王曉翠

[摘 要]目的：建立HPLC注射用鹽酸表柔比星的有關物質。方法：采用色譜柱：Agela Venusil ASB C1 4.6×250mm，流動相：以乙腈-水-85%磷酸溶液（330：670：1）并含0.2%的十二烷基硫酸鈉的混合溶液，流速為2.0ml/min，檢測波長為254nm；柱溫為40？C測定。結果：采用該方法能將雜質與主成分有效分離，專屬性良好，8小時內溶液較穩(wěn)定，耐用性強，經檢測限試驗證明該方法能有效檢出雜質。結論：該方法簡便，準確度高，專屬性好，建議采用此法測定注射用鹽酸表柔比星的有關物質。

[關鍵詞]HPLC法 注射用鹽酸表柔比星 有關物質

中圖分類號：R54041 文獻標識碼：A 文章編號：1009-914X（2016）10-0024-01

本品用于治療惡性淋巴瘤、乳腺癌、肺癌等癌癥、白血病、膀胱內給藥有助于淺表性膀胱癌、原位癌的治療和預防其經尿道切除術后的復發(fā)。本品參照注射用鹽酸表柔比星質量標準（《中國藥典》2010年版二部）有關物質檢查法[1]，采用藥典方法部分雜質不能有效分離，本實驗將色譜條件進行改進，并對此方法進行方法驗證。

1.儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1200高效液相色譜儀，梅特勒XP26百萬分之一電子天平。

1.2 試藥

對照品：中國生物藥品檢驗所；甲醇、乙腈：Dikma（色譜純）；磷酸鹽均為青島海洋化工有限公司（分析純）；水：哈爾濱譽衡藥業(yè)股份有限公司；

2.方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agela Venusil ASB C1 4.6×250mm，流動相：以乙腈-水-85%磷酸溶液（330：670：1）并含0.2%的十二烷基硫酸鈉的混合溶液，流速為2.0ml/min；檢測波長為254nm；柱溫為40？C。同時取多柔比星對照品和鹽酸表柔比星對照品適量，加流動相制成每1ml中分別含30μg和100μg的混合溶液，取20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，表柔比星峰與多柔比星峰的分離度應大于2.0。鹽酸表柔比星峰的拖尾因子應在0.8～1.4。

2.2 輔料干擾試驗

按處方比例配制空白輔料溶液。取供試品及空白輔料溶液各20？l，注入液相色譜儀，考察輔料及溶劑是否干擾測定。

結果，供試品溶液中各雜質峰分離度良好，各已知峰純度均能達到999，空白輔料與溶劑均不干擾供試品雜質峰的檢查，專屬性良好。

2.3 檢測限測定

取鹽酸表柔比星、多柔比星酮、柔紅霉素酮、多柔比星、鹽酸柔紅霉素、雙氫鹽酸柔紅霉素、鹽酸表柔紅霉素對照品，配制，逐級稀釋，測定各檢測限分別為：145.22ng/ml、44.35ng/ml、42.67ng/ml、56.03ng/ml、195.95ng/ml、132.11ng/ml、141.15 ng/ml。此方法能有效檢出樣品中所含雜質。

2.4 耐用性試驗

在改變檢測波長、流動相比例、流速、柱溫、不同型號色譜柱條件下，取系統(tǒng)適用性溶液，注入液相色譜儀，結果各雜質峰分離度均符合要求。

2.5 溶液穩(wěn)定性試驗

精密稱定供試品28.37mg，置10ml量瓶中，供試品溶液在0、1、2、4、8小時考察溶液的穩(wěn)定性。結果：？8小時內各雜質及鹽酸表柔比星含量均無明顯變化，供試品溶液在8小時內穩(wěn)定性。

2.6 專屬性試驗

未破壞溶液：精密稱取供試品24.62mg，置10ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。

熱破壞溶液：精密稱取供試品26.58mg，置10ml量瓶中，加2ml流動相使溶解，于100℃水浴放置9分鐘，取出放冷，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。

酸破壞溶液：精密稱取供試品25.66mg，置10ml量瓶中，加2ml流動相使溶解，加1mol/L鹽酸溶液2ml放置2小時，加1mol/L氫氧化鈉溶液2ml中和，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。

光破壞溶液：精密稱取供試品29.46mg，置10ml量瓶中，加4ml流動相使溶解，于光照條件下放置3天，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。

氧破壞溶液：精密稱取供試品31.14mg，置10ml量瓶中，加1ml10%過氧化氫放置1小時，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。

堿破壞溶液：精密稱取供試品30.12mg，置10ml量瓶中，加2ml流動相使溶解，加0.1mol/L氫氧化鈉溶液0.5ml，室溫放置1小時，加0.1mol/L鹽酸溶液0.5ml中和，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。

空白輔料同供試品相同方法制備。

結果：通過上述破壞試驗，各條件均不同程度地產生了降解產物，各雜質峰與主峰間的分離度良好，本方法專屬性強。

2.7 樣品測定

取三批樣品，加流動相制成每1ml中約含鹽酸表柔比星0.5mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取適量，制成每1ml中約含5μg的溶液，作為對照溶液。精密量供試品溶液和對照溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的3倍。結果：多柔比星分別為：0.38%，0.39%，0.38%。未知最大單雜分別為0.18%，0.19%，0.19%。雜質總和分別為0.68%，0.66%，0.65%：三批樣品的雜質均能有效的檢測出。

3.討論

通過有關物質方法學驗證，該方法能將雜質與主成分有效分離，專屬性良好，且在8小時內溶液穩(wěn)定性良好，經檢測限試驗證明該方法能夠有效檢出雜質，方法耐用性、系統(tǒng)適用性良好。經對三批樣品的檢驗，結果表明三批樣品均符合檢查規(guī)定，該方法可用于本品有關物質檢查。其專屬性強、準確度高、方法簡便，建議采用此法測定注射用鹽酸表柔比星的有關物質。

參考文獻：

[1] 《中國藥典》，2010年版二部注射用鹽酸表柔比星質量標準。