宋瑞麗

(鄭州鐵路職業(yè)技術(shù)學(xué)院，河南 鄭州 450052)

山藥為薯蕷科植物薯蕷(Dioscorea opposita Thunb)的干燥根莖，主治脾虛食少，久瀉不止，肺虛喘咳，腎虛遺精，帶下，尿頻，虛熱消渴［1］等癥。山藥具有多種生物活性，并認(rèn)為山藥中的主要功效成分是山藥多糖，有增強(qiáng)免疫、抗衰老、抗氧化活性、抗腫瘤、治療糖尿病的效果［2］。水溶性浸出物中含有水溶性多糖、皂苷類(lèi)、低聚糖、蛋白質(zhì)以及氨基酸等，常被作為一項(xiàng)測(cè)定指標(biāo)評(píng)價(jià)藥材質(zhì)量，通常采用藥典附錄XA方法進(jìn)行含量測(cè)定。

本試驗(yàn)對(duì)來(lái)源于三個(gè)不同省的山藥藥材中多糖、水溶性浸出物進(jìn)行了含量測(cè)定，為山藥藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供了科學(xué)數(shù)據(jù)，為山藥GAP基地的建設(shè)提供參考。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 樣本來(lái)源及處理

2006年10月～2007年1月期間采自于河南、山西、河北三產(chǎn)地，由河南中醫(yī)學(xué)院中藥鑒定教研室主任陳隨清教授鑒定為薯蕷科植物薯蕷的根莖。

取鮮品，切去根頭，洗凈，除去外皮和須根，趁鮮切厚片，干燥，備用。

1.2 儀器與化學(xué)試劑

UV－2201紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，(FA2004A)萬(wàn)分之一分析天平，CS101－2D電熱鼓風(fēng)干燥箱，RT201型粉碎機(jī)，R205旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，SZ－93自動(dòng)雙重水蒸餾器。

葡萄糖(北京化工廠，AR級(jí))，水為雙蒸水，其余試劑均為分析純。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 多糖的含量測(cè)定

大多采用分光光度法——苯酚硫酸法［3］進(jìn)行含量測(cè)定。

2.1.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

稱(chēng)取105℃干燥至恒重的葡萄糖50mg，精密稱(chēng)定，置于500ml量瓶中，加蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，即得0.1012mg/ml的對(duì)照品溶液。精密吸收上述對(duì)照品溶液 1.0ml、3.0ml、5.0ml、7.0ml、10ml分別置于10ml容量瓶中，加水至刻度，混勻，配成系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別準(zhǔn)確吸取系列標(biāo)準(zhǔn)溶液1ml溶液于錐形瓶中，以蒸餾水1ml作空白，分別向其中加入5%苯酚1ml，混勻，迅速加入濃硫酸H2SO45ml充分混勻，放至室溫，在489nm波長(zhǎng)處測(cè)其吸收度值。在1.0120 ×10－2～0.10120mg/ml之間有良好的線性，線性方程:y=0.1152x+0.0018(R2=0.9999)。

2.1.2 供試品溶液的制備和含量測(cè)定

取山藥粗粉20g，精密稱(chēng)定，置索氏提取器中，加入250ml石油醚90℃回流4h，取出樣品揮干后，加入80%乙醇200ml(90℃)回流兩次(每次兩小時(shí))，以除去單糖、多酚、低聚糖和苷類(lèi)等小分子物質(zhì);將樣品揮干溶劑后，加入200ml的水，80℃水浴提取兩次，每次提取4小時(shí)，合并提取液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器真空濃縮至50ml，用sevage法除蛋白后，再次真空濃縮至20ml，加入95%乙醇(使乙醇濃度達(dá)80%)，靜置過(guò)夜，濾過(guò)，殘?jiān)群笥脽o(wú)水乙醇、乙醚、丙酮依次洗滌，低溫干燥得山藥粗多糖，稱(chēng)重。精密稱(chēng)取山藥粗多糖10mg，溶于100ml容量瓶中，稀釋至刻度，搖勻。精密吸取上述溶液適量，置25ml容量瓶中，蒸餾水定容，即得供試品溶液。按照2.1.1項(xiàng)下的方法測(cè)定吸收度A，由回歸方程計(jì)算濃度C。按下式計(jì)算山藥中多糖的含量以葡萄糖計(jì)。

其中，W為樣品的質(zhì)量(g)，C為多糖濃度(mg/ml)，V為溶液的體積(ml)，D為稀釋因素。

2.1.3 精密度試驗(yàn)

取供試品溶液1ml，共5份，按2.1.1項(xiàng)下方法操作測(cè)得其平均百分含量為18.86%，其RSD為1.67%。

表1 精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.1.4 重現(xiàn)性試驗(yàn)

稱(chēng)取同一樣品5份，各20g，精密稱(chēng)定，按2.1.2項(xiàng)下方法計(jì)算山藥多糖的含量，檢驗(yàn)此測(cè)定方法的重現(xiàn)性，RSD為1.77%。

表2 重現(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果

2.1.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液1ml，按2.1.1項(xiàng)下方法測(cè)定吸收度，每15分鐘測(cè)定1次，考察其穩(wěn)定性，結(jié)果顯色后吸收度在1.5h內(nèi)無(wú)明顯變化，RSD為0.17%，說(shuō)明苯酚－硫酸法顯色穩(wěn)定。

表3 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

2.1.6 加樣回收率試驗(yàn)

稱(chēng)取10g山藥，精密稱(chēng)定，置索氏提取器中，加石油醚脫脂，揮干溶劑，加80%乙醇索氏提取以除去單糖，低聚糖以及甙類(lèi)。藥渣揮干溶劑后，加入葡萄糖及蒸餾水，回流提取，其余操作方法同2.1.2項(xiàng)，測(cè)得平均回收率為 96.23%，RSD=1.63%(n=5)。

表4 加樣回收率試驗(yàn)

2.1.7 樣品中多糖的含量

按照2.1.2 制備供試品溶液，按 2.1.1 項(xiàng)下方法對(duì)來(lái)自三個(gè)省市的30份樣品進(jìn)行含量測(cè)定，每個(gè)樣品的測(cè)定結(jié)果為3次測(cè)定平均值，結(jié)果見(jiàn)表5。

2.2 水溶性浸出物含量測(cè)定

按照中國(guó)藥典2005版一部附錄XA浸出物測(cè)定法(冷浸法)測(cè)定三個(gè)省市的30份樣品進(jìn)行含量測(cè)定，每個(gè)樣品的測(cè)定結(jié)果為3次測(cè)定平均值，結(jié)果見(jiàn)表5。

3 結(jié)果分析

3.1 含量分析

比較來(lái)自三產(chǎn)地10批藥材的成分，其中水溶性浸出物，河南、山西含量明顯高于河北。多糖含量相差比較大，以河南整體最高。

3.2 道地性分析

河南武陟、溫縣屬古懷慶府地帶，以其特定的種質(zhì)、產(chǎn)區(qū)、生產(chǎn)技術(shù)和加工方法，有道地產(chǎn)區(qū)之稱(chēng)。從數(shù)據(jù)資料顯示，可把水溶性浸出物、多糖成分的含量做為考察山藥道地性的指標(biāo)，為道地藥材的市場(chǎng)流通提供科學(xué)的保障。注:1－10號(hào)來(lái)自河南省，11－20號(hào)來(lái)自山西省，21－30號(hào)來(lái)自河北省。

表5 不同產(chǎn)地山藥各成分的含量

3.3 地域環(huán)境分析

河南、山西、河北地理位置的差異，氣候、土質(zhì)、水質(zhì)等生長(zhǎng)環(huán)境不同，山藥中的各成分都受到了影響。河北藥材的整體含量偏低，這與生長(zhǎng)的環(huán)境有很大關(guān)系。山西藥材的整體含量相對(duì)于河北更接近于河南藥材，這與山藥自古以來(lái)在山西的長(zhǎng)期種植有關(guān)。

4 結(jié)語(yǔ)

中藥材生長(zhǎng)講究水土氣候特殊的自然環(huán)境，不能隨便“搬家”移植，否則，藥材的質(zhì)量就很難得到保證。中藥材質(zhì)量不穩(wěn)定，藥效下降，就無(wú)法確保臨床用藥的合理性。最近幾年國(guó)家已投入大量經(jīng)費(fèi)促進(jìn)了藥材道地產(chǎn)區(qū)的發(fā)展，最大限度地滿(mǎn)足市場(chǎng)的需求，讓老百姓用到安全可靠的藥材。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典2010年版(一部)［S］.中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:27.

［2］張紅英.山藥多糖研究進(jìn)展［J］.河南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2006，21(127):87 －88.

［3］王東，林力，袁昌魯，等.車(chē)前子多糖含量的分析［J］.中草藥，2002，33(10):896 －897.