摘要 以實驗室前期分離的果膠桿菌（P.aroidearum）L6為對象，探究丁香酚對其抑菌效果。通過常量稀釋法測定丁香酚對合果芋果膠桿菌（P.aroidearum）L6的抑菌活性；利用紫外分光光度法測定經(jīng)丁香酚處理后菌液的K+、AKP、ATP、核酸和蛋白質(zhì)含量；測定其電導(dǎo)率，再利用掃描電子顯微鏡觀察經(jīng)丁香酚處理后的菌體，從細(xì)胞水平探究丁香酚抑菌效果。結(jié)果顯示，丁香酚對合果芋果膠桿菌（P.aroidearum）L6的MIC為800 mg/L，EC 50為409.33 mg/L；通過對比丁香酚處理前后的菌體破壞特征，發(fā)現(xiàn)K+、AKP、核酸、蛋白質(zhì)和電導(dǎo)率上升，ATP水平下降；掃描電子顯微鏡觀察顯示，丁香酚處理的菌體出現(xiàn)裂解、黏連現(xiàn)象。丁香酚通過破壞果膠桿菌（P.aroidearum）L6細(xì)胞膜完整性，引起內(nèi)含物泄露、能量代謝失衡，從而達(dá)到抑菌作用。

關(guān)鍵詞 丁香酚；果膠桿菌；抑菌作用；細(xì)胞膜

中圖分類號 S 482.2" 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A" 文章編號 0517-6611（2025）04-0124-05

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2025.04.025

開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識碼（OSID）：

Antibacterial Effect of Eugenol on Pectobacterium aroidearum L6

LU Jin peng1，LIU" Wen bo1， FAN" Hong yan2 et al

（1.Tropical Agriculture and Forestry Colloege，Hainan University/Key Laboratory of Green Prevention and Control of Tropical Plant Diseases and Pests，Ministry of Education，Haikou，Hainan 570228;

2.Institution of Tropical Fruit Trees，Hainan Academy of Agricultural Sciences，Haikou，Hainan 571199）

Abstract The study investigated the antibacterial effect of eugenol against P.aroidearum L6，which was isolated in the laboratory.The antibacterial activity of eugenol was determined using the constant dilution method.Ultraviolet spectrophotometry was used to measure the levels of K+，AKP，ATP，nucleic acid，and protein in the bacterial solution treated with eugenol.The electric conductivity was measured.Scanning electron microscopy was used to observe eugenol treated bacteria and explore the antibacterial effect at the cellular level.The MIC of eugenol for P.aroidearum L6 was 800 mg/L.And the EC 50 of eugenol for P.aroidearum L6 was 409.33 mg/L.Comparison of bacterial damage characteristics before and after eugenol treatment revealed increased levels of K+，AKP，nucleic acid，protein，electric conductivity and decreased ATP levels.Scanning electron microscopy images showed lysed and adhered bacteria following eugenol treatment.Eugenol disrupts the integrity of the cell membrane of P.aroidearum L6，causing leakage of intracellular contents and an imbalance in energy metabolism，thereby achieving its antibacterial effect.

Key words Eugenol;Pectobacterium aroidearum;Antibacterial effect;Cell membrane

基金項目 海南省自然科學(xué)基金項目（322MS025，321RC470）;海南省院士創(chuàng)新平臺科研專項（YSPTZX202018）。

作者簡介 祿錦鵬（2003—），男，甘肅蘭州人，碩士研究生，研究方向：植物病理。

*通信作者，助理研究員，碩士，從事熱帶作物病理學(xué)研究。

收稿日期 2024-06-24

合果芋（Syngonium podophyllum），也被稱為箭葉藤、鵝掌葉、尼芬芋，是天南星科草本常綠植物，原產(chǎn)于中美洲和南美洲的潮濕森林地帶^［1］。目前，合果芋在觀葉植物中使用最為廣泛，包括室外園林觀賞、室內(nèi)盆栽或者吊籃裝飾等^［2-3］。Pectobacterium spp.是細(xì)菌性軟腐病的主要病原，其寄主范圍很廣，各個種都可以侵染農(nóng)作物、水果、觀賞植物等造成破壞性的軟腐病害^［4-5］。實驗室前期在合果芋葉片上發(fā)現(xiàn)嚴(yán)重的細(xì)菌性軟腐病，通過室內(nèi)分離、單孢純化及致病性測定，并通過形態(tài)特征、生理生化特性、16S rNA及DNA-DNA雜交等方法，鑒定引起合果芋軟腐病的病原為果膠桿菌（P.aroidearum）^［6-7］，該病原是許多植物上的致病病原，為害嚴(yán)重，目前還缺少有效藥劑防治^［8］，已有研究利用貝萊斯芽孢桿菌（Bacillus velezensis）BPC16和W2-7對P.aroidearum引起魔芋軟腐病進(jìn)行防治，但防效均未超過45%^［9］；羅林麗等^［10］從13種常見的殺細(xì)菌劑中篩選出7種對P.aroidearum有抑菌效果，但其化學(xué)農(nóng)藥在田間進(jìn)行的試驗還未見報道，而且化學(xué)藥劑防治會對環(huán)境造成一定程度的污染。因此，尋找新型天然安全的抑菌劑尤為重要。

丁香酚作為一種植物天然的次級代謝產(chǎn)物，因其廣譜的抑菌活性和天然安全的特性，是一種天然抑菌劑。2022年發(fā)布食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)中，丁香酚可作為食品添加劑，是一種穩(wěn)定安全綠色的藥劑，在醫(yī)療、食品和微生物抑制等領(lǐng)域受到廣泛的關(guān)注^［11-13］。目前已有眾多研究揭示丁香酚對不同病原菌的抑菌機理和抑菌活性^［14-21］，且已有研究利用新型納米級星狀聚合陽離子材料（StarPolycation，SPc）和丁香酚進(jìn)行組裝，提高遞送效率，經(jīng) SPc 遞送的丁香酚提高了對馬鈴薯晚疫病的防效^［20］。但丁香酚抑制細(xì)菌果膠桿菌屬的研究較少，尤其在丁香酚對P.aroidearum的抑菌活性和機理上尚未見報道。因此，筆者以前期在合果芋上分離的引起嚴(yán)重細(xì)菌性軟腐病的合果芋果膠桿菌（P.aroidearum）L6作為研究對象，探究丁香酚對該菌的抑菌效果并測定抑菌活性。采用微量二倍梯度稀釋法算出丁香酚對P.aroidearum L6的最小抑菌濃度（Minimal Inhibit Concentration，MIC）為800 mg/L，進(jìn)一步繪制不同濃度下丁香酚對L6生長曲線，并結(jié)合核酸和可溶性蛋白質(zhì)含量、K+含量、AKP活性、ATP酶活性、胞外相對電導(dǎo)率、掃描電子顯微鏡觀察，揭示丁香酚對P.aroidearum L6的抑菌效果，以期為由P.aroidearum引起的植物軟腐病菌的藥劑篩選和田間防治提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 菌株。

2019年7月在海南省?？谑忻捞m區(qū)海南大學(xué)海甸校區(qū)農(nóng)科實驗基地中發(fā)現(xiàn)具有嚴(yán)重細(xì)菌性軟腐病的合果芋葉片，經(jīng)分離、純化得到P.aroidearum L6菌株，菌株保存于熱帶農(nóng)林生物災(zāi)害綠色防控教育部重點實驗室。

1.1.2 培養(yǎng)基與試劑。

Luria-Bertani液體培養(yǎng)基（LB），純度為98.5%丁香酚（上海源葉生物科技有限公司），純度為99.5%的二甲基亞砜（dimethyl sulfoxide，DMSO）（廣州賽國生物科技有限公司），K+離子試劑盒、堿性磷酸酶（alkaline phosphatase，AKP）、三磷酸腺苷（adenosine triphophate，ATP）酶試劑盒（南京建成生物工程研究所），純度為50%戊二醛（麥克林公司）。

1.1.3 儀器與設(shè)備。

小型5417R型冷凍離心機（Eppendorf），組合式ZQZY-CS8E型全溫振蕩型培養(yǎng)箱（上海知楚），雷磁DDS-11A電導(dǎo)率儀（上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司），721N型紫外-可見分光光度計（上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司）。

1.2 試驗方法

1.2.1 細(xì)菌懸濁液制備。

在LB液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)果膠桿菌（P.aroidearum）L6，用LB培養(yǎng)基稀釋，使其菌體濃度為107～108 CFU/mL備用。

1.2.2 MIC和EC 50濃度測定。

將丁香酚溶于質(zhì)量分?jǐn)?shù)2.5%的DMSO，采用二倍稀釋法^［18］配制不同質(zhì)量濃度的丁香酚，得到終濃度為6.25、12.50、25.00、50.00、100.00、200.00、400.00、800.00、1 600.00 mg/L的丁香酚稀釋液，向5 mL無菌離心管中分別加入1.1 mL不同濃度的丁香酚稀釋液、1 mL LB培養(yǎng)基和100 μL細(xì)菌懸濁液，對照組1加入1.1 mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)2.5% DMSO和100 μL細(xì)菌懸濁液，對照組2加入1.1 mL 無菌水和100 μL細(xì)菌懸液，在28 ℃下培養(yǎng)24 h，計算最小抑菌濃度MIC和半數(shù)有效作用濃度EC 50，重復(fù)3次。

1.2.3 可溶性蛋白和核酸含量測定。

參考“1.2.2”方法，1 mL細(xì)菌懸濁液中加入終濃度為0（對照）、0.25 MIC、0.50 MIC、1.00 MIC、2.00 MIC的丁香酚稀釋液，對照組加入等體積質(zhì)量分?jǐn)?shù)2.5%的DMSO，在搖床中以180 r/min、28 ℃條件培養(yǎng)5 h 后，8 000 r/min離心15 min，取其上清液測得OD 280 nm和OD 260 nm，以O(shè)D 260 nm表示胞外核酸相對量，以O(shè)D 280 nm表示胞外可溶性蛋白相對量，重復(fù)3次，每次設(shè)置3個平行。

1.2.4 K+含量測定。

通過“1.2.3”的方法獲得上清液，用K+試劑盒檢測上清液中K+含量，重復(fù)3次，每次設(shè)置3個平行。

1.2.5 堿式磷酸酶（AKP）活力測定。

通過“1.2.3”的方法獲得上清液，用AKP試劑盒測定上清液中AKP的活力，重復(fù)3次，每次設(shè)置3個平行。

1.2.6 ATP酶活力測定。

通過“1.2.3”的方法處理細(xì)菌懸濁液，獲得上清液和沉淀，將上清液用于胞外可溶性蛋白含量測定，蛋白質(zhì)定量利用紫外（UV）吸收測定法以牛血清蛋白做標(biāo)準(zhǔn)曲線評估^［22］。取離心后沉淀，使用超聲波細(xì)胞粉碎機于冰浴環(huán)境下超聲粉碎20 min，用ATP酶試劑盒檢測上清液ATP酶活性，重復(fù)3次。

1.2.7 電導(dǎo)率測定。

參考“1.2.2”方法和陳夢玲等^［23］的方法，并稍加修改，將濃度107～108 CFU/mL的細(xì)菌懸濁液中加入終濃度為0（對照）、0.25 MIC、0.50 MIC、1.00 MIC、2.00 MIC的丁香酚稀釋液，對照組加入等體積質(zhì)量分?jǐn)?shù)2.5%的DMSO，在搖床中以180 r/min、28 ℃培養(yǎng)12 h，分別于0、2、4、6、8、10、12 h取培養(yǎng)液測定其電導(dǎo)率，重復(fù)3次。

1.2.8 菌體微觀結(jié)構(gòu)測定。

參考“1.2.2”方法，濃度107～108 CFU/mL細(xì)菌懸濁液中加入終濃度為0（對照）、0.50 MIC和1.00 MIC的丁香酚稀釋液，對照組1加入等體積的LB培養(yǎng)基，對照組2加入等體積質(zhì)量分?jǐn)?shù)2.5%的DMSO，在搖床中以180 r/min、28 ℃培養(yǎng)5 h后，8 000 r/min離心15 min，去除上清液，用PBS漂洗2次，用體積分?jǐn)?shù)2.5%戊二醛固定液固定30 min，再轉(zhuǎn)移至4 ℃保存，送至武漢塞維爾生物有限公司進(jìn)行制片，掃描電子顯微鏡（Scanning Electron Microscope，SEM）觀察細(xì)菌的表面形態(tài)。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

采用SPSS Statistics 23、Origin 2018、Excel軟件整理數(shù)據(jù)并進(jìn)行差異顯著性檢驗（Plt;0.05）和繪圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 丁香酚對果膠桿菌抑菌活性

不同質(zhì)量濃度丁香酚對果膠桿菌（P.aroidearum）L6的抑菌作用見表1。由表1可知，無明顯生長（OD 600 nmlt;0.05）的濃度確定為最小抑菌濃度，為800 mg/L。通過數(shù)據(jù)計算得出丁香酚對P.aroidearum L6的抑菌回歸方程為y=2.128x-0.575，R2=0.919 7。且經(jīng)過對照，質(zhì)量分?jǐn)?shù)2.5% DMSO對P.aroidearum L6無明顯抑菌作用。

2.2 丁香酚對果膠桿菌的抑菌機理

2.2.1 丁香酚對果膠桿菌可溶性蛋白質(zhì)和核酸的影響。

從表2可以看出，丁香酚處理后P.aroidearum L6的可溶性蛋白質(zhì)和核酸釋放量明顯增加，且與丁香酚稀釋液的濃度成正比，這與周倩倩等^［18］研究丁香酚使腐敗希瓦氏菌（Shewanella putrefaciens）和熒光假單胞菌（Pseudomonas fluorescens）內(nèi)含物泄露的結(jié)論相似?？赡苁且驗槎∠惴优c細(xì)胞膜上結(jié)合位點相結(jié)合，先降解細(xì)胞壁致使胞質(zhì)膜和膜蛋白類受損傷，破壞細(xì)胞膜完整性，導(dǎo)致核酸和蛋白質(zhì)等內(nèi)含物泄露，使其吸光度增大。加入丁香酚的試驗組與對照組有顯著差異。這與Zhang等^［24］丁香酚殺菌作用的結(jié)果相似。

2.2.2 丁香酚對果膠桿菌K+含量的影響。

由圖1可知，丁香酚處理后，P.aroidearum L6的K+泄露含量顯著增加（Plt;0.05）。經(jīng)5 h丁香酚稀釋液處理后，相較于0 h，上清液中K+含量增加，且在5 h丁香酚處理后，丁香酚處理濃度越高，上清液K+泄漏量越多，這說明丁香酚能增大細(xì)胞膜的通透性，破壞細(xì)胞膜完整性，導(dǎo)致細(xì)菌胞質(zhì)中K+的泄漏，達(dá)到抑菌效果。

2.2.3 丁香酚對果膠桿菌堿式磷酸酶（AKP）活性的影響。

堿式磷酸酶（alkaline phosphatase，AKP）位于細(xì)菌細(xì)胞壁和細(xì)胞膜之間，當(dāng)細(xì)胞壁被破壞，AKP外露，可以在胞外被檢測到。因此，細(xì)胞懸液中AKP的濃度可以反映細(xì)菌細(xì)胞壁的完整性^［25］。從圖2可以看出，丁香酚引起P.aroidearum L6 AKP活性顯著增加（Plt;0.05）。經(jīng)丁香酚稀釋液處理5 h后，且隨著處理組溶液中丁香酚含量的增多，上清液AKP活性增大，說明丁香酚的濃度增加能增大細(xì)胞膜的通透性，破壞細(xì)胞膜完整性，導(dǎo)致細(xì)菌中內(nèi)含物泄露，達(dá)到抑菌效果。

2.2.4 丁香酚對果膠桿菌ATP活性的影響。

Na+K+ ATP活性、Mg²⁺ ATP活性、Ca²⁺ ATP活性、Ca²⁺Mg²⁺-ATP活性分別在生物體內(nèi)催動ATP供能，使Na+、K+、Ca²⁺和Mg²⁺濃度在細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定，并影響不同的生理功能^［26］。因此不同離子泵ATP活性反映出生物體生理水平的穩(wěn)定。經(jīng)丁香酚0.50 MIC、1.00 MIC、2.00 MIC處理5 h后，P.aroidearum L6 Na+K+-ATP活性、Mg²⁺-ATP活性、Ca²⁺-ATP活性、Ca²⁺Mg²⁺-ATP活性顯著降低（Plt;0.05）（圖3），且下降程度與丁香酚的質(zhì)量濃度呈正相關(guān)，說明丁香酚含量的增多能顯著抑制ATP的活性。進(jìn)一步說明在丁香酚破壞果膠桿菌細(xì)胞壁完整性初期，丁香酚可能通過抑制果膠桿菌的ATP供能，使果膠桿菌沒有足夠能量來復(fù)原破損的細(xì)胞壁部位。

2.2.5 丁香酚對果膠桿菌電導(dǎo)率的影響。

由圖4可知，經(jīng)丁香酚稀釋液處理初期，P.aroidearum L6 電導(dǎo)率顯著增加（Plt;0.05），且上升程度與丁香酚質(zhì)量濃度呈正相關(guān)，說明丁香酚對P.aroidearum L6的作用依賴劑量效應(yīng)。而細(xì)胞壁和細(xì)胞膜對細(xì)菌菌體起到保護(hù)作用，當(dāng)菌體通透性增加時，內(nèi)含物中的電解質(zhì)泄露，增大菌體培養(yǎng)液中的電導(dǎo)率。進(jìn)一步說明丁香酚破壞果膠桿菌細(xì)胞壁完整性，增大細(xì)胞膜的通透性，破壞細(xì)胞膜完整性，導(dǎo)致細(xì)菌中內(nèi)含物泄露，達(dá)到抑菌效果。

2.3 丁香酚對果膠桿菌菌體的影響

由圖5可知，對照組1和2的P.aroidearum L6菌體表面完整，光滑飽滿呈桿狀，進(jìn)一步說明2.5%DMSO對P.aroidearum L6無抑制效果。經(jīng)過丁香酚處理后，菌體表面出現(xiàn)破裂凹陷，菌體整體形態(tài)畸形，部分菌體表面細(xì)胞壁剝落，內(nèi)含物泄露。說明丁香酚破壞P.aroidearum L6菌體完整性，致使菌體內(nèi)含物泄露，不能正常生長而死亡，達(dá)到抑菌效果。周倩倩等^［18］發(fā)現(xiàn)丁香酚對腐敗希瓦氏菌（S.putrefaciens）和熒光假單胞菌（P.fluorescens）也產(chǎn)生類似細(xì)胞形態(tài)損傷。

3 討論

丁香酚作為丁香提取物中的主要成分，因其良好的抑菌效果和藥理活性，在醫(yī)藥、食品、化妝品、化工等領(lǐng)域具有巨大的發(fā)展?jié)摿蛻?yīng)用前景^［27］。在微生物防治上，近年來廣泛被用于真菌、細(xì)菌和線蟲防治。潘磊慶等^［14］研究發(fā)現(xiàn)丁香酚對灰葡萄孢（Botrytis cinerea）和匍枝根霉（Rhizopus stolonifer）具有顯著的抑菌效果，且處理濃度在120 μL/L時櫻桃番茄的保鮮效果最好。錢衛(wèi)東等^［28］研究發(fā)現(xiàn)丁香酚可以通過破壞大腸桿菌（E.coli）的細(xì)胞結(jié)構(gòu)達(dá)到抑菌效果。段昊沅等^［29］研究發(fā)現(xiàn)丁香酚可以破壞秀麗隱桿線蟲（Caenorhabditis elegans）的氧化和抗氧化平衡，影響代謝作用及其體內(nèi)蛋白質(zhì)的正常合成和工作，達(dá)到毒殺效果?？梢姸∠惴訌V譜的抑制活性和發(fā)展前景。

該研究通過體外抑菌試驗測出丁香酚對合果芋果膠桿菌（P.aroidearum）L6的最小抑菌濃度為800 mg/L，抑菌EC 50（50% effective concentration，）為409.33 mg/L，丁香酚稀釋液處理P.aroidearum L6的核酸和可溶性蛋白的泄露量增大，K+含量增大，AKP活性增加，ATP酶活性減弱，電導(dǎo)率增加，說明丁香酚可能通過增大細(xì)胞膜的通透性，破壞細(xì)胞膜完整性，降低細(xì)胞中能量供應(yīng)，導(dǎo)致細(xì)菌中內(nèi)含物泄露，達(dá)到抑菌效果。經(jīng)過丁香酚處理前后的P.aroidearum L6菌體的SEM拍照結(jié)果，可以觀察到丁香酚破壞P.aroidearum L6菌體表面，致使菌體畸形，表面細(xì)胞壁剝落，內(nèi)含物泄露，進(jìn)一步說明丁香酚通過破壞P.aroidearum L6菌體完整性，增大細(xì)胞膜的通透性，致使菌體內(nèi)含物泄露，達(dá)到抑菌效果。

目前，已揭示出的丁香酚對病原微生物的抑菌機理，大部分是丁香酚作用于病原微生物的細(xì)胞壁及細(xì)胞膜上，造成損傷破壞和通透性的改變，引起細(xì)胞能量代謝障礙，內(nèi)含物泄露，達(dá)到抑菌效果^{［17-18，28，30］}，這與該研究結(jié)果一致。但關(guān)于丁香酚具體與病原微生物細(xì)胞上的某種位點相結(jié)合的分子層面機制，目前尚不明確，仍需要探究。

綜上所述，丁香酚能抑制P.aroidearum L6菌株的生長，其抑菌機理可能是丁香酚作用于細(xì)胞上的某個受體，引起結(jié)構(gòu)變化，增大

細(xì)胞膜的通透性，破壞細(xì)胞膜完整性，致使表面細(xì)胞壁剝落，降低細(xì)胞中能量供應(yīng)，導(dǎo)致內(nèi)含物泄露，達(dá)到抑菌效果。這表明丁香酚作為一種天然的次級代謝產(chǎn)物，具有針對P.aroidearum引起的細(xì)菌性病害的應(yīng)用前景，為P.aroidearum引起的植物病害防治提供了新的思路。

參考文獻(xiàn)

［1］ CROAT T B.A revision of Syngonium（Araceae）［J］.Annals of the missouri botanical garden，1981，68（4）：565-651.

［2］ GRIFFITH L P.Tropical foliage plants：A grower’s guide［M］.Batavia，IL，USA：Ball Publishing，1998.

［3］ ZHANG Q，CHEN J J，HENNY R J.Regeneration of Syngonium podophyllum ‘Variegatum’ through direct somatic embryogenesis［J］.Plant cell tissue and organ culture，2006，84（2）：181-188.

［4］ MA B，HIBBING M E，KIM H S，et al.Host range and molecular phylogenies of the soft rot Enterobacterial genera Pectobacterium and Dickeya［J］.Phytopathology，2007，97（9）：1150-1163.

［5］ TOTH I K，VAN DER WOLF J M，SADDLER G，et al.Dickeya species：An emerging problem for potato production in Europe［J］.Plant pathology，2011，60（3）：385-399.

［6］ 韋丹丹.生防芽孢桿菌HAB-2菌劑的應(yīng)用及合果芋細(xì)菌性軟腐病菌的鑒定［D］.?？冢汉Ｄ洗髮W(xué)，2020.

［7］ XU P D，WANG H W，QIN C X，et al.Analysis of the taxonomy and pathogenic factors of Pectobacterium aroidearum L6 using whole genome sequencing and comparative genomics［J］.Frontiers in microbiology，2021，12：1-14.

［8］ 李曉穎，田宇，張瑾，等.大白菜軟腐病新病原菌Pectobacterium aroidearum的鑒定及其生物學(xué)特性［J］.植物病理學(xué)報，2018，48（4）：455-465.

［9］ 崔雙，陳昌龍，馮佳豪，等.魔芋軟腐病致病菌Pectobacterium aroidearum的特征及貝萊斯芽孢桿菌的生防效果［J］.中國蔬菜，2021（3）：83-93.

［10］ 羅林麗，趙興麗，周羅娜，等.1株白魔芋軟腐病病原菌鑒定及其室內(nèi)藥劑篩選［J］.南方農(nóng)業(yè)學(xué)報，2022，53（11）：3137-3146.

［11］ 李巧如，劉宗智，任健康，等.丁香提取物抗菌機理的探討［J］.西北藥學(xué)雜志，2001，16（6）：261-262.

［12］ 張慧蕓，孔保華.丁香提取物抗菌機理的研究［J］.食品科學(xué)，2009，30（3）：88-91.

［13］ 孔曉軍，劉希望，李劍勇，等.丁香酚的藥理學(xué)作用研究進(jìn)展［J］.湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，52（3）：508-511.

［14］ 潘磊慶，朱娜，邵興鋒，等.丁香精油對櫻桃番茄保鮮作用的研究［J］.食品工業(yè)科技，2012，33（23）：335-338.

［15］ 劉永，顏冬梅，李志偉.丁香酚/大豆蛋白膜對圣女果保鮮效果的研究［J］.中國食品添加劑，2017，28（4）：83-87.

［16］ 李磊，易有金，夏菠，等.丁香酚改性產(chǎn)物對葡萄采后保鮮的作用［J］.食品研究與開發(fā)，2018，39（10）：180-185.

［17］ 葛達(dá)娥，魏照輝，圖爾蓀阿依·圖爾貢，等.丁香酚對藍(lán)莓鏈格孢霉的抑制作用［J］.食品科學(xué)，2020，41（19）：68-73.

［18］ 周倩倩，方士元，梅俊，等.丁香酚對腐敗希瓦氏菌和熒光假單胞菌的抑制機理［J］.食品科學(xué)，2020，41（9）：1-6.

［19］ 王江來，張錦鋒，馬金秀，等.香芹酚和丁香酚對腐皮鐮刀菌的抑菌活性及抑菌機理［J］.微生物學(xué)通報，2022，49（5）：1638-1650.

［20］ WANG X D，ZHENG K K，CHENG W Y，et al.Field application of star polymer delivered chitosan to amplify plant defense against potato late blight［J］.Chemical engineering journal，2021，417：1-14.

［21］ WAN J，ZHONG S B，SCHWARZ P，et al.Influence of oil phase composition on the antifungal and mycotoxin inhibitory activity of clove oil nanoemulsions［J］.Food amp; function，2018，9（5）：2872-2882.

［22］ 劉世清，劉洪玉.四種蛋白質(zhì)測定方法的比較研究［J］.畜牧獸醫(yī)科技信息，2012（3）：39-40.

［23］ 陳夢玲，藍(lán)蔚青，李函笑，等.牛至精油對腐生葡萄球菌抑制作用機制［J］.食品科學(xué)，2020，41（7）：46-51.

［24］ ZHANG Y，WANG Y，CAO X J，et al.Antibacterial and antibiofilm activities of eugenol from essential oil of Syzygium aromaticum（L.）Merr.amp; L.M.Perry（clove）leaf against periodontal pathogen Porphyromonas gingivalis［J］.Microbial pathogenesis，2017，113：396-402.

［25］ WANG F，WEI F Y，SONG C X，et al.Dodartia orientalis L.essential oil exerts antibacterial activity by mechanisms of disrupting cell structure and resisting biofilm［J］.Industrial crops and products，2017，109：358-366.

［26］ 李海英，趙娟，李海生.Na+，K+-ATP酶和Ca²⁺，Mg²⁺-ATP酶活性影響因素的研究進(jìn)展［J］.現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2008，17（9）：1449-1450.

［27］ 張國榮，張亮，張娟，等.多領(lǐng)域中丁香酚檢測的研究進(jìn)展［J］.化工與醫(yī)藥工程，2022，43（6）：53-60.

［28］ 錢衛(wèi)東，劉嬋嬋，王婷，等.丁香酚對多重耐藥大腸桿菌的抑菌活性及其作用機制研究［J］.現(xiàn)代食品科技，2019，35（1）：31-36，14.

［29］ 段昊沅，陳華錚，王僑，等.丁香油對秀麗隱桿線蟲的毒殺作用及其機理［J］.林業(yè)工程學(xué)報，2023，8（2）：95-100.

［30］ 李姝毅，馬秋華，楊蓉婭，等.丁香酚體外抗阿薩希毛孢子菌作用研究［J］.中藥藥理與臨床，2013，29（4）：61-63.