亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        制備型高效液相法分離苦瓜抑菌活性成分

        2010-12-05 07:07:20孟曉馬力
        食品研究與開發(fā) 2010年4期
        關(guān)鍵詞:號峰石油醚苦瓜

        孟曉,馬力

        (西華大學(xué)生物工程學(xué)院,四川 成都 610039)

        制備型高效液相法分離苦瓜抑菌活性成分

        孟曉,馬力*

        (西華大學(xué)生物工程學(xué)院,四川 成都 610039)

        選擇200目~300目硅膠為柱填料,以抑菌效果為評價指標(biāo),利用制備型高效液相法(Pre-HPLC)對苦瓜提取液浸膏中的抑菌活性成分進(jìn)行分離。結(jié)果表明:當(dāng)流動相配比石油醚(60℃~90℃)∶乙酸乙酯為7∶3,進(jìn)樣量0.5 mL,流速5 mL/min時,檢測器在280 nm波長處所檢測到的物質(zhì)抑菌效果最好,其對金黃色葡萄球菌的抑菌效果明顯,抑菌圈直徑為12 mm,對照組沒有抑菌效果。

        制備型高效液相法;苦瓜;抑菌

        苦瓜(Momordica charantia L.)又稱涼瓜,是葫蘆科苦瓜屬植物。據(jù)研究表明[1-3],苦瓜作為一種藥食同源的瓜類蔬菜,具有增強(qiáng)免疫能力、抑菌、降血糖、抗癌、抗腫瘤、抗氧化、治療糖尿病、治療艾滋病等藥理作用。

        近十幾年來,隨著人們對分離與純化技術(shù)的不斷探索,色譜分離技術(shù)得到了迅速發(fā)展,制備高效液相色譜法已成為當(dāng)代高效分離技術(shù)的研究前沿,用于制備高質(zhì)量的生物活性物質(zhì)[4-5]。本文以抑菌效果為評價指標(biāo),采用制備型高效液相法(Pre-HPLC)對苦瓜提取液中的抑菌活性成分進(jìn)行分離,旨在獲得具有較好抑菌效果的一類物質(zhì),為下一階段對該類物質(zhì)相關(guān)性質(zhì)的研究提供參考。

        1 材料與方法

        1.1 材料

        1.1.1 原料

        苦瓜粉:市場自購。

        1.1.2 試劑

        石油醚(60℃~90℃)、乙酸乙酯、無水乙醇、營養(yǎng)瓊脂:分析純,成都科龍化工試劑廠。

        1.1.3 菌種

        大腸桿菌(Escherichia coli),金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)均由西華大學(xué)實驗中心提供。

        1.1.4 儀器

        AKTA Purifier10制備型高效液相色譜儀:GE公司;SHB-3循環(huán)水多用真空泵:鄭州杜甫儀器廠;RE-52B旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀:上海亞榮生氏儀器廠;JY92-2D超聲波細(xì)胞粉碎儀:寧波新芝科器研究所;HH-S4數(shù)顯恒溫水浴鍋:金壇市醫(yī)療儀器廠。

        1.2 方法

        1.2.1 樣品制備

        以70%乙醇為溶劑,采用超聲波輔助提取苦瓜粉,用二氯甲烷萃取提取液,水浴揮干溶劑,得苦瓜提取液浸膏;準(zhǔn)確稱取苦瓜提取液浸膏0.50 g,無水乙醇溶解,配制成濃度為50 mg/mL的溶液,過0.45 μm的微孔濾膜,供分析和制備用。

        1.2.2 色譜條件

        自填硅膠柱(12 mm×300 mm,200目~300目);流動相:石油醚-乙酸乙酯;流速5mL/min;檢測波長280nm;進(jìn)樣量 50 μL。

        1.2.3 洗脫液收集

        采用制備型高效液相系統(tǒng)對按照1.2.1處理好的樣品在1.2.2的色譜條件下進(jìn)行分離,按照出峰順序收集洗脫液,濃縮,揮干流動相,干燥備用。

        1.2.4 抑菌效果評價

        用無菌鑷子將滅菌后的濾紙片(6 mm)放入1.2.3的樣品液中,浸泡0.5 h后取出,揮發(fā)掉乙醇;吸取大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的菌懸液于無菌平皿中,均勻地涂布于凝固的培養(yǎng)基表面;將含樣品的紙片貼于平板上,每種設(shè)3個重復(fù),然后以無菌水作為對照,放入培養(yǎng)箱中,37℃下培養(yǎng)24 h。取出測定抑菌圈直徑,取其平均值。

        2 結(jié)果與討論

        2.1 樣品粗分離與抑菌效果比較

        在流動相:石油醚-乙酸乙酯(9∶1);流速 5 mL/min;檢測波長280 nm;進(jìn)樣量50 μL的色譜條件下對1.2.1的樣品進(jìn)行分離,得到色譜圖如圖1所示。

        如圖1所示,利用上述色譜條件對1.2.1的樣品液進(jìn)行分離后,在280 nm波長處共檢測到4個峰,其中1號峰和2號峰都是在流動相配比為石油醚:乙酸乙酯(9∶1)時洗脫下來的,說明這兩種物質(zhì)都屬于弱極性物質(zhì);而3號峰和4號峰則是用無水乙醇洗脫下來的,因此這兩類物質(zhì)可以歸為極性物質(zhì)。最后,按照1.2.3的處理方法對各洗脫液進(jìn)行處理,分別取等量各干燥樣品,等體積無水乙醇溶解,進(jìn)行抑菌試驗。結(jié)果表明:在2號峰處收集的洗脫液抑菌效果最好,其對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌都有較為明顯的抑制效果,其抑菌圈直徑分別為13 mm和12 mm。結(jié)果見圖2。

        2.2 樣品細(xì)分離與抑菌效果比較

        改變色譜條件,即流動相∶石油醚-乙酸乙酯(7∶3);流速 5 mL/min;檢測波長 280 nm;進(jìn)樣量 50 μL。在此條件下對2.1中的2號峰洗脫液進(jìn)行再分離,得到色譜圖如圖3所示。

        可知,利用上述色譜條件對2號峰的洗脫液進(jìn)行分離后,在280 nm波長處共檢測到三個峰,其中2-1號峰和2-2號峰都是在流動相配比為石油醚:乙酸乙酯(7∶3)時洗脫下來的,說明這兩種物質(zhì)都屬于弱極性物質(zhì);而2-3號峰則是用無水乙醇洗脫下來的,因此這類物質(zhì)可以歸為極性物質(zhì)。最后,按照1.2.3的處理方法對各洗脫液進(jìn)行處理,分別取等量各干燥樣品,等體積無水乙醇溶解,進(jìn)行抑菌試驗。結(jié)果見圖4。

        圖4結(jié)果表明:在2-2號峰處收集的洗脫液抑菌效果最好,其對金黃色葡萄球菌有較為明顯的抑制效果,抑菌圈直徑為12 mm,但其對大腸桿菌沒有明顯的抑制作用。

        3 結(jié)論

        通過試驗表明,在不同色譜條件下對苦瓜提取液浸膏進(jìn)行粗分離和進(jìn)一步的細(xì)分離,最后在色譜條件為流動相∶石油醚-乙酸乙酯(7∶3);流速 5 mL/min;檢測波長280 nm;進(jìn)樣量50 μL時,從中分離得到2-2號峰收集到的洗脫液抑菌效果最好,其對金黃色葡萄球菌有較為明顯的抑制效果,抑菌圈直徑為12 mm,但其對大腸桿菌卻沒有明顯的抑制效果。分析其原因可能有兩點:第一,在該峰處收集到的抑菌活性物質(zhì)的濃度還沒有達(dá)到抑制大腸桿菌生長的范圍,通過進(jìn)一步增大其濃度進(jìn)行抑菌試驗,仍沒有明顯效果;第二,該活性物質(zhì)可能是與其它類物質(zhì)協(xié)同作用起到抑制的效果,經(jīng)過進(jìn)一步的細(xì)分離之后,其它類物質(zhì)被分離開,從而導(dǎo)致其失去抑制大腸桿菌生長的作用。

        總之,運用制備型高效液相法對苦瓜提取液浸膏進(jìn)行分離,分離高效快速,并且通過重復(fù)試驗證明該法具有很好的重現(xiàn)性,能夠得到抑菌效果較好的一類物質(zhì),以便于下一階段對該類物質(zhì)的性質(zhì)做進(jìn)一步的分析研究。

        [1]萬新建,陳學(xué)軍,纓南生.我國苦瓜的研究現(xiàn)狀及展望[J].江南農(nóng)業(yè)學(xué)報,2002(6):46-50

        [2]袁杰,杜琪珍.苦瓜中活性成分的初步研究[J].食品研究開發(fā),2004(1):108-109

        [3]向亞林,凌冰,張茂新.苦瓜化學(xué)成分和生物活性的研究進(jìn)展[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā),2005,17(2):242-246

        [4]高明哲,袁曉艷,肖紅斌.制備型高效液相色譜法從積雪草提取物中分離純化積雪草甙和羥基積雪草甙對照品[J].色譜,2008,26(3):362-365

        [5]王永祿,王麗瑤.制備型高效液相色譜法及其在中藥研究中的應(yīng)用[J].中醫(yī)藥通報,2006,5(3):60-63

        Research on the Antibacterial Activity Components of Momordica Charantia L by Preparative High Performance Liquid Chromatography

        MENG Xiao,MA Li*
        (School of Bioengineering,Xihua University,Chengdu 610039,Sichuan,China)

        The antibacterial activity components of Momordica charantia L.were separated by the preparative high performance liquid chromatography (Pre-HPLC).The result shows:the best antibacterial activity components were separated under the conditions of the petroleum ether(60 ℃-90 ℃):ethyl acetate is 7∶3,0.5 mL of injection volume,5 mL/min of velocity,the detection wavelength is 280 nm.The Staphylococcus aureus was inhibited well and the Inhibition zone diameter is 12 mm.

        Pre-HPLC;momordica charantia L.;antibacterial

        孟曉(1983—),女(漢),碩士研究生,研究方向:食品生物技術(shù)。

        *通訊作者

        2009-08-13

        猜你喜歡
        號峰石油醚苦瓜
        止咳寶片的HPLC指紋圖譜研究
        種植苦瓜 如何科學(xué)管理
        陰炎凈洗液標(biāo)準(zhǔn)湯劑的HPLC指紋圖譜研究*
        錦燈籠宿萼與果實的石油醚部位化學(xué)成分及抗氧化活性比較①
        吃苦瓜
        藏藥訶子化學(xué)成分的高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)快速鑒定研究*
        補腎活血湯石油醚提取物對BMSCs遷移過程中Wnt5a/PKC通路的影響
        中成藥(2017年12期)2018-01-19 02:06:26
        煙草石油醚含量研究
        我絕不吃苦瓜
        幼兒畫刊(2016年7期)2016-02-28 21:00:44
        峰面積比值法分析混合DNA擴(kuò)增產(chǎn)物的比例關(guān)系
        精品国产一区二区三区av性色| 亚洲精品色播一区二区| 亚洲精品一区二区在线免费观看| 女人高潮久久久叫人喷水| 无码国产69精品久久久孕妇| 久久国产成人亚洲精品影院老金| 亚洲国产黄色在线观看| 久久综网色亚洲美女亚洲av| 亚洲精品久久久久中文字幕一福利| 国产在线手机视频| 精品久久日产国产一区| 精品亚洲一区二区三区四区五 | 俺去俺来也在线www色官网| 国产精品偷伦视频免费手机播放| 日韩精品一二区在线视频| 9久久婷婷国产综合精品性色| 爆乳熟妇一区二区三区霸乳| 国产欧美日韩专区| 五月天亚洲av优女天堂| 亚洲国产一区二区三区| 国产成人精品综合在线观看| 免费看奶头视频的网站| 亚洲最大的av在线观看| 国产av无码专区亚洲av麻豆| 九九99久久精品国产| 精品无吗国产一区二区三区av| 亚洲熟妇av一区二区三区hd| 把女人弄爽特黄a大片| 装睡被陌生人摸出水好爽| 久久er这里都是精品23| 日产一区日产2区日产| 亚洲国产精品无码专区| 国产成人久久综合热| 午夜av福利亚洲写真集| 人妻夜夜爽天天爽三区丁香花| 男受被做哭激烈娇喘gv视频| 亚洲欧洲一区二区三区波多野| 日本一区二区三区高清视| 亚洲乱码日产精品一二三| 国产精品毛片无遮挡高清| av一区二区三区高清在线看|