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        錦燈籠宿萼與果實的石油醚部位化學成分及抗氧化活性比較①

        2020-02-28 05:30:52吳莉莉
        關(guān)鍵詞:分析

        吳 爽,吳莉莉,趙 稷,滕 楊

        (佳木斯大學北藥與功能食品實驗室,黑龍江 佳木斯 154007)

        0 引 言

        錦燈籠(PhysalisalkekengiL.var.francheti(Mast.)Makino)是茄科(Solanaceae)酸漿(PhysalisalkekengiL.)屬植物,多年生草本植物[1],又稱之為紅姑娘,洛神珠,掛燈籠,燈籠草,泡泡草等,被《中國藥典》2015 年版一部收載[2]。本品具有清熱、解毒、鎮(zhèn)痛、強心、利尿之功能,用于治療熱咳、咽痛、黃疸、痢疾、水腫,疔瘡和丹毒[3],現(xiàn)代藥理研究表明錦燈籠具有顯著的抗炎[4]、抗菌[5]、抗腫瘤[6]、防治糖尿病[7,8]、利尿[9]和血管舒張[10,11]等藥理活性。目前國內(nèi)外研究多集中宿萼的化學成分和藥理作用,而單獨對果實化學成分的研究較少,根據(jù)民間百姓秋冬的做法,大多是食用其果實,有很好的止咳、降糖作用,因此對錦燈籠果實的化學成分進行提取與分析,并對錦燈籠宿萼與果實的石油醚部位化學成分及抗氧化活性的比較研究是十分有意義的,為其在營養(yǎng)、保健和藥用等方面的應用提供參考依據(jù)。

        1 儀器與試劑

        RE-52型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠);FA2004型電子天平,(上海恒平科學儀器有限公司);電熱恒溫水浴鍋(余姚市遠東數(shù)控儀器廠);U3000-Q Exactive型LC-MS/MS(美國Thermo公司);UV757 紫外分光光度計(上海精密科學儀器有限公司)。

        甲醇(色譜純,天津市凱通化學試劑有限公司));乙醇、丙酮、(分析純,天津市凱通化學試劑有限公司);石油醚為分析純級(天津市富宇精細化工有限公司)。

        2 方 法

        2.1 錦燈籠宿萼與果實的石油醚萃取物制備

        將錦燈籠宿萼與果實人工剝離,分別將其宿萼(297.13 g)與果實(2286.27 g)部分剪碎,以95 % 乙醇(固液比1∶3)在74 ℃恒溫水浴鍋反復浸提3次,每次24 h,合并提取液,減壓濃縮蒸干,再分別將浸膏經(jīng)水溶解、石油醚萃取(體積比1∶1),得石油醚提取物。

        2.2 MS/MS分析石油醚部位化學成分

        離子傳輸毛細管的溫度為320 ℃,蒸發(fā)溫度為350 ℃,毛細管的電壓為3.0 kV,鞘氣壓力為30 bar,輔助氣壓為10 bar,采集方式為單離子檢測掃描(single ion monitoring,SIM),離子極性為負離子,離子化方式為電噴霧離子化。

        甲醇溶解上述宿萼與果實的石油醚萃取物制成濃度0.01 g·mL-1的樣品溶液,進樣10 μL進行質(zhì)譜分析。再將得到的質(zhì)譜數(shù)據(jù)在數(shù)據(jù)庫中檢索,對照信號強度、相對分子質(zhì)量等分析錦燈籠宿萼與果實中所含的化學成分。

        2.3 錦燈籠宿萼與果實的石油醚萃取物清除DPPH·自由基能力考察

        樣品溶液的配制:分別精密稱取錦燈籠宿萼與果實石油醚萃取物 1.003 g和1.000g 置于2燒杯中,均用95 % 乙醇溶解定容至 100 mL,再分別移取0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 mL稀釋為2mL得濃度為0.002、0.004、0.006、0.008、0.01 g·mL-1的宿萼石油醚部位樣品溶液,搖勻備用。方法同上配制濃度為0.0008、0.0016、0.0024、0.0032、0.0040 g·mL-1的果實石油醚部位樣品溶液,搖勻備用。

        DPPH·溶液配制:精確稱取0.0212 g DPPH·乙醇溶解,定容至250 mL,配制成濃度為0.2 mol·L-1的DPPH·溶液。

        取10 mL試管30支,15支為一組,取其中10支各自加入上述樣品溶液2.0 mL,再加入新鮮配制的DPPH·溶液2.0 mL,充分混合均勻,在室溫下放到避光處進行反應30 min,于517 nm波長處測定其吸光度,記為AR;其他條件不變,用無水乙醇代替待測AR中的錦燈籠宿萼樣品溶液,并測其吸光度A0,同樣加入不同濃度的宿萼樣品溶液2.0 mL 于試管中,再加入2.0 mL 95 % 乙醇溶液,混合均勻,方法同上測得其吸光度AX,平行測定三次,并以Vc做陽性對照。錦燈籠宿萼與果實石油醚萃取物清除DPPH·的計算公式為E%=1-(AR-AX/A0)×100% 。

        3 結(jié)果與討論

        3.1 錦燈籠宿萼與果實的石油醚萃取結(jié)果

        按“2.1”項下方法得錦燈籠宿萼與果實石油醚部位提取物分別為19.37 g和11.70g。

        3.2 MS/MS分析宿石油醚部位成分結(jié)果

        石油醚部位成分復雜且多為已知的小分子化合物,對其主要成分進行定性分析,按“2.2”項下方法經(jīng)MS/MS檢測,通過對每個色譜峰的二級碎片進行分析,并與mzCloud、Thermo mzVault Mass Frontier中相關(guān)信息綜合對比,從宿萼和果實中分別得到8個和10個小分子化學成分,見表1。錦燈籠宿萼和果實石油醚部位的化學成分主要為氨基酸、生物堿和黃酮類化合物等,且僅存在2個相同化合物羥基酪醇和L-苯丙氨酸,其它均不相同,可見錦燈籠宿萼和果實石油醚部位的化學成分存在明顯差異。

        表1 MS/MS分析宿萼與果實石油醚部位化學成分

        3.3 石油醚萃取物清除DPPH·自由基結(jié)果

        按照“2.3”項的操作方法,測定結(jié)果顯示錦燈籠宿萼與果實的石油醚部位對DPPH·自由基具有一定的清除能力結(jié)果見表2。宿萼的石油醚萃取物在濃度為0.002 g·mL-1時,清除率為30.0%, 1.000 g·mL-1時,清除率為87.5 %,隨著濃度的遞增,對DPPH·自由基清除能力呈現(xiàn)遞增趨勢,用 IC50計算軟件計算所得的 IC50值為3.416 mg·mL-1;同樣果實的石油醚萃取物在濃度為0.0008 g·mL-1時,清除率為33.3%, 0.0040g·mL-1時,清除率為82.7 %,亦成劑量依賴關(guān)系, IC50值為1.711 mg·mL-1;且同濃度0.0040 g·mL-1果實的石油醚部位對DPPH·自由基的清除能力大于宿萼的石油醚部位。

        表2宿萼與果實石油醚部位清除DPPH·自由基結(jié)果

        序號宿萼石油醚部位果實石油醚部位Vc濃度g·mL-1清除率%濃度g·mL-1清除率%清除率%10.002030.00.000833.391.220.004054.70.001639.593.130.006074.40.002455.593.740.008081.60.003274.193.751.000087.50.004082.793.8

        4 結(jié) 論

        本實驗利用MS/MS分析錦燈籠宿萼與果實石油醚萃取物的化學成分,共分析得到16種化學成分,僅有2種相同的化合物,故有很大的差異性;考察了錦燈籠宿萼與果實石油醚萃取物對DPPH·自由基的清除能力,IC50值分別為3.416、1.711mg mL-1,因此其果實的石油醚部位抗氧化活性優(yōu)于宿萼的石油醚部位。實驗結(jié)果為進一步開發(fā)本植物不同部位的活性功能提供理論依據(jù)與參考。

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