周 丹

(廣東省深圳市第二人民醫(yī)院，廣東 深圳 518035)

Trem－1又稱髓樣細(xì)胞觸發(fā)受體，于2000年被Bonchon等人發(fā)現(xiàn)。髓樣細(xì)胞觸發(fā)受體位于人6號染色體，屬免疫球蛋白超家族成員。髓樣細(xì)胞觸發(fā)受體對炎癥反應(yīng)有一定影響作用，成為近年來醫(yī)學(xué)科研的研究課題。本文根據(jù)臨床分析，研究了髓樣細(xì)胞受體在炎癥反應(yīng)中的作用機(jī)理。

1 資料與方法

1.1 一般資料:以10例足月自然分娩胎兒作為對照組，抽取其臍帶血進(jìn)行研究。對照組男4例，女6例。另外選取13例患有全身炎癥反應(yīng)綜合癥的新生兒作為實(shí)驗(yàn)組。抽取其外周血5mL進(jìn)行研究。實(shí)驗(yàn)組男7例，女6例。兩組患兒在性別方面無顯著差異(P＞0.05)，具有可比性。實(shí)驗(yàn)試劑采用Trizol試劑(Takara)、鼠抗人 Trem －1抗體(Santa Cruz)、RT－PCR兩步法試劑盒、生物素標(biāo)記山羊抗鼠IgG(Santa Cruz)、ECL發(fā)光劑(Pierce)、鼠抗人生物素標(biāo)記GAPDH抗體(Santa Cruz)等。

1.2 方法:對血液樣本進(jìn)行以下操作，為實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備材料:分離單核細(xì)胞后置于－196℃下保存?zhèn)溆?提取收集細(xì)胞總RNA;采用三去污法提取細(xì)胞總蛋白并對濃度進(jìn)行測定，置于－20℃冰箱中保存?zhèn)溆?。RT－PCR按照試劑盒中附帶的操作步驟進(jìn)行;PCR反應(yīng)條件如下:94℃變性3min后，開始循環(huán)過程。94℃30s，56℃退火30s，72℃延伸1min。35個循環(huán)后，最后72℃延伸10min。內(nèi)參照PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系與上述過程一致。在紫外光環(huán)境下，將電泳結(jié)果利用激光掃描進(jìn)行電腦存儲，根據(jù)Trem－1mRNA與β－actinmRNA吸光度比值進(jìn)行半定量分析。采用鼠抗人Trem－1抗體、鼠抗人生物素標(biāo)記GAPDH抗體、ECL發(fā)光劑、生物素標(biāo)記山羊抗鼠IgG等試劑進(jìn)行Trem－1蛋白水平的表達(dá)，將結(jié)果進(jìn)行記錄分析。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:所有數(shù)據(jù)進(jìn)行計(jì)算機(jī)輸入，采用SPSS18.0軟件建立數(shù)據(jù)庫，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用T檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，以P＜0.05為用統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

實(shí)驗(yàn)組與對照組中單核細(xì)胞RT－PCR顯示Trem－1基因產(chǎn)物為一條約560bp長度的條帶，預(yù)期長度為564bp，基本一致。實(shí)驗(yàn)組中Trem－1蛋白和Trem－1RNA表達(dá)均高于對照組(詳細(xì)情況見表1)。經(jīng)SPSS18.0軟件統(tǒng)計(jì)分析，兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 兩組Trem－1mRNA表達(dá)對比

3 討論

中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞可受Trem－1誘導(dǎo)分泌TNF－α、IL－1β、干擾素γ等促炎細(xì)胞因子，中性粒細(xì)胞還可釋放髓過氧化酶。Trem－1在細(xì)胞內(nèi)部可誘發(fā)鈣離子轉(zhuǎn)移，使細(xì)胞表面信號相關(guān)激酶和磷脂酶C絡(luò)氨酸磷酸化，增強(qiáng)或放大炎性反應(yīng)，使其發(fā)生過度炎性反應(yīng)［1］。Bouchon等人研究發(fā)現(xiàn)，存在某些病菌感染的腹腔灌洗液、感染處組織樣本、病原體培養(yǎng)液中均能檢測到sTrem－1有不同程度的上調(diào)。其研究的樣本包括金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、曲霉等［2］。我國專家對部分胸腔積液患者采用熒光標(biāo)記法以及酶聯(lián)免疫吸附測定法對細(xì)胞表面的Trem－1水平進(jìn)行研究后發(fā)現(xiàn)，肺炎患者的胸腔積液中，Trem－1的表達(dá)水平要比結(jié)核性胸膜炎、肺癌高，其研究結(jié)果認(rèn)為Trem－1可作為對胸腔積液病因的輔助指標(biāo)［3］。

國外一些研究資料表明，在單核細(xì)胞Trem－1的激活參與了反應(yīng)微生物攻擊、宿主防御的早期誘導(dǎo)和適應(yīng)性免疫反應(yīng)［4］。Trem－1的表達(dá)無法加強(qiáng)其自身免疫性疾病，但可以對炎性因子的合成過程進(jìn)行激發(fā)。在炎癥發(fā)生發(fā)展的過程中，促炎細(xì)胞因子和抗炎細(xì)胞因子之間發(fā)生相互作用，對感染轉(zhuǎn)歸的結(jié)果形成影響［5］。本組案例中，實(shí)驗(yàn)組的 Trem －1mRNA，Trem －1蛋白表達(dá)均高于對照組，且蛋白表達(dá)有一定的規(guī)律性。說明Trem－1參與了炎癥發(fā)生發(fā)展的所有過程，并對其產(chǎn)生了重要作用。有研究結(jié)果顯示，阻斷內(nèi)毒素激活經(jīng)由Trem－1的通路，不能完全阻斷NF－kb激活的炎癥介質(zhì)釋放［6］。所以在早期要對Trem－1進(jìn)行調(diào)控，防止促炎因子過度釋放導(dǎo)致不良臨床現(xiàn)象的發(fā)生。

［1］辛維政.新生兒全身炎癥反應(yīng)綜合征時TREM－1表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究［J］.中國優(yōu)生與遺傳雜志 ，2009，17(08):13－14.

［2］羅凌.人工合成TREM－1多肽對膿胸大鼠炎癥反應(yīng)的干預(yù)效應(yīng)［J］.廣西醫(yī)科大學(xué) ，2009.

［3］閔安杰，楊興華，張自功，等.TREM－1在脆弱類桿菌脂多糖誘導(dǎo)單核細(xì)胞炎癥反應(yīng)中的作用［J］.中華外科雜志，2007，01(09):18－19.

［4］L Richeldi，M Mariani，M Losi.Triggering receptor expressed on myeloid cells:role in the diagnosis of lung infections［J］.Eur Respir，2004，24:247 －250.

［5］梁志海，唐國都.髓樣細(xì)胞觸發(fā)受體1在炎性反應(yīng)中的作用［J］.醫(yī)學(xué)綜述，2009，15(18):2747－2748.

［6］劉娜，龍堯.髓樣細(xì)胞觸發(fā)受體－1在疾病中的作用［J］.中國醫(yī)藥導(dǎo)報，2010，01(01):34－35.