簡 平，亓 旗，周 坤，梁文儀，梁林金，葉 婷，張?zhí)m珍

（北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院 北京 102488）

訶子是使君子科植物訶子Terminalia chebular Retz.及其變種絨毛訶子Terminalia chebula Retz.var.tomentella Kurt.的干燥成熟果實(shí)。別名訶黎勒、訶梨，藏醫(yī)、蒙醫(yī)稱“阿如拉”，泰語稱“麻菜果”，原產(chǎn)于印度、緬甸，在我國云南、廣東、廣西、西藏等地也有分布。具有澀腸止瀉，斂肺止咳，降火利咽之功效[1]。訶子主要含有鞣質(zhì)、酚類、苯丙素類、黃酮和三萜類等多種化學(xué)成分，具有抗氧化、抗炎、抗病原微生物、抗腫瘤等作用[2]。目前尚未有液質(zhì)聯(lián)用鑒定分析訶子中化學(xué)成分的報(bào)道。

本研究首次采用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（HPLC-LTQ-Orbitrap MS）對訶子提取物中化學(xué)成分進(jìn)行在線分離分析研究，根據(jù)其分子離子以及特征碎片離子的精確質(zhì)荷比，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)品、文獻(xiàn)數(shù)據(jù)[3-13]等方法鑒定訶子提取物中的化學(xué)成分，并對它們可能的質(zhì)譜裂解模式進(jìn)行歸納，以期對訶子的質(zhì)量控制、藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及化學(xué)成分的快速鑒定提供參考。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

LTQ-Oribitrap XL線性離子阱-串聯(lián)靜電場軌道阱質(zhì)譜儀：美國Thermo Scientific公司產(chǎn)品，配有熱噴霧離子源（HESI）、Xcalibur 2.1化學(xué)工作站（美國thermo公司）；Thermo Scientific Dionex Utimate 3000 UHPLC Plus Focused超高液相色譜系統(tǒng)：含二元梯度泵，自動(dòng)進(jìn)樣器，柱溫箱，DAD檢測器；Chromeleon 7工作站。Millipore Synergy UV型超純水機(jī)（美國Millipore公司）；Sartorious BT 25S型萬分之一電子分析天平（北京賽多利斯儀器有限公司）；超聲波清洗器（北京中晟名科技有限公司，100 W）；0.22 μm微孔濾膜（天津市津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；甲醇（質(zhì)譜純，F(xiàn)isher公司）；乙酸（色譜純，天津市豐越化學(xué)品有限公司）。

圖1 訶子提取物的總離子流圖（負(fù)離子模式）

訶子藥材產(chǎn)于西藏，經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)劉春生教授鑒定為使君子科植物訶子Terminalia chebula Retz.的干燥成熟果實(shí)；沒食子酸（批號(hào)141109）購于成都普菲德生物技術(shù)有限公司、沒食子酸甲酯（批號(hào)160105）購于北京四面體生物科技有限公司、柯里拉京（批號(hào)MUST — 1051301）、鞣花酸（批號(hào)MUST — 15091807）均購于成都曼思特生物科技有限公司、訶子鞣酸（批號(hào)Z06D5B2）購于上海源葉生物科技有限公司，純度≥98%。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 色譜條件

色譜柱：Diamonsil C18柱 (4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動(dòng)相：0.2%醋酸的水溶液(A)，甲醇溶液(B)；梯度洗脫條件：0-10 min(5%-15%B)，10-15 min(15%-25%B），15-30 min(25%-30%B)，30-50 min(30%-60%B)，50-55 min(60%-90%B)，55-62 min(90%-90%B)；流速：1 mL·min-1；進(jìn)樣量：20 μL；柱溫：30℃；檢測波長：270 nm。

1.2.2 質(zhì)譜條件

HESI離子源，負(fù)離子檢出模式，離子源溫度350℃，電離源電壓4 KV，毛細(xì)管電壓：35 V，管透鏡電壓：110 V，鞘氣和輔助氣均為高純氮?dú)猓兌龋?9.99%），鞘氣流速：40 arb，輔助氣流速：20 arb；數(shù)據(jù)采用傅里葉變換高分辨全掃方式（TF，F(xiàn)ull scan，Resolution 30000）數(shù)據(jù)依賴性（data-dependent acquisistion）ddMS2和ddMS3；母離子列表（Parent ion list）PIL-MS2和PIL-MS3；并運(yùn)用CID和HCD（高能量碰撞）相結(jié)合的碎解方式等多種策略。

1.2.3 供試品溶液的制備

稱取訶子藥材粉末約0.2 g，精密稱定，置于100 mL具塞錐形瓶中，加入50%甲醇20 mL，超聲提取50 min，靜置冷卻，補(bǔ)足原重量。搖勻，取上清液，過0.45 μm微孔濾膜，即得供試品溶液。

1.2.4 對照品溶液的制備

精密稱定對照品沒食子酸2.1 mg，沒食子酸甲酯2.1 mg，柯里拉京2.0 mg，訶子鞣酸2.1 mg，置 10 mL量瓶中加甲醇溶解，定容，搖勻。精密稱定鞣花酸對照品2.3 mg，置10 mL量瓶中加DMSO溶解，定容，搖勻，即得對照品溶液。

2 結(jié)果

按照1.2節(jié)方法分析訶子提取物，由于訶子所含化學(xué)成分主要為酚酸、可水解鞣質(zhì)、黃酮等酸性化合物，選擇負(fù)離子模式，得到其在負(fù)離子模式下的總離子流圖（圖1）。根據(jù)檢測得到的各化學(xué)成分保留時(shí)間、精確質(zhì)譜信息，并結(jié)合提取離子流圖與標(biāo)準(zhǔn)品信息、Scifinder數(shù)據(jù)庫及相關(guān)文獻(xiàn)對其進(jìn)行成分確認(rèn)，共鑒定了62個(gè)成分，包括60個(gè)酚酸和鞣質(zhì)，2個(gè)三萜類（峰61，62）。其中，通過與對照品比對鑒定的化學(xué)成分有：沒食子酸（gallic acid）、沒食子酸甲酯（methyl gallate）、柯里拉京（corilagin）、訶子鞣酸（chebulagic acid）、鞣花酸（ellagic）acid。峰5，19，20，26，31，34，35，38，44，45，51，53，55和峰59為首次從藏藥訶子中發(fā)現(xiàn)。詳情列于（表1）。

2.1 酚酸類化合物鑒定

1號(hào)峰保留時(shí)間為2.91 min，其分子離子峰為m/z 191[M—H]—，該離子失去一個(gè)中性碎片H2O（18u）產(chǎn)生碎片離子m/z 173[M-H—H2O]—，失去一個(gè)中性碎片CO（28u）和2個(gè)H2O（18u）產(chǎn)生碎片離子 127[M —H—CO—2H2O]—。根據(jù)元素組成分析，推測分子式為C7H12O6，相對分子質(zhì)量理論值為191.0550，實(shí)測值為191.0554。1 號(hào)峰被推測為 quinic acid[14，15]。

表1 訶子提取物中的主要化學(xué)成分

續(xù)表1

2號(hào)峰保留時(shí)間為3.46 min，其分子離子峰為m/z 173[M—H]—，失去一個(gè)中性碎片H2O（18 u）產(chǎn)生碎片離子m/z 155[M—H—H2O]—。根據(jù)元素組成分析，推測分子式為C7H10O5，相對分子質(zhì)量理論值為173.0444，實(shí)測值為173.0450。2號(hào)峰被推測為Shikimic acid[5]。

通過標(biāo)準(zhǔn)品比對，結(jié)合文獻(xiàn)數(shù)據(jù)[14，17]，峰9和60被鑒定為gallic acid和ellagic acid。gallic acid分子離子峰為m/z 169[M—H]—，gallic acid失去一個(gè)中性碎片CO2(44 u)產(chǎn)生碎片離子m/z 125[M—H—CO2]—。根據(jù)元素組成，其分子式為C7H6O5，相對分子質(zhì)量理論值為169.0131，實(shí)測值為169.0138；ellagic acid的分子離子峰為m/z 301[M—H]—，特征碎片離子m/z 603[2M— H]—，ellagic acid失去一個(gè)中性碎片 H2O（18 u）產(chǎn)生碎片離子m/z 283[M—H—H2O]—，m/z 257[M-HCO2]—為其失去一個(gè)中性碎片CO2（44 u）產(chǎn)生的碎片離子。根據(jù)元素組成，推測分子式為C14H6O8，相對分子質(zhì)量理論值為300.9979，實(shí)測值為300.9984。

2.2 簡單沒食子酰酯類化合物鑒定

簡單沒食子酰類化合物，其特征碎片離子源于失去沒食子?；糠?-galloyl，-152 u)而產(chǎn)生。以54號(hào)峰為例，保留時(shí)間為38.61 min，其分子離子峰為m/z 939[M—H]—，依次失去一個(gè)沒食子?；?152 u)，從而形成的系列碎片離子有：m/z 787[M—H—galloyl]-，m/z 635[[M—H—2galloyl]-，m/z 483[M—H—3galloyl]-，m/z 331[M—H—4galloyl]-，m/z 179[M—H—5galloyl]-。根據(jù)元素組成，推測分子式為C41H32O26，相對分子質(zhì)量理論值為m/z 939.1098，實(shí)測值為m/z 939.1105。54號(hào)峰被推測為pentagalloylglucose。

39，46，47 ，49和52號(hào)峰的保留時(shí)間分別為23.81min，32.02 min，32.85 min，34.90 min和35.80 min，其分子離子峰均為m/z 787[M—H]—。根據(jù)元素組成，推測其分子式為C34H28O22，相對分子質(zhì)量理論值為m/z 787.0988，39號(hào)峰實(shí)測值為m/z 787.0994，峰46實(shí)測值為m/z 787.0995，47號(hào)峰實(shí)測值為m/z 787.0991，49號(hào)峰實(shí)測值為m/z 787.1004，52號(hào)峰實(shí)測值為m/z 787.1002。根據(jù)其依次失去一系列沒食子?；?，結(jié)合簡單沒食子酰類化合物的特征碎片，39，46，47，49和52號(hào)峰被推測為tetragalloylglucose及其同分異構(gòu)體；36，40，42號(hào)峰的保留時(shí)間分別為22.35，24.11和24.90，其分子離子峰均為m/z 635[M—H]—。根據(jù)元素組成，推測其分子式為C27H24O18，相對分子質(zhì)量理論值為635.0879，36號(hào)峰實(shí)測值為635.0883，40號(hào)峰實(shí)測值為635.0886，42號(hào)峰實(shí)測值為635.0880。根據(jù)簡單沒食子酰類化合物的特征碎片，被推測為triglloylglucose及其同分異構(gòu)體。

13，15，17 ，22-24，27，28，30，33號(hào)峰的保留時(shí)間分別為 11.80 min，14.10 min，14.60 min，16.22 min，17.21 min，17.54 min，18.81 min，19.07 min，19.51 min和20.80 min，其分子離子峰為m/z 483[M—H]—。根據(jù)元素組成，推測其分子式為C20H20O14，相對分子質(zhì)量理論值為m/z 483.0769，13號(hào)峰實(shí)測值為m/z 483.0785，15號(hào)峰實(shí)測值為m/z 483.0782，17號(hào)峰實(shí)測值為m/z 483.0784，22號(hào)峰實(shí)測值為m/z 483.0776，23號(hào)峰實(shí)測值為m/z 483.0778，24號(hào)峰實(shí)測值為m/z 483.0778，27號(hào)峰實(shí)測值為m/z 483.0785，28號(hào)峰實(shí)測值為m/z 483.0779，30號(hào)峰實(shí)測值為m/z 483.0778，33號(hào)峰實(shí)測值為m/z 483.0785。結(jié)合簡單沒食子酰類化合物的特征碎片，被推測為digalloylglucose及其同分異構(gòu)體。

6，8，11 號(hào)峰的保留時(shí)間分別為6.84 min，8.28 min和9.98 min，其分子離子峰為m/z 331[M—H]—。根據(jù)元素組成，推測其分子式為C13H16O10，相對分子質(zhì)量理論值為m/z 331.0660，6號(hào)峰實(shí)測值為m/z 331.0666，8號(hào)峰實(shí)測值為m/z 331.0668，11號(hào)峰實(shí)測值為m/z 331.0667。結(jié)合簡單沒食子酰類化合物的特征碎片，被推測為 glucogallin 及其同分異構(gòu)體[14，17，18]。以 glucogallin為例，說明簡單沒食子酰酯類化合物的裂解方式：m/z 331[M—H]-為其分子離子峰，失去一個(gè)中性碎片C4H8O4(120 u)產(chǎn)生碎片離子m/z 211[M—H—C4H8O4]—，失去一個(gè)沒食子?；?152 u)產(chǎn)生碎片離子m/z 179[M—galloyl]—，失去一個(gè)中性碎片C6H10O5(162 u)產(chǎn)生沒食子酸碎片m/z 169[M—H—C6H10O5]—，失去一個(gè)中性碎片C6H10O5的基礎(chǔ)上，再失去一個(gè)中性碎片CO2(44 u)產(chǎn)生碎片離子m/z 125[M—H—C6H10O5— CO2]—。

32號(hào)峰的保留時(shí)間為19.82 min，其分子離子峰為m/z 183[M—H]—，失去一個(gè)CH3（15u）中性碎片形成碎片離子m/z 168[M—H—CH3]—，再失去一個(gè)CO2（44u）形成碎片離子m/z 124[M—H—CH3-CO2]—。根據(jù)元素組成，推測其分子式為C8H8O5，相對分子質(zhì)量理論值為m/z 183.0288，實(shí)測值為m/z 183.0296。峰32被鑒定為methyl gallate，這與其標(biāo)準(zhǔn)品碎裂信息一致。

2.3 鞣質(zhì)類化合物鑒定

鞣花鞣質(zhì)由于其結(jié)構(gòu)中具有HHDP部分，碎片離子m/z 301是其典型特征。5，19，43號(hào)峰的保留時(shí)間分別為6.45 min和25.55 min，其分子離子峰為m/z 633[M—H]—和m/z 1267[2M—H]—，失去一個(gè)沒食子?；a(chǎn)生碎片離子m/z 481[M—H—galloyl]—，繼續(xù)失去一個(gè)H2O（18u）產(chǎn)生碎片離子m/z 463[M—H—galloyl—H2O]—。根據(jù)元素組成，推測其分子式為C27H22O18，相對分子質(zhì)量理論值為m/z 633.0722，峰5實(shí)測值為m/z 633.0728，19號(hào)峰實(shí)測值m/z 633.0726，峰43實(shí)測值m/z 633.0723。該化合物失去332 u形成m/z 301(HHDP)碎片離子，這表明其結(jié)構(gòu)中含有一個(gè)galloylglucose(332 u)單元。因此5，19，43號(hào)峰被鑒定為galloyl—HHDP—glucose及其異構(gòu)體[16，19]，進(jìn)一步與對照品比較，43號(hào)峰被鑒定為corilagin。

圖1 訶子鞣質(zhì)類部分化合物結(jié)構(gòu)圖

20，26，31 和55號(hào)峰的保留時(shí)間分別為15.30 min，18.85 min和19.64 min，38.90 min，分子離子峰為m/z 785[M—H]—，該離子連續(xù)失去沒食子?；a(chǎn)生碎片離子m/z 633[M—H—galloyl]—、m/z 481[M—H—2galloyl]—，繼續(xù)失去一個(gè)中性碎片H2O（18u）產(chǎn)生碎片離子m/z 463[M—H—2galloyl—H2O]—。根據(jù)元素組成，推測其分子式為C34H26O22，相對分子質(zhì)量理論值為m/z 785.0832，20號(hào)峰實(shí)測值為m/z 7785.0841，26號(hào)峰實(shí)測值為m/z 7785.0839，31號(hào)峰實(shí)測值為m/z 785.0831，55號(hào)峰實(shí)測值為m/z 785.0842。結(jié)合特征碎片離子m/z 300(HHDP)，20，26，31和55號(hào)峰被推測為digalloyl—HHDP—glucoses[23]。然而僅憑MS，MS/MS和UV等手段，仍無法區(qū)分tercatain及其同分異構(gòu)體。

34號(hào)峰的保留時(shí)間為21.24 min，分子離子峰為m/z 951[M—H]—，該離子失去一個(gè)中性碎片H2O（18u）產(chǎn)生碎片離子m/z 933[M—H—H2O]—。根據(jù)元素組成，推測其分子式為C41H28O27，相對分子質(zhì)量理論值為m/z 951.0734，實(shí)測值為m/z 951.0736。結(jié)合文獻(xiàn)數(shù)據(jù)與特征碎片m/z 301[21]，34號(hào)峰被推測為geraniin。

3號(hào)峰，分子離子峰為m/z 481[M—H]—，失去一個(gè)葡萄糖產(chǎn)生碎片離子m/z 301(HHDP)。根據(jù)元素組成，推測其分子式為C20H18O14相對分子質(zhì)量理論值為m/z 481.0613，實(shí)測值為m/z 481.0623。3號(hào)峰被初步推測為HHDP—glucose。14和21號(hào)峰的保留時(shí)間分別為12.02 min和15.38 min，分子離子峰為m/z 1083[M—H]—，失去一個(gè)鞣花酸單元產(chǎn)生碎片離子m/z 781[M—H—ellagic acid]—，繼續(xù)失去一個(gè)葡萄糖產(chǎn)生碎片離子m/z 601[M—H—ellagic acid—glu]—。根據(jù)元素組成，推測其分子式為C48H28O30，相對分子質(zhì)量理論值為m/z 1083.0582，14號(hào)峰實(shí)測值為m/z 1083.0571，21峰實(shí)測值m/z 1083.0569。結(jié)合特征碎片離子m/z 541[M— 2H]2—、m/z 301(DPPH)，14和21號(hào)峰被推測為punicalagin。反相色譜中，α—punicalagin比β—punicalagin先出峰。所以14號(hào)峰被推測為α—punicalagin，21號(hào)峰被推測為為β—punicalagin。對應(yīng)于punicalagin的裂解碎片m/z 781[M—H—ellagic acid]—，7和10號(hào)峰的分子離子峰為m/z 781[M—H]—，保留時(shí)間分別為7.82 min和8.28 min，失去一個(gè)葡萄糖碎片產(chǎn)生碎片離子m/z 601[M—H—glu]—。根據(jù)元素組成，推測其分子式為C34H22O22，相對分子質(zhì)量理論值為m/z 781.0519，7號(hào)峰實(shí)測值為m/z 781.0526，峰10實(shí)測值m/z 781.0523。結(jié)合碎片離子m/z 301(DPPH)，7和10號(hào)峰被推測為punicalin及其同分異構(gòu)體[20]。

16和18號(hào)峰的保留時(shí)間分別為14.39 min和14.76 min，分子離子峰為m/z 783[M—H]—，結(jié)合文獻(xiàn)數(shù)據(jù)[22]，特征碎片離子有m/z 391[M — 2H]2—，m/z 631，m/z 451，m/z 299。根據(jù)元素組成，推測其分子式為C34H24O22，相對分子質(zhì)量理論值為m/z 783.0675，16號(hào)峰實(shí)測值為m/z 783.0674，18號(hào)峰實(shí)測值為m/z 783.0681。16和18號(hào)峰初步推測為terflavin B及其異構(gòu)體。25號(hào)峰在保留時(shí)間15.43—18.41 min范圍內(nèi)出現(xiàn)了一個(gè)寬峰，表明其可能由幾個(gè)同分異構(gòu)體組成，分子離子峰為m/z 1085[M—H]—。根據(jù)元素組成，推測其分子式為C48H30O30，相對分子質(zhì)量理論值為m/z 1085.0738，25號(hào)峰實(shí)測值為m/z 1085.0732，結(jié)合文獻(xiàn)數(shù)據(jù)[22]，25號(hào)峰被初步推測為terflavin A。

m/z 337[Chebulic acid—H—H2O]—是訶子次鞣質(zhì)類化合物的特征碎片，是由訶子次鞣質(zhì)的基本結(jié)構(gòu)單元訶子次酸(Chebulic acid)分子內(nèi)失去一個(gè)中性碎片H2O形成，該類化合物的特征碎片還有m/z 319[Chebulic acid— H — H2O — H2O]—，m/z 293[Chebulic acid—H — H2O-CO2]—，m/z 275[Chebulic acid— H — H2O— H2O — CO2]—。

35和38號(hào)峰的保留時(shí)間分別為21.68 min和23.33 min，分子離子峰為m/z 971.10[M—H]—。根據(jù)元素組成，推測其分子式為C41H32O28，相對分子質(zhì)量理論值為m/z 971.0996，35號(hào)峰實(shí)測值為m/z 971.1001，38號(hào)峰實(shí)測值為m/z 971.1005，結(jié)合特征碎片離子m/z 953[M — H — H2O]—，m/z 935[M — H — 2H2O]—，m/z 467[M—2H—2H2O]2—，初步推測其為neochebulagic acid及其異構(gòu)體[19]。

44號(hào)峰的保留時(shí)間為27.91 min，分子離子峰為m/z 989[M—H]—。根據(jù)元素組成，推測其分子式為C41H34O29，相對分子質(zhì)量理論值為m/z 989.1102，實(shí)測值為m/z 989.1109。結(jié)合特征碎片離子m/z 494[M—2H]2-，m/z 337。峰44被推測為chebuloyl neochebuloyl galloylglucose[19]。

45和51號(hào)峰的保留時(shí)間為29.02 min和35.30 min，分子離子峰為m/z 803[M—H]—，該離子失去一個(gè)中性碎片沒食子酸后產(chǎn)生碎片離子m/z 633[M—H—gallic]—，該離子失去一個(gè)沒食子?；a(chǎn)生碎片離子m/z 651[M-H-galloyl]—，繼續(xù)失去一個(gè)沒食子酸中性碎片形成m/z 481[M—galloy—gallic]—。根據(jù)元素組成，推測其分子式為C34H28O23，相對分子質(zhì)量理論值為m/z 803.0938，45號(hào)峰實(shí)測值為m/z 803.0944，51號(hào)峰實(shí)測值為m/z 803.0945。結(jié)合其特征離子m/z 337，m/z 319，m/z 293，m/z 275，m/z 401[M — 2H]2—，45和51號(hào)峰被推測為digalloyl—chebuloyl—glucose及其同分異構(gòu)體[22]。

53號(hào)峰的保留時(shí)間為37.67 min，分子離子峰為m/z 973[M—H]—，連續(xù)失去沒食子?；a(chǎn)生碎片離子m/z 821[M — H — galloy]—、m/z 669[M — H — 2galloy]—、m/z 517[M—H—3galloy]—，失去一個(gè)沒食子酰后繼續(xù)失去一個(gè)沒食子酸中性碎片產(chǎn)生碎片離子m/z 651[M—H—galloy—gallic]—。根據(jù)元素組成，推測其分子式為C41H34O28，相對分子質(zhì)量理論值為m/z 973.1153，實(shí)測值為m/z 973.1148。結(jié)合特征碎片m/z 337，53號(hào)峰被推測為neochebulinic acid。

圖2 訶子鞣質(zhì)類、酚酸類部分化合物結(jié)構(gòu)圖

48和59號(hào)峰的保留時(shí)間分別為34.04 min和43.35 min，分子離子峰為m/z 953[M—H]—，該離子失去一個(gè)羧基形成碎片離子m/z 454[M—H—COOH]2-。根據(jù)元素組成，推測其分子式為C41H30O27，相對分子質(zhì)量理論值為953.0891，48號(hào)峰實(shí)測值為953.0881，59號(hào)峰實(shí)測值為953.0898。根據(jù)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)結(jié)合特征離子有 m/z 476[M — 2H]2—，m/z 633，m/z 463，m/z 300(DPPH)，二者初步被鑒定為galloyl chebuloyl—HHDP-glucose[17，19]，進(jìn)一步與標(biāo)準(zhǔn)品對比，48 號(hào)峰被鑒定為chebulagic acid。

峰4和12的保留時(shí)間為5.26 min和10.80 min，分子離子峰為m/z 355[M—H]—。依據(jù)特征離子m/z 337[M—H—H2O]—、m/z 711[2M—H]—。根據(jù)元素組成，推測其分子式為C14H12O11，相對分子質(zhì)量理論值為m/z 355.0296，峰4實(shí)測值為m/z 355.0292，峰12實(shí)測值為m/z 355.0302。因此4和12號(hào)峰被初步鑒定為chebulic acid及其異構(gòu)體[17，19]。峰37，保留時(shí)間為 23.15 min，分子離子峰為m/z 683[M—H]—，失去一個(gè)沒食子酸中性碎片產(chǎn)生碎片離子m/z 513[M—H—gallic]—，失去一個(gè)沒食子酰基后產(chǎn)生碎片離子m/z 531[M—H—galloyl]—，繼續(xù)失去一個(gè)沒食子酸中性碎片產(chǎn)生碎片離子m/z 351[M—H—galloyl—gallic]—。根據(jù)元素組成，推測其分子式為C28H28O20，相對分子質(zhì)量理論值為m/z 683.1090，實(shí)測值為m/z 683.1096。因此，峰37被初步推測為 methyl neochebulanin[16，19]。

29和41號(hào)峰的保留時(shí)間分別為19.40 min和24.60 min，分子離子峰為m/z 651[M—H]—。根據(jù)元素組成，推測其分子式為C27H24O19，相對分子質(zhì)量理論值為m/z 651.0828，實(shí)測值為m/z 651.0828。結(jié)合特征碎片離子m/z 633[M—H—H2O]—，29和41號(hào)峰被初步推測為chebulanin及其同分異構(gòu)體。

50號(hào)峰的保留時(shí)間為35.09 min，分子離子峰為m/z 985[M—H]—，失去一個(gè)CH2（14u）中性碎片產(chǎn)生碎片離子m/z 971[[M—H—CH2]—，失去一個(gè)沒食子酸中性碎片和沒食子?；螽a(chǎn)生碎片離子m/z 633[M—galloy—gallic]—。根據(jù)元素組成，推測其分子式為C42H34O28，相對分子質(zhì)量理論值為m/z 985.1153，50號(hào)峰實(shí)測值為m/z 985.1148。結(jié)合文獻(xiàn)數(shù)據(jù)和特征碎片離子m/z 492[M — 2H]2—，m/z 351[methyl neochebulate—H—H2O]—，50號(hào)峰被推測為methyl neochebulagate及其同分異構(gòu)體[22]。

56和57號(hào)峰的保留時(shí)間分別為40.23 min和40.97 min，分子離子峰為m/z 987[M—H]—。根據(jù)元素組成，推測其分子式為C42H36O28，相對分子質(zhì)量理論值為m/z 987.1309，實(shí)測值為m/z 987.1308。依據(jù)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)和特征碎片m/z 973[M—H—CH2]—，m/z 493[M—2H]2—，m/z 351[methyl neochebulate— H — H2O]—，56和57號(hào)峰被推測為methyl neochebulinate及其同分異構(gòu)體[22]。

58號(hào)峰的保留時(shí)間為41.32 min，分子離子峰為m/z 955[M—H]—，連續(xù)失去沒食子?；a(chǎn)生碎片離子m/z 803[M — galloyl]—、m/z 651[M — 2galloyl]—、m/z 499[M—3galloyl]—，失去3個(gè)沒食子?；罄^續(xù)失去一個(gè)葡萄糖產(chǎn)生碎片離子峰m/z 319[M—3galloyl—glu]-。根據(jù)元素組成，推測其分子式為C41H32O27，相對分子質(zhì)量理論值為m/z 955.1047，實(shí)測值為m/z 955.1030。因此，58號(hào)峰被推測為chebulinic acid[17]。

2.5 三萜類化合物鑒定

在負(fù)離子模式下，61和62號(hào)峰其分子離子峰為m/z 503[M—H]—，該離子脫去CO2（14u）形成碎片離子m/z 459[M-H-CO2]—。根據(jù)元素組成分析，兩者分子式為C30H48O6，相對分子質(zhì)量理論值為m/z 503.3367，實(shí)測值為m/z 503.3378和m/z 503.3373。盧普平等人從訶子乙醇提取物中分離得到的三萜類化合物有arjungenin，分子式均為C30H48O6，其相對分子質(zhì)量為m/z 503.3367，與所測數(shù)據(jù)一致，因此初步推測61和62號(hào)峰為arjungenin及其同分異構(gòu)體。

3 總結(jié)與討論

本實(shí)驗(yàn)采用HPLC—MS技術(shù)對訶子提取物的化學(xué)成分進(jìn)行研究，通過高分辨質(zhì)譜中精確分子質(zhì)量歸屬出元素組成，分析裂解碎片信息，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)品信息及相關(guān)文獻(xiàn)共鑒定出62種化學(xué)成分，主要為可水解鞣質(zhì)類。其中，14個(gè)化合物為首次從訶子中鑒定得到。分析了已鑒定化合物的質(zhì)譜碎裂途徑，推測出酸類和可水解鞣質(zhì)類化學(xué)成分的質(zhì)譜裂解規(guī)律，可為中藥化學(xué)成分及其類似物質(zhì)的結(jié)構(gòu)解析提供參考。