗人球蛋白試劑(長春博德生物技術(shù)有限責(zé)任公司生產(chǎn)),2-Me試劑(長春博德生物技術(shù)有限責(zé)任公司生產(chǎn))。

        1.1.3 主要儀器 TD-3A型血型血清學(xué)用離心機(jī)和FYQ型免疫微柱孵育器(長春博研科學(xué)儀器有限責(zé)任公司生產(chǎn))。光學(xué)顯微鏡(日本Olympus CX-31)。

        1.2 方法

        1.2.1 標(biāo)本處理 取試管一支,加受檢孕婦血清0.2ml及2-Me試劑0.2ml,加塞混合,置37℃水浴30min,充分破壞血清中IgM抗體,另取6支干凈試管,第1支試管加處理后血清50μl和350μl生理鹽水混勻,第2-6支試管分別加入200μl生理鹽水,從第1支試管中吸取200μl混合液加入第2支試管中混勻,再從第2支試管中吸取200μl混合液加入第3支試管中混勻,依次倍比稀釋。第1-6支試管稀釋倍數(shù)依次為:1∶16、1∶32、1∶64、1∶128、1∶256、1∶512。

        1.2.2 采用微柱凝膠抗人球蛋白試驗(yàn)對受檢孕婦血清進(jìn)行IgG抗體效價(jià)檢測:取出微柱凝膠抗人球蛋白檢測卡,標(biāo)記標(biāo)本號(hào),6孔中分別加入與該孕婦丈夫ABO血型同型的0.8%紅細(xì)胞懸液50μl,從第1-6支試管中各取50μl混合液分別加入微柱凝膠抗人球蛋白檢測卡對應(yīng)的孔中,置37℃孵育箱中孵育15min后,離心5min,肉眼觀察結(jié)果。

        1.2.3 采用試管法抗人球蛋白試驗(yàn)對同一受檢孕婦血清進(jìn)行IgG抗體效價(jià)檢測:取六支標(biāo)記好的試管,六管中分別加入與該孕婦丈夫ABO血型同型的2%紅細(xì)胞懸液100μl,用生理鹽水反復(fù)洗滌4次,再對應(yīng)加入上述第1-6支試管中混勻液100μl,37℃水浴60min后,在反復(fù)洗滌4次,在六支試管中分別加入廣譜抗人球蛋白試劑各100μl,離心1min(1 000 r/min),輕輕搖動(dòng)試管,觀察血凝結(jié)果。

        2 結(jié)果

        結(jié)果判定:以凝集強(qiáng)度≥1+判定為陽性結(jié)果,凝集強(qiáng)度<1+判定為陰性結(jié)果。注:由于抗體效價(jià)1∶4、1∶8在診斷新生兒溶血病中的意義不明確,故本實(shí)驗(yàn)研究將抗體效價(jià)<1∶16視為陰性[2]。

        兩種方法的檢測結(jié)果見表1。從表可見:微柱凝膠抗人球蛋白試驗(yàn)較試管法抗人球蛋白試驗(yàn)靈敏度高,且滴度越高,差異越明顯。

        3 討論

        母嬰ABO血型不合是新生兒溶血病的重要原因,對ABO血型為O型的孕婦,丈夫ABO血型為A型、B型、AB型者,在孕期進(jìn)行IgG抗體效價(jià)檢測是非常有必要的,對有異常者(目前臨床普遍認(rèn)為IgG抗體效價(jià)≥1:64有意義[2]),可以早發(fā)現(xiàn)早治療,可以有效的預(yù)防及減少由母嬰ABO血型不合引起的新生兒溶血病的發(fā)生。

        表1 225例微柱凝膠法與試管法抗人球蛋白(IgG)抗體效價(jià)檢測結(jié)果比較

        傳統(tǒng)使用的試管法抗人球蛋白試驗(yàn)操作步驟煩瑣、時(shí)間長,不能標(biāo)準(zhǔn)化、人為因素干擾大等缺點(diǎn),很難在臨床推廣應(yīng)用。微柱凝膠抗人球蛋白試驗(yàn)是建立在傳統(tǒng)的試管法抗人球蛋白試驗(yàn)基礎(chǔ)之上的一種新方法,在凝膠中進(jìn)行反應(yīng),利用紅細(xì)胞的可變形性的特點(diǎn),通過離心力作用使未經(jīng)抗人球蛋白橋聯(lián)的單個(gè)紅細(xì)胞可通過凝膠介質(zhì)的原理,用以檢測血清中的IgG抗體,并采用目測直接觀察到檢測結(jié)果。且對陰性、陽性結(jié)果一目了然,避免了試管血凝法憑經(jīng)驗(yàn)判斷結(jié)果的錯(cuò)誤??谷饲虻鞍自囼?yàn)是目前國際公認(rèn)的最可靠的不完全抗體的檢測方法,由于繁瑣的操作程序一直不能實(shí)現(xiàn)臨床常規(guī)化,微柱凝膠抗人球蛋白試驗(yàn)法徹底改變了試管法抗人球蛋白試驗(yàn)的弊端,其無需繁瑣的洗滌過程、操作方法簡單、結(jié)果準(zhǔn)確、重復(fù)性好、標(biāo)本用量少(減少操作污染的同時(shí)還節(jié)省患者的紅細(xì)胞和血清,特別有利于新生兒及某些血液病標(biāo)本量很少時(shí)的檢測[3])等優(yōu)點(diǎn)已被臨床廣泛應(yīng)用。

        綜上所述,微柱凝膠抗人球蛋白試驗(yàn)應(yīng)用于孕婦IgG抗體效價(jià)檢測是可行的。

        [1]李 勇,楊貴貞.人類紅細(xì)胞血型血清學(xué)實(shí)用理論與實(shí)驗(yàn)技術(shù)[M].北京:中國科學(xué)技術(shù)出版社,1999:251.

        [2]魏亞明,歐英賢.紅細(xì)胞免疫抗體檢查在輸血及產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用[J].中國輸血雜志,2000,13(4):266

        [3]李 勇,馬學(xué)年.實(shí)用血液免疫學(xué)血型理論與實(shí)驗(yàn)技術(shù)[M].北京:科學(xué)出版社,2006:637.

        1007-4287(2012)02-0330-02

        2010-11-30)

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