楊春雨 ，張 爭(zhēng) ，魏建和 ，，馮錦東 ，甘炳春 ，楊新全

（1.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所海南分所·海南省南藥資源保護(hù)與開(kāi)發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，海南 萬(wàn)寧 571533；2.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所，北京 100094）

廣藿香是唇形科植物廣藿香 Pogostemon cablin（Blanco）Benth.的干燥地上部分，以葉、梗入藥，味辛，性微溫，歸脾、胃、肺經(jīng)，功能芳香化濕、和胃止吐、祛暑解表，主治濕阻中焦之脘腹痞悶、食欲不振、嘔吐、泄瀉，外感暑濕之寒熱頭痛，濕溫初起的發(fā)熱身困、胸悶、惡心，鼻淵，手足癬[1]。廣藿香是海南重點(diǎn)開(kāi)發(fā)的南藥品種，經(jīng)多年努力，其種植已具有相當(dāng)規(guī)模，也形成了完整的產(chǎn)業(yè)鏈。但廣藿香會(huì)發(fā)生一種青枯病，造成大量死株，嚴(yán)重影響單產(chǎn)，從而威脅到廣藿香產(chǎn)業(yè)的生存與發(fā)展。筆者從地域到植株方面對(duì)廣藿香青枯病病原菌的分布進(jìn)行了調(diào)查統(tǒng)計(jì)和分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 設(shè)備與材料

etrex GARMIN GPS手持機(jī)（北京合眾思?jí)压荆?；D-1型自動(dòng)蒸汽滅菌鍋（北京發(fā)恩科貿(mào)有限公司）；RXM智能型人工氣候箱（寧波市科技園區(qū)新江南儀器有限公司）；SW-CJ-1D型凈化工作臺(tái)（蘇州凈化設(shè)備有限公司）。廣藿香（海南省萬(wàn)寧市廣藿香種植區(qū)）。

2 方法與結(jié)果

2.1 廣藿香青枯病的癥狀、病原菌及病株分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)

癥狀及病原菌：開(kāi)始發(fā)病時(shí)，部分葉片萎垂，逐漸發(fā)展到整株調(diào)萎，最后死株。病原菌為青枯假單胞桿菌[Pseudomonas solanacearum（Smith）Smith.]，生物變種為3個(gè)。該病原菌落為非正圓形，稍突起，有光澤，帶黏性，乳白色，中央桃紅，具流動(dòng)性。菌體為桿狀，兩端鈍圓，多數(shù)單個(gè)，也有成雙排列；細(xì)菌有運(yùn)動(dòng)性，菌體大小為 0.4～0.6×0.9～1.4 μm，鞭毛極生，1～3根；主要寄主范圍為廣藿香、番茄、茄子、辣椒、馬鈴薯、煙草、花生、芝麻和絲瓜。菌體適合培養(yǎng)條件為溫度32℃、相對(duì)濕度80%～85%，培養(yǎng)基為T(mén)ZC葡萄糖蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基、金氏B培養(yǎng)基[2]等。

病株分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：病害葉片少于10%為1級(jí)，病害葉片11%～20%為2級(jí)，病害葉片21% ～50%為3級(jí)，病害葉片51% ～80%為4級(jí)，病害葉片大于81%（至死亡）為5級(jí)。

2.2 病原菌分布區(qū)域與發(fā)病率調(diào)查

廣藿香苗木種植株距為40 cm，調(diào)整每步約為40 cm，用步數(shù)丈量田間畦長(zhǎng)，計(jì)算每畦株數(shù)，記為調(diào)查總株數(shù)；再點(diǎn)發(fā)病株的數(shù)量，記為發(fā)病株數(shù)。發(fā)病率（%）=（發(fā)病株數(shù)/調(diào)查總株數(shù)）×100。

2008年4月14日至15日，筆者對(duì)海南萬(wàn)寧地區(qū)廣藿香種植區(qū)進(jìn)行了全面調(diào)查，發(fā)現(xiàn)每個(gè)種植點(diǎn)都有廣藿香青枯病發(fā)生。同時(shí)，隨機(jī)調(diào)查了大茂鎮(zhèn)乳園村、禮紀(jì)鎮(zhèn)清溪村、長(zhǎng)豐鎮(zhèn)下李村和福田溝土村、南橋鎮(zhèn)龍貢灣村等4個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)9個(gè)種植點(diǎn)，共隨機(jī)調(diào)查了廣藿香10 759株，其中正常植株有8 964株，發(fā)病植株有1 795株，平均發(fā)病率為16.68%。結(jié)果見(jiàn)表1。可見(jiàn)，在萬(wàn)寧市每個(gè)種植區(qū)都有廣藿香青枯病發(fā)生，分布沒(méi)有地域選擇性。

表1 海南萬(wàn)寧地區(qū)廣藿香青枯病發(fā)病率調(diào)查結(jié)果表

2.3 病原菌在植株上的分布調(diào)查

主干：采樣植株分為正常株和病株，取根基部1～2 cm，主干中部1～2 cm和主干頂部1～2 cm，以75%酒精浸泡1 min消毒，用滅菌刀將樣本從中間破開(kāi)，在樣本切面上扎幾次，然后用刀在KBA（TZC）平板培養(yǎng)基上點(diǎn)刺接種。在32℃和85%相對(duì)濕度條件下培養(yǎng)24～48 h，觀察培養(yǎng)結(jié)果。若刺點(diǎn)無(wú)色，則說(shuō)明沒(méi)有廣藿香青枯病病原菌；若出現(xiàn)桃紅色斑點(diǎn)，再經(jīng)過(guò)鑒定為廣藿香青枯病原菌則確定為帶菌點(diǎn)。在廣藿香種植區(qū)進(jìn)行隨機(jī)采樣，共采集1 832株，其中正常株763株，帶病株1 069株（病株分級(jí)為1～2級(jí)），調(diào)查結(jié)果見(jiàn)表 2?？梢?jiàn)，表 2 中，若把 C，D，E 歸為甲組，F(xiàn)，G，H 歸為乙組，則C對(duì)F，D對(duì)G，E對(duì)H在數(shù)值上都是反向?qū)?yīng)項(xiàng)。反向?qū)?yīng)項(xiàng)的百分率在各自組（甲組、乙組）中應(yīng)該表現(xiàn)為，若一個(gè)相對(duì)較高，另一個(gè)則應(yīng)相對(duì)較低，反之亦然。但統(tǒng)計(jì)結(jié)果并非完全如此，說(shuō)明所統(tǒng)計(jì)的數(shù)據(jù)是沒(méi)有規(guī)律的。因此，廣藿香青枯病病原菌在正常植株主干及1～2級(jí)病株主干上的分布均是隨機(jī)的。

表2 海南萬(wàn)寧地區(qū)廣藿香青枯病病原菌在主干上的分布調(diào)查結(jié)果[株（%）]

莖、葉：采樣植株分為正常株和病株，隨機(jī)采取帶葉片的節(jié)點(diǎn)1～2 cm，連同該莖上的葉柄和葉片。消毒方法同主干采樣。用0.55×20型號(hào)的滅菌注射針頭，分別在莖、葉柄和葉片（葉脈）上多扎幾次，然后于KBA（TZC）平板培養(yǎng)基上點(diǎn)刺接種。培養(yǎng)和檢測(cè)方法同主干采樣。在廣藿香種植區(qū)進(jìn)行隨機(jī)采樣，共采集1 988個(gè)莖、葉樣本，其中正常植株莖、葉樣本788個(gè)，帶病植株莖、葉樣本1 200個(gè)（病株分級(jí)為1～2級(jí)）。統(tǒng)計(jì)結(jié)果見(jiàn)表3?？梢?jiàn)，在表3中，都是b項(xiàng)的百分率最高；而且用表2分析方法進(jìn)行分析，結(jié)果也是無(wú)規(guī)律的。說(shuō)明表3中的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)是無(wú)規(guī)律的。因此，廣藿香青枯病病原菌在正常植株、1～2級(jí)病株的莖及其葉上的分布均是隨機(jī)的。

表3 海寧萬(wàn)寧地區(qū)廣藿香青枯病病原菌在莖、葉上的分布調(diào)查結(jié)果[株（%）]

3 討論

在針刺和刀刺采菌過(guò)程中，由于菌體小，刺采面積不完全，刺到菌的幾率沒(méi)有達(dá)到100%，故實(shí)驗(yàn)誤差可能存在。但由于取樣數(shù)量大，結(jié)果基本上能反映廣藿香青枯病病原菌分布的真實(shí)情況。調(diào)查結(jié)果顯示，在海南省萬(wàn)寧市廣藿香青枯病的平均發(fā)病率為16.68%；病原菌的分布沒(méi)有地域選擇性；在正常和大體正常（1～2級(jí)病株）廣藿香植株的分布是隨機(jī)的，沒(méi)有器官選擇性。筆者認(rèn)為，既然廣藿香青枯病原菌植株分布是隨機(jī)的，用本方法在植株上檢測(cè)不到病原菌，但并不等于它們不存在，那么不能得出正常植株帶菌率的統(tǒng)計(jì)結(jié)果。本次調(diào)查結(jié)果表明，海南廣藿香青枯菌與廣藿香青枯病之間的關(guān)系比較復(fù)雜，帶菌植株不一定發(fā)病。對(duì)于1～2級(jí)廣藿香青枯病植株，若能及時(shí)治療，則可恢復(fù)正常，因此將1～2級(jí)病株歸入“大體正常植株”，與正常植株一起作調(diào)查統(tǒng)計(jì)。

[1]中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委.中華本草（第7冊(cè)）[M].上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，1999：130-134.

[2]文衍堂，鄭小波.海南島廣藿香、沙姜青枯病病原鑒定[J].熱帶作物學(xué)報(bào)，1984（2）：113-120.