張 強(qiáng)，李金源，王曉波

河北聯(lián)合大學(xué)附屬醫(yī)院口腔科，河北唐山 063000

涎腺多形性腺瘤 （salivery gland pleomorphic adenoma,PA）是最常見的涎腺腫瘤，占涎腺腫瘤的60%～70%。Seifert等根據(jù)上皮細(xì)胞和基質(zhì)所占的比例，將多形性腺瘤分為四種類型，后來為了簡便起見，Seifert和Donath又將上述四型合并為兩型，即細(xì)胞豐富型及基質(zhì)豐富型。本實驗擬通過研究對比血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子（VEGF）、核轉(zhuǎn)錄因子（NF-κB）p50在細(xì)胞豐富型及基質(zhì)豐富型涎腺多形性腺瘤及正常腮腺組織中的表達(dá)，以探討VEGF和NF-κB p50在兩型多形性腺瘤不同生物學(xué)行為之間的關(guān)系，為研究其生物學(xué)行為提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集華北煤炭醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院2004年1月～2009年9月間手術(shù)治療的涎腺多形性腺瘤組織石蠟標(biāo)本75例，按篩選標(biāo)準(zhǔn)選取其中51例，其中，男22例，女29例；年齡18～77歲，平均46.2歲。其中細(xì)胞豐富型26例（A組），基質(zhì)豐富型25例（B組）。30例正常涎腺組織為隨機(jī)從良性涎腺多形性腺瘤旁的正常涎腺組織中選取作為C組。

1.2 主要試劑

Rabbit anti-VEGF （Vascular Endothelial Growth Factor）6 ml ZA-0509（中杉金橋生物技術(shù)有限公司）；NF-κB p50（NLS）100 μl sc-114（Santa Cruz Biotechnology）；抗體稀釋液20 ml ZLI-9028（天津市灝洋生物制品科技有限公司）。

1.3 實驗方法

所有標(biāo)本，石蠟包埋組織，蠟塊切片，厚4 μm，然后行HE染色及NF-κB p50、VEGF的免疫組織化學(xué)檢測采用SP法染色。

1.4 結(jié)果判定

VEGF以腫瘤細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性表達(dá)。NF-κB p50亞單位以腫瘤細(xì)胞胞質(zhì)和（或）細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性表達(dá)。本實驗采用Motic Med 6.0軟件系統(tǒng)鏡下采圖，切片在光鏡下按統(tǒng)一放大倍數(shù)（10×40）進(jìn)行分析，每張切片隨機(jī)攝取10個視野，輸入計算機(jī)作為測定視場。應(yīng)用Image-Proplus 6.0軟件分析系統(tǒng)對其陽性細(xì)胞表達(dá)的光密度進(jìn)行定量分析，選擇累積光密度（IOD）（光密度定標(biāo)值為255），其代表染色強(qiáng)度，能較準(zhǔn)確地反映陽性產(chǎn)物顏色深淺的狀況。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 13.0統(tǒng)計分析軟件對結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組間采用方差分析，多組間的兩兩比較采用t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

VEGF陽性染色為細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色顆粒。VEGF在各組間表達(dá)結(jié)果，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析A、B、C組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均 P＜0.05）。NF-κB p50 的陽性染色為細(xì)胞質(zhì)和（或）細(xì)胞核中出現(xiàn)棕黃色顆粒，A、B、C組間表達(dá)結(jié)果比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05）。見表1。

表1 血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子、核轉(zhuǎn)錄因子p50在各組間表達(dá)的平均光密度值（ ±s）

表1 血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子、核轉(zhuǎn)錄因子p50在各組間表達(dá)的平均光密度值（ ±s）

注：A、B、C 組間兩兩比較，均 P＜0.05

A組B組C組組別 VEGF 954.65±305.79 153.13±60.81 52.46±9.76 NF-κB p50 529.79±163.81 43.40±5.56 6.83±1.90

3 討論

多形性腺瘤組織結(jié)構(gòu)復(fù)雜，其構(gòu)成的主要成分為腺上皮細(xì)胞、肌上皮細(xì)胞、黏液、黏液樣組織及軟骨樣組織。Serfert和Donath[1]將多形性腺瘤分為兩型，即細(xì)胞豐富型和基質(zhì)豐富型。一般而言，細(xì)胞豐富型易于發(fā)生惡變，幾乎一半以上的癌在多形性腺瘤中的病例來源于細(xì)胞豐富型多形性腺瘤。相反，基質(zhì)豐富型較易復(fù)發(fā)。

實體腫瘤的生長與腫瘤血管生成關(guān)系密切，F(xiàn)olkman于20世紀(jì)70年代最早提出了腫瘤生長轉(zhuǎn)移依賴血管生成的觀點。對于實體腫瘤而言，生長過程大致分為以下三個階段：第1階段為無血管期，或稱為血管前期，腫瘤完全處于靜止?fàn)顟B(tài)，腫瘤細(xì)胞的營養(yǎng)供應(yīng)靠細(xì)胞周圍間質(zhì)的彌散獲得；第2階段為血管形成期，此期腫瘤組織中開始形成新生血管，這些血管持續(xù)為腫瘤組織提供營養(yǎng)物質(zhì)并帶走其代謝產(chǎn)物；第3階段為生長期，腫瘤開始旺盛生長。當(dāng)實體腫瘤生長到一定階段就開始局部侵襲及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。血管前期的腫瘤，因為無血管支持，腫瘤生長緩慢，體積不能超過2 mm，只有血管化的腫瘤才能繼續(xù)生長，并長成具有臨床意義的大小。1996年，Hanahan等[2]又提出了腫瘤血管生成的開關(guān)學(xué)說，即腫瘤自身需打破其周圍微環(huán)境中促進(jìn)與抑制腫瘤血管生成因子之間的平衡，而誘導(dǎo)腫瘤新生血管的形成。腫瘤血管新生與多種血管生成因子刺激有關(guān)，其中VEGF是腫瘤血管形成的最主要調(diào)節(jié)因子。近年研究表明，VEGF及其受體在人類多種惡性腫瘤細(xì)胞均有較高水平表達(dá)，并以自分泌或旁分泌形式作用于腫瘤細(xì)胞，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長，為腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移創(chuàng)造條件[3]，并影響大部分惡性腫瘤的預(yù)后，在臨床上以VEGF及其受體為靶點的生物治療已在進(jìn)行。還有研究顯示[4]在腫瘤組織形成之前就可產(chǎn)生大量VEGF，正常細(xì)胞獲得血管生成能力增加，其惡變危險性也明顯增加。核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB是迄今為止發(fā)現(xiàn)的功能最多的多向性轉(zhuǎn)錄因子。NF-κB在細(xì)胞生長、細(xì)胞凋亡、腫瘤發(fā)生等發(fā)面發(fā)揮重要作用，NF-κB的異?；罨瘜?dǎo)致細(xì)胞周期調(diào)節(jié)失控，表現(xiàn)為細(xì)胞無限增殖和自主分裂、腫瘤形成[5]。并且可以通過上調(diào)促細(xì)胞存活基因和抗凋亡基因表達(dá)，從而保護(hù)細(xì)胞使其免于凋亡[6]。NF-κB還可以通過調(diào)節(jié)細(xì)胞黏附分子、基質(zhì)金屬蛋白酶及血管生長因子受體等的表達(dá)，參與腫瘤轉(zhuǎn)移進(jìn)程。因此，NF-κB在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移過程中起到了重要的作用。本實驗研究結(jié)果顯示，NF-κBp50的表達(dá)與 VEGF的表達(dá)具有正相關(guān)性（P＜0.05），說明NF-κB p50可能是通過作用于VEGF來實現(xiàn)對新生血管的調(diào)控作用，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤血管的生長，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞增殖活性的進(jìn)一步升高。對目前國內(nèi)外通過抑制血管生成抗腫瘤治療的研究提供了一定依據(jù)，同時聯(lián)合檢測NF-κB與VEGF在涎腺多形性腺瘤中的表達(dá)可反映腫瘤生物學(xué)特點，對腫瘤的預(yù)后，臨床制訂治療計劃有一定的指導(dǎo)價值，深入研究兩者之間的關(guān)系，可能為抗腫瘤治療提供一個新的思路及途徑。

[1]Seifert G,Donath K.Classification of the pathohistology of diseases of the salivary glands-review of 2 600 cases in the Salivary Gland Register[J].Beitrge zur Pathologie,1976,159(1)：1-32.

[2]Hanahan D,Folkman J.Patterns and emerging mechanisms of the angiogenic switch during tumorgenesis[J].Cell,1996,86：353-364.

[3]Takahashi M,Matsui A,Inao M,et al.ERK/MAPK-dependent PI3K/Aktphosph-orylation through VEGFR-1 after VEGF stimulation in activated hepatic stellate cells[J].Hepatol Res,2003,26(3)：232-236.

[4]Li J,Zhang YP,Kirsner RS.Angiogenesis in wound repair：angiogenic growth factors and the extracellular matrix [J].Microsc Res Tech,2003,60(1)：107-114.

[5]王永華,柳志文.OX-2、VEGF在口腔扁平苔鮮、口腔白斑及口腔鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)[J].口腔醫(yī)學(xué),2009,29(8)：419-422.

[6]Hinz M,Krappmann D,Eichten A,et al.Nuclear factor-kappa B,cancer and apoptosis[J].Mol CellBiol,2004,64(4)：2690-2698.