摘要：為了采用離子對(duì)-HPLC方法測(cè)定出磷霉素鈣分散片中的藥物物質(zhì)含量，先進(jìn)行物質(zhì)試劑和要素測(cè)定試劑的制備，構(gòu)建色譜測(cè)定條件，同時(shí)進(jìn)行藥物質(zhì)量分?jǐn)?shù)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制，采用重復(fù)性實(shí)驗(yàn)的方式測(cè)算出磷霉素鈣分散片中藥物物質(zhì)的檢測(cè)限和定量限，與設(shè)定的基礎(chǔ)指標(biāo)對(duì)比，檢測(cè)其準(zhǔn)確度和穩(wěn)定度，最終獲取對(duì)應(yīng)的主藥物含量。結(jié)果表明：在相同的測(cè)定環(huán)境下，分析出主藥種類分別為磷霉素鈣、磷霉素鈣二醇物以及相關(guān)藥物，占比分別為85.2%、9.3%和5.5%。該方法的溶出分析重現(xiàn)性好，最大程度避免出現(xiàn)含量測(cè)定的偏差，標(biāo)示量與準(zhǔn)確度較高，具有實(shí)際的應(yīng)用價(jià)值。

關(guān)鍵詞：離子對(duì)；離子對(duì)-HPLC法；磷霉素；鈣分散片；藥量檢測(cè)

中圖分類號(hào)：R917.4文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1004-0935（2025）02-0352-04

磷霉素是一種通過防止肽聚糖定向合成來達(dá)到抗菌、抑菌效果的抗生素，其化學(xué)結(jié)構(gòu)及抑菌機(jī)制較為特殊[1]。市面上最常見的磷霉素藥物就是磷霉素鈣分散片。為了測(cè)定分析出磷霉素分散片內(nèi)部的藥物含量，綜合實(shí)際的測(cè)定需求及標(biāo)準(zhǔn)，采用離子對(duì)-HPLC法完成測(cè)定，并進(jìn)行定向驗(yàn)證與分析。所謂離子對(duì)-HPLC法通常指的是一種定向的單目標(biāo)色譜測(cè)定方式，在實(shí)際測(cè)定的過程中可利用檢測(cè)裝置對(duì)溶液中的離子數(shù)量及濃度進(jìn)行分離研究[2]。將其應(yīng)用在磷霉素鈣分散片主藥含量的測(cè)定之中，可一定程度上提升測(cè)定數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性。

1實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

1.1材料準(zhǔn)備

根據(jù)實(shí)際的測(cè)試需求及標(biāo)準(zhǔn)，首先進(jìn)行基礎(chǔ)測(cè)試材料的準(zhǔn)備，并搭建基礎(chǔ)的測(cè)試環(huán)境。準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)用蒸餾水、磷霉素氨丁三醇對(duì)照品（確保質(zhì)量分?jǐn)?shù)在99.56%以上）、冰乙酸、正辛胺乙腈（確保自身的純度，可以提升實(shí)驗(yàn)結(jié)果的精準(zhǔn)與穩(wěn)定）、磷霉素二醇物對(duì)照品、三氟乙酸以及磷霉素鈣分散片測(cè)試樣本[3]。

完成材料準(zhǔn)備之后，接下來需要搭接、安裝專業(yè)的處理儀器。先選取多環(huán)境高效液相色譜儀、實(shí)驗(yàn)用蒸餾裝置、光度轉(zhuǎn)換檢測(cè)裝置和檢測(cè)器，在同等的環(huán)境下設(shè)置一個(gè)Synergi 4 μm Fusion-RP 80A色譜柱作為測(cè)定的比照標(biāo)準(zhǔn)[4]，至此完成對(duì)測(cè)試材料及儀器的準(zhǔn)備。

1.2實(shí)驗(yàn)布置

根據(jù)色譜柱的變化情況，進(jìn)行基礎(chǔ)性的實(shí)驗(yàn)布置。首先需要設(shè)定具體的色譜條件[5]。色譜柱設(shè)定為PrevailC18，配制出對(duì)應(yīng)的輔助溶液，設(shè)定對(duì)應(yīng)的吸收峰值標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)設(shè)定最大波長(zhǎng)的檢測(cè)值，測(cè)定出具體的響應(yīng)值。在輔助溶液中增加正辛胺，振搖使其溶解，隨后采用冰醋酸調(diào)節(jié)溶液的pH[6]。此時(shí)，依據(jù)實(shí)際的測(cè)定需求及標(biāo)準(zhǔn)，設(shè)定色譜的檢測(cè)條件，同時(shí)測(cè)算出具體的質(zhì)量分?jǐn)?shù)檢測(cè)偏差，如公式（1）所示。

（1）

式中：H—質(zhì)量分?jǐn)?shù)檢測(cè)偏差；

α—溶解總量；

—pH溶出度；

i—檢測(cè)次數(shù)；

δ—色譜變動(dòng)值；

σ—定向波長(zhǎng)。

根據(jù)上述測(cè)定，完成對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)檢測(cè)偏差的測(cè)算。將獲取的質(zhì)量分?jǐn)?shù)檢測(cè)偏差設(shè)定為基礎(chǔ)的藥量質(zhì)量分?jǐn)?shù)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)根據(jù)離子對(duì)-HPLC法設(shè)定對(duì)應(yīng)的線性測(cè)定范圍[7]。

將測(cè)試所用樣本藥物搗碎，加入適量蒸餾水，在特定的環(huán)境下，將溶出介質(zhì)逐漸稀釋為每1 mL含30 mg的測(cè)試樣本，分置于10 mL測(cè)試量瓶中，二次稀釋后搖勻，注入色譜儀[8]。測(cè)定出此時(shí)的定向藥物標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量濃度，完成基礎(chǔ)性的實(shí)驗(yàn)布置，接下來，綜合測(cè)定需求及標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)行具體的測(cè)驗(yàn)分析。

2實(shí)驗(yàn)方法與過程

根據(jù)上述搭建的測(cè)試環(huán)境以及測(cè)定需求，綜合實(shí)際的目標(biāo)，采用離子對(duì)-HPLC法對(duì)磷霉素鈣分散片的主藥質(zhì)量分?jǐn)?shù)進(jìn)行測(cè)試驗(yàn)證。首先，需要配制質(zhì)量分?jǐn)?shù)測(cè)定試劑和要素測(cè)定試劑[9]。采用專業(yè)的設(shè)備及裝置，稱取適量的磷霉素氨丁三醇對(duì)照品，并在內(nèi)部加入適量的蒸餾水，靜置1 h后，加入10 mmol·L-1的正辛胺-乙腈，在反應(yīng)的過程中需要采用冰乙酸進(jìn)行合理調(diào)節(jié)，確保后續(xù)應(yīng)用測(cè)試的穩(wěn)定性和安全性。測(cè)定出此時(shí)試劑的pH，如果達(dá)到3.0以上，便表明試劑溶液被較好地溶解并稀釋成含磷霉素鈣元素的儲(chǔ)備液。此時(shí)，將儲(chǔ)備液分別置于不同的量瓶中，根據(jù)實(shí)際測(cè)定需求及標(biāo)準(zhǔn)的變化，向量瓶中增加溶劑稀釋，靜置0.5 h后，采用霧化處理的方式檢測(cè)溶液的定向質(zhì)量濃度，作為測(cè)試的溶液。此外，以此為基礎(chǔ)還需要將供試品溶液加入三氟乙酸，促使其質(zhì)量濃度可以達(dá)到預(yù)設(shè)水平，一般控制在0.5～1.0 mg·mL-1即可。

在此基礎(chǔ)之上，進(jìn)行要素測(cè)定試劑的配制。這部分主要是為了分離磷霉素鈣分散片中藥物物質(zhì)所設(shè)計(jì)的環(huán)節(jié)。首先，根據(jù)實(shí)際的測(cè)定分解需求，綜合離子對(duì)-HPLC法，先測(cè)定出樣本試劑中磷霉素二醇物對(duì)照品的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，在其中增加適量的正辛胺乙腈，測(cè)定其此時(shí)的質(zhì)量濃度，形成混合試劑之后，加入適量蒸餾水，完成基礎(chǔ)性測(cè)試試劑的制備。此時(shí)，在不同的溫度環(huán)境作用下，測(cè)算出磷霉素鈣質(zhì)量濃度，如公式（2）所示。

（2）

式中：P—磷霉素鈣質(zhì)量濃度；

g—預(yù)設(shè)定位偏差；

t—對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)；

φ—吸收峰值；

e—定位次數(shù)；

—溶解量。

根據(jù)測(cè)算得出的磷霉素鈣質(zhì)量濃度值，設(shè)定對(duì)應(yīng)的藥物物質(zhì)分離標(biāo)準(zhǔn)。綜合離子對(duì)-HPLC法，進(jìn)行色譜條件的調(diào)節(jié)，色譜條件調(diào)節(jié)設(shè)定表如表1所示。

根據(jù)表1完成對(duì)色譜條件的調(diào)節(jié)與設(shè)定。此時(shí)，利用冰乙酸將溶液中的pH逐步調(diào)節(jié)到靠近4.8的程度，同時(shí)對(duì)此時(shí)的溶液進(jìn)行霧化處理，設(shè)定霧化的氣流量為1.5 L·min-1。但是這部分需要注意的是，色譜條件的設(shè)置并不是固定的，可以依據(jù)測(cè)定需求及標(biāo)準(zhǔn)的變化進(jìn)行調(diào)整，具有較強(qiáng)的靈活性。因此，在不同的溫度狀態(tài)下，利用離子對(duì)-HPLC法，對(duì)試劑溶液中的藥物物質(zhì)測(cè)定，同時(shí)與初始設(shè)定的色譜進(jìn)行對(duì)比研究，結(jié)果如圖1所示。

根據(jù)圖1完成對(duì)磷霉素鈣藥物HPLC譜的測(cè)定分析。隨后，綜合設(shè)計(jì)的色譜變化狀態(tài)，設(shè)定對(duì)應(yīng)的藥物物質(zhì)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。利用離子對(duì)-HPLC法，測(cè)定計(jì)算出此時(shí)磷霉素鈣分散片的磷霉素氨丁三醇的具體質(zhì)量分?jǐn)?shù)及質(zhì)量濃度，依據(jù)色譜圖的記錄，對(duì)峰面積（ A ）與質(zhì)量濃度（c）進(jìn)行定向線性測(cè)定，最終繪制出標(biāo)準(zhǔn)的藥物質(zhì)量分?jǐn)?shù)曲線。

此時(shí)，可以采用重復(fù)性實(shí)驗(yàn)的方式對(duì)磷霉素鈣分散片中的主藥質(zhì)量分?jǐn)?shù)進(jìn)行測(cè)定驗(yàn)證。將磷霉素鈣分散片的溶液實(shí)際以每一份10 mL分裝在量瓶中，共分為4份進(jìn)行測(cè)定?；A(chǔ)測(cè)定指標(biāo)數(shù)值設(shè)定表如表2所示。

根據(jù)表2完成對(duì)基礎(chǔ)測(cè)定指標(biāo)數(shù)值的設(shè)定。接下來，根據(jù)上述設(shè)定對(duì)基礎(chǔ)的測(cè)試環(huán)境作出調(diào)整，與此同時(shí)有針對(duì)性地設(shè)定相關(guān)的藥物質(zhì)量分?jǐn)?shù)測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)，測(cè)定出定量限。此時(shí)，磷霉素鈣分散片中的正辛胺質(zhì)量濃度為23 mg·mL-1，與初始設(shè)定的標(biāo)準(zhǔn)相對(duì)比，進(jìn)行測(cè)定偏差的計(jì)算。在上述的測(cè)試環(huán)境下，進(jìn)行藥物質(zhì)量分?jǐn)?shù)測(cè)定準(zhǔn)確度的測(cè)試。這部分可以先對(duì)測(cè)定的樣本溶液進(jìn)行合理稀釋，測(cè)定出內(nèi)部的藥物種類及具體的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，為（96.8±0.5）%和（0.25±0.003）%（n= 6）。與基礎(chǔ)測(cè)定方式所獲取的測(cè)試結(jié)果保持一致。

在制備的藥品溶劑中加入適量的三氟乙酸，靜置2 h，并將保持的溫度調(diào)整至30 ℃。最終獲得以下的結(jié)果磷霉素鈣主藥物質(zhì)總量的RSD分別為0.6%和1.1%（n=4），且質(zhì)量濃度為0.8、25 mg·mL-1。此時(shí)，分別測(cè)算得出磷霉素鈣分散片中磷霉素鈣、磷霉素鈣二醇物以及有關(guān)物質(zhì)總量的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，如公式（3）所示。

（3）

式中：M—測(cè)定藥物質(zhì)量分?jǐn)?shù)；

—試劑總量，

z—溶液偏差；

s1、s2—預(yù)設(shè)質(zhì)量濃度值和實(shí)際質(zhì)量濃度值。

依據(jù)此，逐步測(cè)算出主藥物質(zhì)的對(duì)應(yīng)質(zhì)量分?jǐn)?shù)，如表3所示。

由表3可以看出，磷霉素鈣分散片內(nèi)部的主藥物質(zhì)基本可以判定為磷霉素鈣、磷霉素鈣二醇物以及相關(guān)藥物，占比分別為85.2%、9.3%和5.5%。依據(jù)獲取的數(shù)值信息，對(duì)測(cè)試得出的結(jié)果比照分析。

3討 論

利用離子對(duì)-HPLC法，對(duì)磷霉素鈣分散片中的主藥質(zhì)量分?jǐn)?shù)進(jìn)行測(cè)定，得知該藥物由磷霉素鈣、磷霉素鈣二醇物以及相關(guān)藥物構(gòu)成，占比分別為85.2%、9.3%和5.5%。采用色譜比照的方式驗(yàn)證測(cè)定，對(duì)藥物進(jìn)行溶出分析，整個(gè)測(cè)定過程環(huán)節(jié)十分精準(zhǔn)簡(jiǎn)單，重現(xiàn)性好，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線的限制，最大程度避免出現(xiàn)質(zhì)量分?jǐn)?shù)測(cè)定的偏差。得出的質(zhì)量分?jǐn)?shù)與設(shè)定的標(biāo)準(zhǔn)基本保持一致，說明對(duì)磷霉素鈣分散片主藥質(zhì)量分?jǐn)?shù)的標(biāo)示量與準(zhǔn)確度較高，具有實(shí)際的應(yīng)用價(jià)值。

4結(jié) 論

與傳統(tǒng)的測(cè)定方法相對(duì)比，離子對(duì)-HPLC法的測(cè)定范圍以及精度相對(duì)較高，同時(shí)測(cè)定過程較為簡(jiǎn)單，可以加強(qiáng)對(duì)測(cè)定誤差的控制，確保最終測(cè)試結(jié)果的真實(shí)性與可靠性。與此同時(shí)，離子對(duì)-HPLC法的測(cè)定環(huán)節(jié)以及測(cè)定結(jié)構(gòu)也更為科學(xué)、合理，對(duì)磷霉素鈣分散片內(nèi)部藥物的提取、分離也更加明確，對(duì)于內(nèi)置物質(zhì)不會(huì)造成過多的損壞，建立更為穩(wěn)定、靈活的測(cè)定結(jié)構(gòu)，為后續(xù)的測(cè)定分析工作奠定基礎(chǔ)環(huán)境。

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Determination of Main Drug Content of Fosfomycin Calcium Dispersible Tablet by Ion-Pair HPLC

HAO Peina， LIAN Weiwei， MA Zhihuan

（Zhengzhou University of Industry Technology， Zhengzhou Henan 451100， China）

Abstract： In order to determine the content of fosfomycin calcium dispersible tablets by ion-pair HPLC， substance reagent and element determination reagent were prepared， chromatographic determination conditions were established， and the standard curve of drug content was drawn. The detection limit and quantitation limit of drug substances in fosfomycin calcium dispersible tablets were calculated by means of repetitive experiments. The accuracy and stability of the detector were compared with the set basic indicators， and the corresponding main drug content value was finally obtained. The results showed that under the same determination environment， the main drug types were fosfomycin calcium， fosfomycin calcium glycols and related drugs， accounting for 85.2%， 9.3% and 5.5% respectively. This method had good reproducibility and avoided the deviation of content determination to the greatest extent. The labeling quantity and accuracy were high， having practical application value.

Key words： Ion pair; Ion pair HPLC method; Fosfomycin; Calcium dispersible tablets; Dosage detection