白玉紅　鄭清娉　胡克菲

[摘要] 目的:建立高效液相色譜法測定珍黃片的含量。方法:采用高效液相色譜法對制劑中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1和三七皂苷R1的含量進行測定。結果:人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1和三七皂苷R1的線性范圍分別為1.144～11.440 μg(r=0.999 9)、0.948～9.480 μg(r=0.999 9)和0.434～4.340 μg(r=0.999 8),平均回收率分別為96.46%(RSD=1.01%)、98.17%(RSD=1.02%)和96.27%(RSD=1.16%)。結論: 該方法簡便、靈敏、準確,適用于珍黃片的含量測定。

[關鍵詞] 珍黃片;含量測定;高效液相色譜

[中圖分類號]R927.2[文獻標識碼]B [文章編號]1674-4721(2009)07(a)-134-02

珍黃片由珍珠、牛黃、三七、黃芩提取物、冰片、豬膽汁等組成,具有清熱解毒,消腫止痛的功效,主要用于咽喉腫痛,瘡瘍熱癤[1]。為了更好地控制其質量,保證臨床用藥安全有效,本實驗采用了HPLC法測定了制劑中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1和三七皂苷R1的含量[2-5],方法簡便、準確、可靠。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津LC-2010高效液相色譜儀,Intersil C18柱(4.6 mm×150 mm,5 μm)。

1.2 試藥

人參皂苷Rg1對照品(Ⅰ)(供含量測定用,批號:0703-9812)、人參皂苷Rb1對照品(Ⅱ)(供含量測定用,批號:110704-200217)、三七皂苷R1對照品(Ⅲ)(供含量測定用,批號:0745-200006)(中國藥品生物制品檢定所提供);珍黃片(北京因科瑞斯生物制品研究所提供);乙腈為色譜純,水為高純水,其余試劑均為分析純。

2 定量分析

2.1 色譜條件

Intersil C18色譜柱(4.6 mm×150 mm,5 μm);流動相乙腈(A)-水(B)梯度洗脫見表1,檢測波長203 nm,流速1.5 ml/min,柱溫30 ℃,進樣量10 μl,理論板數(shù)按Ⅲ峰計算應不低于2 000。在該色譜條件下,樣品中被測成分能夠達到基線分離,保留時間在15 min內,陰性無干擾,色譜圖見圖1。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ對照品適量,加甲醇制成每1 ml含Ⅰ0.55 mg、Ⅱ0.45 mg和Ⅲ0.20 mg的混合溶液,即得。

2.3 供試品溶液的制備

取本品細粉適量(約1.5 g),精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入甲醇50 ml,稱定重量,加熱回流提取2 h,放冷,用甲醇補足減失的重量,濾過,精密量取續(xù)濾液25 ml,蒸干,殘渣加1%氫氧化鈉50 ml,分次溶解并移入分液漏斗中,用水飽和的正丁醇振搖提取5次(分別為30,30,20,20,20 ml),合并正丁醇液,用正丁醇飽和的水洗滌至中性,每次25 ml,正丁醇液另器貯存,合并水液,用水飽和的正丁醇30 ml振搖提取,醇液與上述正丁醇液合并,蒸干,殘渣加乙醚5 ml洗滌,棄去乙醚液,殘渣揮盡乙醚,加甲醇溶解,并移至10 ml量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻,用微孔濾膜(0.45 μm)濾過,取續(xù)濾液,即得。

2.4 陰性樣品溶液的制備

按珍黃片處方,除去三七藥材,制備陰性對照樣品。按“供試品溶液的制備”項制備陰性樣品溶液。

2.5 線性關系考察

分別精密稱取Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ對照品適量,加甲醇溶解并稀釋,制得濃度分別為1.144 mg/ml、0. 948 mg/ml和0.434 mg/ml的對照品溶液。分別精密吸取該溶液1、2、5、7、10 ml,置于10 ml的容量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,各進樣10 μl,連續(xù)進樣2次,按上述色譜條件測定峰面積。以對照品進樣量(X)為橫坐標,色譜峰峰面積為縱坐標(Y),繪制標準曲線,回歸方程見表2。

2.6 精密度試驗

取同一批供試品溶液,在上述色譜條件下連續(xù)進樣5次,各樣品峰面積的RSD分別為:Ⅰ1.38%,Ⅱ1.11%,Ⅲ1.96%,表明精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗

取同一批供試品溶液,在上述色譜條件下,分別于0,2,4,8,12,24 h測定,各樣品在24 h內峰面積的RSD分別為:Ⅰ0.69%,Ⅱ1.00%,Ⅲ1.88%,表明樣品在24 h內基本穩(wěn)定。

2.8 重復性試驗

取同一批樣品,按擬定的方法平行測定6份,平均含量為Ⅰ8.21 mg/g,Ⅱ7.21 mg/g,Ⅲ1.97 mg/g,RSD分別為:Ⅰ0.82%,Ⅱ1.82%,Ⅲ1.91%,表明該方法的重復性較好。

2.9 加樣回收率試驗

精密稱取已知含量的樣品6份,各加入一定量的Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ,在上述色譜條件下測定,計算回收率,平均回收率分別為Ⅰ96.46%,Ⅱ98.17%,Ⅲ96.27%,RSD分別為:Ⅰ1.01%Ⅱ1.02%,Ⅲ1.06%

2.10 樣品測定

取五批樣品(批號:20041019、20041122、20050303、20050601、20050605),分別按“供試品溶液的制備”項制備供試品溶液,準確吸取供試液10 μl,在上述色譜條件下測定,總含量(mg/g)分別為5.11、5.14、5.14、5.11、5.16。

3 討論

3.1 流動相的選擇

通過參考有關文獻,測定三七中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1的流動相多為乙腈-水梯度洗脫。經(jīng)試驗,采用文中流動相,對照品及供試品溶液中各色譜峰均能達到基線分離,效果良好。

3.2 檢測波長的選擇

取人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1對照品,加甲醇分別制成20、30、50 μg/ml的溶液,用紫外可見分光光度儀分別進行200～400 nm波長的掃描,可見人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1均在203 nm處有最大吸收峰,故選擇203 nm作為檢測波長。

本文提出的 HPLC法能簡便、靈敏、準確地測定珍黃片的含量,能滿足質量控制需要。

[參考文獻]

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].一部.北京:化學工業(yè)出版社,2000:248.

[2]宋崇順.清熱解毒藥與瀉火藥相配伍的實驗研究[J].中國中藥雜志,1995,20(4):243-246.

[3]邵愛新.薄層掃描測定清熱解毒口服液中梔子苷的含量[J].藥物分析雜志,1991,11(3): 150-152.

[4]董建萍.對清熱解毒口服液質量標準的探討[J].中國藥品標準,2002,3(6):41-42.

[5]謝沐峰.高效液相色譜法測定含量時關于確定色譜條件與溶液濃度的討論[J].中國藥品標準,2008,9(4):288-289.

(收稿日期:2009-04-29)