術(shù)的迅猛發(fā)展，單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序已成為研究復(fù)雜生物系統(tǒng)和個(gè)體差異的強(qiáng)大工具。單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)的應(yīng)用不僅幫助我們理解疾病的發(fā)生機(jī)制和進(jìn)展過(guò)程，還有助于揭示個(gè)體細(xì)胞之間的異質(zhì)性和亞群表達(dá)特征，實(shí)現(xiàn)對(duì)單個(gè)細(xì)胞基因表達(dá)的高分辨率測(cè)量，為精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)的實(shí)現(xiàn)提供了新的可能性[1]。了解和掌握單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)的原理和應(yīng)用，對(duì)于醫(yī)學(xué)生增強(qiáng)科研能力和臨床實(shí)踐具有重要意義。通過(guò)單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序分析，我們可以深入了解疾病發(fā)生過(guò)程中細(xì)胞的表觀遺傳和轉(zhuǎn)錄調(diào)控變化，從而發(fā)現(xiàn)新的生物

合細(xì)胞的特征，單細(xì)胞測(cè)序從一定程度上解決了傳統(tǒng)測(cè)序固有的缺陷，包括單細(xì)胞基因組測(cè)序、轉(zhuǎn)錄組測(cè)序及表觀遺傳組測(cè)序，單細(xì)胞基因組測(cè)序可用來(lái)分析單細(xì)胞水平的點(diǎn)突變和拷貝數(shù)變異，用于揭示細(xì)胞群體差異、細(xì)胞進(jìn)化關(guān)系等，可最真實(shí)的獲得單克隆癌細(xì)胞的具體突變來(lái)源及精準(zhǔn)的突變頻率，單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序可對(duì)單細(xì)胞中mRNA 進(jìn)行基因表達(dá)定量、功能富集、代謝通路等分析，可以解決傳統(tǒng)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)在各研究領(lǐng)域中的樣品量極低或細(xì)胞異質(zhì)性的問(wèn)題，表觀遺傳組測(cè)序可從單細(xì)胞水平獲得全基因組

織的分析介紹，單細(xì)胞分析技術(shù)從單個(gè)細(xì)胞層面對(duì)細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能進(jìn)行分析從而得到更加全面的信息[1]，這有效地彌補(bǔ)由細(xì)胞異質(zhì)性導(dǎo)致個(gè)體或組織平均數(shù)值引起的誤差[2-3]，為更加充分地了解疾病發(fā)生、發(fā)展的機(jī)制以及個(gè)體差異化的研究提供了補(bǔ)充。了解單細(xì)胞層面的研究方法有很多，如質(zhì)譜、單細(xì)胞測(cè)序、微流控芯片、流式細(xì)胞術(shù)等技術(shù)[4]。利用這些技術(shù)從“組學(xué)”角度探討單個(gè)細(xì)胞內(nèi)基因、蛋白等分子的分布、動(dòng)態(tài)變化并揭示其中的關(guān)聯(lián)以發(fā)現(xiàn)未知基因或新的細(xì)胞類型等信息[5]。依據(jù)遺傳

要作用［1］。單細(xì)胞基因測(cè)序技術(shù)能直觀反映細(xì)胞基因間的差異性，但其仍無(wú)法具體闡述細(xì)胞在生物體復(fù)雜環(huán)境中的表型和功能。蛋白質(zhì)是細(xì)胞內(nèi)所有功能的直接執(zhí)行者，可提供結(jié)構(gòu)支持、復(fù)制基因組信息、調(diào)節(jié)基因表達(dá)、控制信號(hào)傳導(dǎo)、催化代謝反應(yīng)并在細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)分子等［2］。因此，對(duì)單細(xì)胞蛋白質(zhì)組的定性和定量分析，是揭示細(xì)胞類型及其狀態(tài)的重要工具，在腫瘤異質(zhì)性、干細(xì)胞分化、生殖細(xì)胞發(fā)育、循環(huán)腫瘤細(xì)胞等領(lǐng)域具有重要應(yīng)用價(jià)值。單細(xì)胞蛋白質(zhì)組學(xué)可通過(guò)研究單個(gè)細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的功能信息，揭示

明了幽門螺桿菌單細(xì)胞精準(zhǔn)診療技術(shù)。研究依托原創(chuàng)的臨床單細(xì)胞拉曼藥敏快檢系統(tǒng)（CASTR），建立了單個(gè)細(xì)菌細(xì)胞精度、“鑒定—藥敏—溯源”全流程一體化的幽門螺桿菌診療技術(shù)CAST-R-HP，具有快速病原鑒定、精確藥敏表型檢測(cè)、基于單細(xì)胞全基因組支撐耐藥機(jī)制研究與精準(zhǔn)溯源等優(yōu)勢(shì)。（趙衛(wèi)華、李忠明、何沛蓯）摘自《科技日?qǐng)?bào)》

009年第一個(gè)單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序（Single-cell RNA sequenc ing，sc RNA-seq）技術(shù)問(wèn)世以來(lái)[1]，對(duì)單個(gè)細(xì)胞的遺傳物質(zhì)進(jìn)行測(cè)序已日漸成為生物醫(yī)學(xué)研究的新范式?；谡麄€(gè)轉(zhuǎn)錄組的大量數(shù)據(jù)，scRNA-seq以極高的分辨率提供了有關(guān)基因表達(dá)及其調(diào)控的全面信息，從而能夠精準(zhǔn)地描述細(xì)胞類型和狀態(tài)。近幾年，隨著單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)在靈敏度和精確性方面不斷被改良，不僅可以更高效、更低成本地提供全面的生物信息，同時(shí)也使更精確地解析單個(gè)細(xì)胞的

細(xì)胞的異質(zhì)性。單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)通過(guò)單個(gè)細(xì)胞檢測(cè)腫瘤細(xì)胞的異質(zhì)性、鑒定稀有細(xì)胞、劃分細(xì)胞亞群、追蹤細(xì)胞譜系、定位突變基因、發(fā)現(xiàn)新的腫瘤生物標(biāo)記物等。本文將從測(cè)序技術(shù)的進(jìn)展、單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)的方法及其在腫瘤中的應(yīng)用等3方面進(jìn)行綜述，并對(duì)其發(fā)展前景進(jìn)行展望。1 測(cè)序技術(shù)的進(jìn)展自20世紀(jì)70年代第一代測(cè)序技術(shù)(雙脫氧鏈終止法)問(wèn)世以來(lái)，目前測(cè)序技術(shù)已經(jīng)發(fā)展到第四代(原位測(cè)序法)。原位測(cè)序法可用來(lái)驗(yàn)證已知的腫瘤分子生物標(biāo)記物從而實(shí)現(xiàn)組織異質(zhì)性的可視化，但原位測(cè)序法通常是

群體水平轉(zhuǎn)移到單細(xì)胞水平,單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)應(yīng)運(yùn)而生.在近10多年里,二代測(cè)序、顯微鏡和微流控技術(shù)的改進(jìn)促使具有單細(xì)胞分辨率的各種復(fù)雜數(shù)據(jù)集迅速增加[3-4],在腫瘤學(xué)、免疫學(xué)、發(fā)育生物學(xué)甚至植物學(xué)研究領(lǐng)域,單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)已經(jīng)逐漸普及,極大地推動(dòng)了不同生物學(xué)領(lǐng)域的研究.因而單細(xì)胞測(cè)序數(shù)據(jù)呈現(xiàn)指數(shù)級(jí)的增長(zhǎng),例如張澤民等[5]組建的“新冠肺炎單細(xì)胞中國(guó)聯(lián)盟(SC4)”把單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)應(yīng)用在新冠病毒的研究中,共收集到196個(gè)新冠病人的284個(gè)樣本,超過(guò)25 T近15

8071)1 單細(xì)胞測(cè)序原理單細(xì)胞測(cè)序從單個(gè)細(xì)胞水平上對(duì)DNA或RNA進(jìn)行擴(kuò)增和測(cè)序，主要包括單細(xì)胞分選、核酸提取和文庫(kù)構(gòu)建、高通量測(cè)序和數(shù)據(jù)分析等。單細(xì)胞分選是單細(xì)胞測(cè)序的第一步，如何低成本的獲取大批量高質(zhì)量完整的單細(xì)胞對(duì)于單細(xì)胞測(cè)序非常重要。Gross等[1]詳細(xì)介紹了5種單細(xì)胞分選方法，即有限稀釋法(Limiting Dilution)、顯微操作法(Micromanipulator)、熒光激活細(xì)胞分選(Fluorescence activated c

入研究[8]。單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)能更精準(zhǔn)地從細(xì)胞、基因以及分子層面揭示GC的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移機(jī)制，提高GC的診斷和個(gè)體化治療以及預(yù)后評(píng)估水平。1 單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)隨著流式細(xì)胞術(shù)(fluorescence activated cell sorting，F(xiàn)ACS)[9-10]、激光捕獲顯微切割(laser capture microdissection, LCM)[11-12]以及微流控(microfluidics)[13]等單細(xì)胞分離技術(shù)的出現(xiàn)以及新一代測(cè)序平臺(tái)的

的作用[1]。單細(xì)胞測(cè)序的基本原理是將分離得到的單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行微量RNA擴(kuò)增，然后通過(guò)高通量測(cè)序得到單個(gè)細(xì)胞的表達(dá)量，鑒定細(xì)胞類型，分析細(xì)胞發(fā)育的時(shí)空歷程[2]。第1個(gè)單細(xì)胞RNA測(cè)序結(jié)果于2009年，由北京大學(xué)的湯富酬教授[3]發(fā)表在NatureMethods上，首次探索了小鼠單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄范圍的異質(zhì)性。此后，單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)不斷應(yīng)用于各種科學(xué)研究中。Navin等[4]在2011年發(fā)表了第1篇關(guān)于單細(xì)胞核測(cè)序(SNS，一種單細(xì)胞測(cè)序)在乳腺癌中應(yīng)用的文章。Kim

成細(xì)菌、真菌和單細(xì)胞生物等，而一部分則演化成了病毒。根據(jù)這一理論，病毒最早誕生自4.6億年前。第二種理論是“縮減理論”。這種理論認(rèn)為病毒由具有寄生功能的單細(xì)胞有機(jī)體“退化”而來(lái)。單細(xì)胞有機(jī)體由DNA生物縮減成RNA生物。如果病毒是這樣誕生的，那么科學(xué)家估計(jì)病毒最早誕生自3.7億年前。第三種則是“脫離理論”。根據(jù)脫離理論，原來(lái)自然界里只有細(xì)菌、真菌和單細(xì)胞生物等。因某種原因，它們一些遺傳物質(zhì)脫離并存活了下來(lái)，然后逐漸演化成病毒。如果病毒是這么來(lái)的話，那么病毒

，施奇惠綜 述單細(xì)胞基因組測(cè)序技術(shù)新進(jìn)展及其在生物醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用王卓，申笑涵，施奇惠復(fù)旦大學(xué)生物醫(yī)學(xué)研究院, 上海 201100隨著單細(xì)胞基因組測(cè)序技術(shù)的建立與發(fā)展，對(duì)細(xì)胞基因組特征的分析進(jìn)入了單細(xì)胞水平。單細(xì)胞的基因組分辨率不但使研究人員能夠在單細(xì)胞尺度上分析腫瘤細(xì)胞的異質(zhì)性，也使得傳統(tǒng)上難以檢測(cè)的稀有細(xì)胞的基因組研究成為可能。這些稀有細(xì)胞往往具有重要的生物學(xué)意義或臨床價(jià)值，如癌癥患者血液中循環(huán)腫瘤細(xì)胞(circulating tumor cell, CT

文/俞靈琦讓單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)更簡(jiǎn)單易用，價(jià)格更加可負(fù)擔(dān)，并且更快地推動(dòng)這項(xiàng)技術(shù)走向標(biāo)準(zhǔn)化，成為施威揚(yáng)教授創(chuàng)辦萬(wàn)乘基因的初衷。在新冠肺炎疫情的沖擊下，生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)獲得了更多的重視。其中，單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)在此次防控疫情的過(guò)程中發(fā)揮了重要的作用。那么，何為單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)？單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)于2009年首次被應(yīng)用于胚胎細(xì)胞研究當(dāng)中，2013年《自然》將其評(píng)選為“Method of the Year”。但是，一直以來(lái)，相對(duì)昂貴的成本和復(fù)制的實(shí)驗(yàn)流程限制了其應(yīng)用。隨著測(cè)序變得

116081)單細(xì)胞測(cè)序(single-cell sequencing，SCS)是指在單個(gè)細(xì)胞水平上，對(duì)基因組、轉(zhuǎn)錄組或表觀組進(jìn)行的高通量測(cè)序技術(shù)[1]．在先前的研究中，常常認(rèn)為生物體同一組織中的群體細(xì)胞具有相同功能．然而，組織細(xì)胞間的異質(zhì)性導(dǎo)致了同型細(xì)胞在基因功能和表達(dá)之間存在不同程度的差異．傳統(tǒng)的測(cè)序技術(shù)只能檢測(cè)生物體群體細(xì)胞的整體表達(dá)水平，而非單個(gè)細(xì)胞水平．隨著單細(xì)胞測(cè)序的出現(xiàn)，在單細(xì)胞水平上分析同型細(xì)胞基因功能與表達(dá)之間的差異性成為可能．近年來(lái)，單

460）銅綠假單細(xì)胞是一種分布廣泛的病原菌，是引起下呼吸道感染的元兇之一。并且由于其自身復(fù)雜的耐藥機(jī)制，很容易對(duì)各種類型的抗生素產(chǎn)生耐藥性，加之呼吸道的防御機(jī)制很難將其殺滅，使得由于銅綠假單細(xì)胞菌引起的下呼吸道感染的治療難度增大。對(duì)于當(dāng)前下呼吸道感染銅綠假單細(xì)胞菌的流行現(xiàn)狀，以及其對(duì)于各種抗生素的耐藥性情況進(jìn)行研究，對(duì)于很利用藥與治療具有重要的意義。1 下呼吸道感染銅綠假單細(xì)胞菌的流行情況分析銅綠假單細(xì)胞菌是一種條件致病菌，在諸多報(bào)到中，其主要的定植與感染

422000）單細(xì)胞蛋白是指酵母、細(xì)菌、真菌和微藻等微生物的干燥細(xì)胞，在大型培養(yǎng)系統(tǒng)中生長(zhǎng)，用作人類食品或動(dòng)物飼料的蛋白質(zhì)來(lái)源。與魚(yú)粉相比，大多數(shù)來(lái)自細(xì)菌和酵母的單細(xì)胞蛋白具有相似的賴氨酸、蛋氨酸和半胱氨酸含量，以及較高比例的色氨酸和蘇氨酸（聶琴等，2017）。單細(xì)胞報(bào)道中不僅含有蛋白質(zhì)，還含有游離氨基酸、脂類、碳水化合物、維生素和礦物質(zhì)。利用廢棄材料作為基質(zhì)生產(chǎn)蛋白質(zhì)，提供一種經(jīng)濟(jì)可行的蛋白質(zhì)來(lái)源，可用于動(dòng)物飼料和人類消費(fèi)的產(chǎn)品，因?yàn)樗ǔ？梢詽M足日糧蛋

100049）單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)是指在單細(xì)胞水平上，通過(guò)全基因組或轉(zhuǎn)錄組擴(kuò)增，對(duì)核酸分子進(jìn)行高通量測(cè)序的技術(shù)。該技術(shù)能夠揭示單個(gè)細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)和基因表達(dá)水平，反映細(xì)胞間的異質(zhì)性，剖析單個(gè)細(xì)胞對(duì)生態(tài)系統(tǒng)或有機(jī)體的貢獻(xiàn)［1-2］。1990 年，Iscove等［3］首次提出對(duì)單細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組分析的構(gòu)想，并用 PCR技術(shù)實(shí)現(xiàn)了對(duì) cDNA 分子的指數(shù)級(jí)擴(kuò)增。1992年，Telenius等［4］開(kāi)發(fā)出寡核苷酸引物PCR（Degenerate oligonucleotid

試驗(yàn)材料來(lái)獲取單細(xì)胞，利用5%纖維素酶、5%果膠酶、5% β-葡聚糖酶、5%纖維素酶與4%果膠酶混合酶4種酶液，探索酶解四分體胼胝質(zhì)的最佳方案。結(jié)果表明：在37 ℃條件下酶解1 h，5%纖維素酶與4%果膠酶混合酶的酶解效果最佳，可得到品質(zhì)良好的小孢子單細(xì)胞。通過(guò)對(duì)拉制針尖細(xì)長(zhǎng)度、磨針斜口直徑以及顯微操作分離體系的不斷探索與試驗(yàn)，成功建立一套適合巴西橡膠樹(shù)‘熱研7-33-97小孢子單細(xì)胞的顯微分離技術(shù)體系。小孢子單細(xì)胞是減數(shù)分裂的直接產(chǎn)物，對(duì)小孢子單細(xì)胞進(jìn)行

隨著單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)的不斷開(kāi)發(fā)，目前可實(shí)現(xiàn)在單細(xì)胞中研究基因轉(zhuǎn)錄和表觀遺傳調(diào)控等相關(guān)生物學(xué)過(guò)程，單細(xì)胞基因組可以用于分類樣本中細(xì)胞類型，檢測(cè)樣本之間細(xì)胞類型組成和基因表達(dá)的變化，并跟蹤細(xì)胞譜系以及在發(fā)育和衰老階段狀態(tài)的變化等。最近利用微流控液滴或微孔來(lái)分離單個(gè)細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)方法使得單細(xì)胞基因組學(xué)的通量有了數(shù)量級(jí)提升。其基本原理為用單個(gè)液滴包裹單個(gè)細(xì)胞，在對(duì)每個(gè)細(xì)胞的mRNA測(cè)序前做逆轉(zhuǎn)錄時(shí)，為其加上獨(dú)一無(wú)二的標(biāo)簽（barcode）序列。但其中會(huì)存在多個(gè)細(xì)胞被單個(gè)

技術(shù)與方法基于單細(xì)胞靶向測(cè)序探究基因堿基突變的方法趙利楠1，王娜1，楊國(guó)良2，蘇現(xiàn)斌1，韓澤廣11. 上海交通大學(xué)，系統(tǒng)生物醫(yī)學(xué)研究院，系統(tǒng)生物醫(yī)學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海 200240 2. 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院泌尿科，上海 200127分析基因堿基突變是探究腫瘤細(xì)胞克隆演化的研究方法之一。目前，常取組織不同區(qū)域的群體細(xì)胞測(cè)序，基于群體水平的基因堿基突變頻率等信息繪制出腫瘤的克隆演化過(guò)程。但是，該方法易遺失低頻突變，并且組織群體細(xì)胞類型不單一，不

生物重要概念;單細(xì)胞;初中生物新課程改革背景下，學(xué)校要想開(kāi)展有效的初中生物教學(xué)活動(dòng)，教師既要讓學(xué)生建立生物學(xué)核心概念，以達(dá)成對(duì)生命觀念的理解;又要讓學(xué)生參與科學(xué)探索的實(shí)踐，體驗(yàn)生物學(xué)知識(shí)的形成過(guò)程、感悟生物學(xué)思想和方法，從而提升學(xué)生的科學(xué)思維和科學(xué)探究精神。因此，學(xué)生要想學(xué)好生物概念需要有豐富的學(xué)習(xí)經(jīng)歷和生活經(jīng)驗(yàn)，尤其是對(duì)重要概念的理解和生命觀念的建立不能通過(guò)死記硬背來(lái)實(shí)現(xiàn)。本文將以“觀察單細(xì)胞生物草履蟲(chóng)”這一課為例，探討如何有效開(kāi)展生物重要概念的教學(xué)。一

態(tài)功能[6]。單細(xì)胞技術(shù)能夠可逐一表征微生物在其原生群落中的特性，建立表型與基因型的關(guān)聯(lián)，為微生物研究提供新思路[3,7]。單細(xì)胞技術(shù)包括特征細(xì)胞的識(shí)別、單細(xì)胞分選以及單細(xì)胞測(cè)序等分析過(guò)程。單細(xì)胞拉曼光譜作為一種非標(biāo)記、原位的識(shí)別方法，能夠表征細(xì)胞的核酸、蛋白質(zhì)、脂肪等代謝物質(zhì)的組成與含量，并依據(jù)這些細(xì)胞固有生化信息來(lái)區(qū)分不同種屬的微生物。傳統(tǒng)單細(xì)胞分離方法有流式細(xì)胞術(shù)[8-9]、激光顯微切割[10]等，但由于微生物通常尺寸很小，難以使用這些方法實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確分

lla。植物體單細(xì)胞，細(xì)胞呈圓盤狀，殼面邊緣有一環(huán)放射狀排列的線紋。色素體顆粒狀充滿整個(gè)細(xì)胞。標(biāo)本采集地：大關(guān)羅漢壩。庫(kù)氏小環(huán)藻C.Kutzingiana：小環(huán)藻屬Cyclotella。植物體單細(xì)胞，細(xì)胞呈圓盤狀，殼面邊緣有一環(huán)放射狀結(jié)構(gòu)。色素體位于細(xì)胞邊緣，中央圓形五色素體。標(biāo)本采集地：大關(guān)羅漢壩；昭陽(yáng)區(qū)省耕公園。星形庫(kù)氏小環(huán)藻C.kützingiana var.planetophora Fricke：小環(huán)藻屬Cyclotella。藻體呈扁柱形，單細(xì)胞，

建立了定量分析單細(xì)胞中銀納米顆粒（AgNP）的方法。利用噴墨打印機(jī)制備出與細(xì)胞基體相似的皮升級(jí)液滴， 作為單細(xì)胞定量標(biāo)準(zhǔn)， 再利用LAICPMS定量分析暴露AgNP的小鼠巨噬細(xì)胞。結(jié)果表明， 95個(gè)單細(xì)胞中AgNP含量為19.1～1682 fg， 呈對(duì)數(shù)正態(tài)分布， 平均值為（166±188） fg， 與酸消解分析得到的細(xì)胞群體AgNP平均含量（（175±2） fg）相符。LAICPMS在單細(xì)胞分析方面具有巨大潛力， 有望進(jìn)一步應(yīng)用于單細(xì)胞水平的金屬納米顆粒

]。這意味著在單細(xì)胞水平測(cè)得的數(shù)據(jù)更能夠精確地反映生命事件的真實(shí)情況，單細(xì)胞蛋白定量檢測(cè)技術(shù)對(duì)于深入理解生命活動(dòng)過(guò)程具有重要意義[7]。除此之外，單細(xì)胞蛋白定量檢測(cè)技術(shù)對(duì)于珍貴樣本、稀有細(xì)胞的分析也具有重要意義。例如，對(duì)循環(huán)腫瘤細(xì)胞(circulating cumor cell,CTC)的蛋白定量檢測(cè)能夠直接得到腫瘤細(xì)胞的表型信息，有助于病情判斷和藥物研發(fā)[8]，然而每7.5 mL血液中僅有1～500個(gè)CTC，數(shù)量極其有限，傳統(tǒng)的針對(duì)宏觀大量細(xì)胞分析的技術(shù)

一個(gè)體中，不同單細(xì)胞都有其獨(dú)特的基因組。多細(xì)胞研究的結(jié)果僅體現(xiàn)出這些多細(xì)胞的總體情況，而不能體現(xiàn)單個(gè)細(xì)胞之間的差異。單個(gè)體細(xì)胞基因組的變異，諸如單核苷酸變異(SNVs)、拷貝數(shù)變異 (CNVs) 和結(jié)構(gòu)變異，可能導(dǎo)致癌癥及其他疾病的產(chǎn)生[5-7]。為了打破多細(xì)胞研究的局限性，人們?cè)絹?lái)越關(guān)注單細(xì)胞研究。單細(xì)胞研究有助于我們研究癌癥等相關(guān)疾病。無(wú)論是增殖或休眠的腫瘤組織，單個(gè)細(xì)胞都是支配癌癥生物學(xué)各方面的決定因素[8]。對(duì)腫瘤組織單細(xì)胞水平的分析能了解腫瘤內(nèi)遺

質(zhì)性。近年來(lái)，單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)的出現(xiàn)為進(jìn)一步鑒別腫瘤的異質(zhì)性提供了新的手段。對(duì)實(shí)體瘤及其微環(huán)境中單個(gè)細(xì)胞的基因組、轉(zhuǎn)錄組及表觀遺傳學(xué)進(jìn)行測(cè)序分析，不僅能揭示瘤內(nèi)細(xì)胞異質(zhì)性，還能有效區(qū)分腫瘤微環(huán)境中的各細(xì)胞亞群，從而有利于研究腫瘤發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移、耐藥和免疫逃逸的相關(guān)機(jī)制。1 單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)概述單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)主要包括單細(xì)胞基因組測(cè)序、轉(zhuǎn)錄組測(cè)序和表觀遺傳學(xué)測(cè)序（圖1），它們各有優(yōu)勢(shì)和特點(diǎn)，能夠從不同角度揭示細(xì)胞的功能狀態(tài)。與以往樣本測(cè)序不同，我們需要先將實(shí)體組

序技術(shù)的提高，單細(xì)胞分析逐漸受到關(guān)注。單細(xì)胞分析即是通過(guò)相應(yīng)的技術(shù)對(duì)單個(gè)靶細(xì)胞進(jìn)行分離提取，并通過(guò)全基因組擴(kuò)增及二代測(cè)序等技術(shù)對(duì)靶細(xì)胞內(nèi)的基因組信息、蛋白信息進(jìn)行分析的過(guò)程。通過(guò)單細(xì)胞分析，會(huì)將腫瘤進(jìn)展過(guò)程中的細(xì)胞變化、單個(gè)CTC的遺傳狀態(tài)、細(xì)胞與細(xì)胞間的異質(zhì)性、利用胎兒細(xì)胞遺傳疾病等問(wèn)題迎刃而解[2]。本文將從近年來(lái)單個(gè)細(xì)胞的分離與提取手段、全基因組擴(kuò)增及下游組學(xué)分析等研究進(jìn)展作一綜述。1　單細(xì)胞的分離與提取單個(gè)細(xì)胞的分離與提取是進(jìn)行單細(xì)胞分析的前提條件

　劉成連摘要：單細(xì)胞是生物體的基本單位，提取具有活性的單細(xì)胞是研究果實(shí)發(fā)育的基礎(chǔ)。以蘋果為材料，研究不同酶液組合和酶解時(shí)間對(duì)蘋果果肉單細(xì)胞分離的影響。結(jié)果表明，蘋果果肉在01%離析酶、暗酶解05 h時(shí)，為理想的蘋果果肉單細(xì)胞分離條件。關(guān)鍵詞：蘋果；單細(xì)胞；離析酶；酶解濃度；酶解時(shí)間中圖分類號(hào)： S661101文獻(xiàn)標(biāo)志碼：文章編號(hào)：1002-1302（2017）16-0138-02[HJ14mm]收稿日期：2016-03-29基金項(xiàng)目：山東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)

啟微流控芯片；單細(xì)胞；轉(zhuǎn)印中圖分類號(hào)：TP311 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1009-3044（2017）03-0229-03Circulating Tumor Cell Capture and Single Cell Extraction Based on an Openable Microfluidic ChipsFANG Yi，QIN Lu-man，LIU Kan，ZHANG Nan-gang（Wuhan Textile University，Wuh

科技領(lǐng)域之一。單細(xì)胞測(cè)序(Single-Cell Sequencing)即從單個(gè)細(xì)胞水平上對(duì)基因組進(jìn)行測(cè)序，把基因測(cè)序應(yīng)用到單個(gè)細(xì)胞層面，對(duì)于識(shí)別細(xì)胞的類型、功能，特定細(xì)胞健康或狀態(tài)的變化、變異至關(guān)重要[1]。隨著靈敏度不斷提升，單細(xì)胞測(cè)序逐步成熟。2012年謝曉亮及其團(tuán)隊(duì)發(fā)明的單細(xì)胞基因組擴(kuò)增新技術(shù)(MALBAC)使單細(xì)胞精準(zhǔn)測(cè)序成為可能，極大地推動(dòng)了單細(xì)胞測(cè)序甚至基因測(cè)序的進(jìn)展。2013年，Science雜志將單細(xì)胞測(cè)序評(píng)選為“2013年最具發(fā)展前景的

200240)單細(xì)胞水平原鈣黏蛋白基因簇的轉(zhuǎn)錄分析陳志鋒1， 彭 萊2， 吳 強(qiáng)1，2(1.上海交通大學(xué)生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院，上海 200240；2.上海交通大學(xué)系統(tǒng)生物醫(yī)學(xué)研究院比較生物醫(yī)學(xué)中心/系統(tǒng)生物醫(yī)學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海 200240)原鈣黏蛋白(protocadherin，Pcdh)基因簇由緊密相連的3個(gè)基因簇(Pcdhα、Pcdhβ和Pcdhγ)組成，其中α、β基因簇包含可變區(qū)外顯子(C型和非C型)和恒定區(qū)外顯子。這種獨(dú)特的基因排列方式使Pcd

微流控芯片下的單細(xì)胞輪廓定位與提取夏海英1，肖雯靜1，薛茗月2(1.廣西師范大學(xué)電子工程學(xué)院，廣西桂林541004； 2.廣西師范大學(xué)化學(xué)與藥學(xué)學(xué)院，廣西桂林541004)摘要：微流控芯片可實(shí)現(xiàn)單細(xì)胞分析，而對(duì)單個(gè)細(xì)胞分析，能夠掌握更準(zhǔn)確更全面的細(xì)胞信息，可以克服以往群體分析中平均結(jié)果對(duì)個(gè)別信息掩蓋的局限性，對(duì)疾病的早期預(yù)防和診斷具有重要的科學(xué)意義。本文根據(jù)早期癌癥細(xì)胞通過(guò)微流控芯片中的彎道時(shí)變形與正常細(xì)胞不同的理論，采用Grabcut和Snake相融合的

了元件與模塊的單細(xì)胞拉曼表征平臺(tái)，并利用該平臺(tái)成功開(kāi)發(fā)了一種不需外加標(biāo)記的活體單細(xì)胞油脂和淀粉的定量分析技術(shù)，為產(chǎn)油和產(chǎn)淀粉相關(guān)元件與模塊在難培養(yǎng)微生物中的發(fā)掘提供了新的方法，同時(shí)為針對(duì)其他目標(biāo)化合物的單細(xì)胞分析與分選技術(shù)的開(kāi)發(fā)奠定了基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：合成生物學(xué) 細(xì)胞工廠 生物元件 單細(xì)胞Abstract：The main objectives for year 2013 have been completed. In year 2013， we have s

10023)?單細(xì)胞分析技術(shù)研究進(jìn)展劉 佳, 劉 震*(南京大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院, 生命分析化學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 江蘇 南京 210023)細(xì)胞是生命結(jié)構(gòu)和生命活動(dòng)的基本單位,基于單細(xì)胞的研究是生命研究的基礎(chǔ)。由于細(xì)胞體積極小、細(xì)胞微環(huán)境復(fù)雜并且起到關(guān)鍵作用的組分含量往往較低,因此在很多方面單細(xì)胞分析仍然是一項(xiàng)具有挑戰(zhàn)性的任務(wù)。該文對(duì)現(xiàn)有的單細(xì)胞分析技術(shù)進(jìn)行歸納、總結(jié),重點(diǎn)介紹了不同單細(xì)胞分析技術(shù)的特點(diǎn)及其應(yīng)用的最新進(jìn)展。單細(xì)胞分析;毛細(xì)管電泳;微流控芯片;質(zhì)

婷 劉相春 ?單細(xì)胞蛋白的開(kāi)發(fā)與利用孔祥霞 高婷婷 劉相春（山東省莒縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 276500）（山東省莒縣動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所）（山東省莒縣畜牧獸醫(yī)局）文章概述了單細(xì)胞蛋白的基本特性、生產(chǎn)原理，生產(chǎn)單細(xì)胞蛋白的微生物種類，以及單細(xì)胞蛋白的營(yíng)養(yǎng)成分和單細(xì)胞蛋白飼料的原料，介紹了單細(xì)胞蛋白生產(chǎn)的一般工藝，探討了單細(xì)胞蛋白飼料的安全性評(píng)價(jià)、營(yíng)養(yǎng)性評(píng)價(jià)和應(yīng)用效果及應(yīng)用中存在的問(wèn)題及解決辦法，最后展望了單細(xì)胞蛋白在飼料加工中的應(yīng)用前景。單細(xì)胞蛋白 (singl

學(xué)生命科學(xué)學(xué)院單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)的研究與應(yīng)用進(jìn)展韓悅 河南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院傳統(tǒng)的測(cè)序方法是對(duì)細(xì)胞群體的總平均反應(yīng)進(jìn)行分析，而細(xì)胞間存在異質(zhì)性。單細(xì)胞測(cè)序是在單個(gè)細(xì)胞水平上進(jìn)行的高通量測(cè)序技術(shù)，可準(zhǔn)確測(cè)出單個(gè)細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)及表達(dá)狀態(tài)，分析同一表型細(xì)胞間的遺傳異質(zhì)性，在癌癥、微生物學(xué)等領(lǐng)域有舉足輕重的地位。本文對(duì)單細(xì)胞測(cè)序主要流程及該技術(shù)在不同領(lǐng)域的應(yīng)用進(jìn)展進(jìn)行闡述，為這一技術(shù)的研究與發(fā)展提供參考。單細(xì)胞分離；基因組擴(kuò)增；應(yīng)用隨著科技水平的發(fā)展，DNA測(cè)序技術(shù)

13M1細(xì)胞系單細(xì)胞培養(yǎng)建系為基礎(chǔ)，觀察Tca8113M1細(xì)胞系中舌癌干細(xì)胞存在的現(xiàn)象及其相關(guān)標(biāo)志的變化規(guī)律。方法 選取Tca8113M1細(xì)胞系，以有限稀釋法進(jìn)行體外單細(xì)胞培養(yǎng)并建立細(xì)胞亞系，在證實(shí)其成瘤性的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)癌干細(xì)胞相關(guān)標(biāo)志CD44、CD184、細(xì)胞外可溶性抗原（ESA）的表達(dá)情況，著重觀察單個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)形成細(xì)胞克隆的形態(tài)與時(shí)間。結(jié)果 以有限稀釋法獲取192個(gè)Tca8113M1舌癌單個(gè)細(xì)胞，在96孔板中進(jìn)行體外培養(yǎng)，獲取12個(gè)

腺癌腋窩淋巴結(jié)單細(xì)胞懸液的比較陳相彪，楊偉明，陸 婧,王春林,唐 聃,賀新媛,駱禮波,石 磊(遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 甲狀腺乳腺外科，貴州 遵義 563099)目的比較研磨法和Gentle MACS組織分離器制備乳腺癌患者腋窩淋巴結(jié)單細(xì)胞懸液在活細(xì)胞率、絲狀物及細(xì)胞團(tuán)塊方面的優(yōu)缺點(diǎn)，為淋巴組織細(xì)胞培養(yǎng)和流式分析找到一種更為可靠的方法。方法分別用研磨法和Gentle MACS組織分離器制備單細(xì)胞懸液，臺(tái)盼蘭染色后計(jì)數(shù)活細(xì)胞、死細(xì)胞、細(xì)胞團(tuán)塊和絲狀物，并比較兩種方

765001 單細(xì)胞蛋白概念1966年，在麻省理工學(xué)院召開(kāi)的會(huì)議上，第一次給單細(xì)胞蛋白下了定義，把單細(xì)胞蛋白叫做菌體蛋白、微生物蛋白。緊接著在次年的召開(kāi)的全世界單細(xì)胞蛋白會(huì)議上，又將微生物菌體蛋白統(tǒng)稱為單細(xì)胞蛋白，把單細(xì)胞蛋白進(jìn)行分類。按不同的標(biāo)準(zhǔn)來(lái)進(jìn)行分類，例如：按產(chǎn)生菌的類別不同，又可以分為真菌蛋白、細(xì)菌蛋白等；按生產(chǎn)原料的不同，可以分為甲烷蛋白、甲醇蛋白、石油蛋白等。單細(xì)胞蛋白具有極為豐富的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。其中，各種氨基酸的組成較為齊全，富含有人體所必需的

250014單細(xì)胞組分分析的研究進(jìn)展聶素娟 山東師范大學(xué)化學(xué)化工與材料科學(xué)學(xué)院， 山東濟(jì)南 250014單細(xì)胞內(nèi)組分的分析和測(cè)定對(duì)疾病的治療和藥物篩選具有重要的意義。本文比較了兩種單細(xì)胞組分分析的方法即毛細(xì)管電泳和微流控芯片，并敘述了微流控芯片在單細(xì)胞研究方面的進(jìn)展。單細(xì)胞組分分析；毛細(xì)管電泳；微流控芯片the analysis of intracellular components in individual cells; capillary elec

□ 關(guān)琮嚴(yán)“單細(xì)胞”體征的輿論場(chǎng)建構(gòu) ——以新疆“7·5”事件報(bào)道為例□ 關(guān)琮嚴(yán)“場(chǎng)域”是布爾迪厄社會(huì)學(xué)中的一個(gè)關(guān)鍵的空間隱喻，即“位置之間客觀關(guān)系的網(wǎng)絡(luò)或圖式”。①在2009年新疆“7·5”事件的報(bào)道過(guò)程中，國(guó)內(nèi)媒體積極構(gòu)建社會(huì)輿論的過(guò)程可以被看做是對(duì)國(guó)內(nèi)媒體進(jìn)行整合，與國(guó)外媒體進(jìn)行斗爭(zhēng)的過(guò)程。其間反映出的真實(shí)信息與虛假信息、國(guó)內(nèi)媒體與國(guó)外媒體以及正面輿論與負(fù)面輿論之間的斗爭(zhēng)對(duì)抗，其實(shí)映射出了一種社會(huì)權(quán)力的結(jié)構(gòu)關(guān)系，而這恰恰是布爾迪厄“場(chǎng)域”概念的關(guān)鍵所