摘要目的：觀察川芎-赤芍藥對(duì)及其有效成分能否減緩細(xì)胞泡沫化，并探討其作用機(jī)制。方法：采用氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）誘導(dǎo)人單核細(xì)胞白血病（THP-1）細(xì)胞建立泡沫化模型，將川芎-赤芍藥對(duì)及其有效成分分別作用于ox-LDL誘導(dǎo)的THP-1細(xì)胞。采用油紅O染色分析細(xì)胞泡沫化程度，通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄定量聚合酶鏈反應(yīng)（RT-qPCR）檢測(cè)鐵代謝相關(guān)鐵調(diào)素（Hep）、膜鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（FPN）、鐵調(diào)素調(diào)節(jié)蛋白（HJV）、血色素沉著癥基因（HFE）、轉(zhuǎn)鐵蛋白受體2（TfR2）mRNA表達(dá)情況。結(jié)果：油紅O細(xì)胞染色后鏡下可見(jiàn)，染色后的紅色脂滴因川芎-赤芍藥對(duì)及其有效成分干預(yù)而減少。與對(duì)照組比較，模型組Hep、FPN、HFE、TfR2 mRNA表達(dá)上升，HJV mRNA表達(dá)減少；與模型組比較，川芎-赤芍藥對(duì)及其有效成分干預(yù)組抑制作用明顯，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）。結(jié)論：川芎-赤芍藥對(duì)及其有效成分可抑制ox-LDL誘導(dǎo)的THP-1源巨噬細(xì)胞泡沫化，作用機(jī)制與川芎-赤芍藥對(duì)及其有效成分調(diào)節(jié)鐵代謝相關(guān)基因表達(dá)有關(guān)。

關(guān)鍵詞川芎-赤芍藥對(duì)；巨噬細(xì)胞泡沫化；鐵調(diào)素；川芎嗪；芍藥苷；實(shí)驗(yàn)研究

doi：10.12102/j.issn.1672-1349.2024.18.008

Mechanism of Chuanxiong-Chishao and its Effective Ingredients on ox-LDL-induced Macrophage Foaming and Hepcidin

XU Guipeng， WEI Fengni， CHEN Qiting， LIN Baohong， CHEN Lijie， ZHANG Miao

Shenzhen Second People′s Hospital， Shenzhen 518000， Guangdong， China

Corresponding AuthorZHANG Miao， E-mail： shuixi.an@163.com

AbstractObjective：To observe the effect of Chuanxiong-Chishao and its effective ingredients on cell foaming，and to explore its mechanism of action.Methods：The foaming model of THP-1 cells was established by oxidized low density lipoprotein（ox-LDL）.The tohoku hospital pediatrics-1（THP-1） cells induced by ox-LDL were treated with Chuanxiong-Chishao and its effective ingredients respectively.The cell foam was analyzed by oil red O staining，and the mRNA expressions of hepcidin（Hep），ferroportin（FPN），ferrimodulin regulatory protein（HJV），hemochromatosis gene（HFE） and transferrin receptor 2（TfR2） were detected by reverse transcription quantitative polymerase chain reaction（RT-qPCR）.Results：Oil red O staining showed that the number of red fat drops decreased with the intervention of Chuanxiong-Chishao and its effective ingredients.Compared with the control group，the mRNA expressions of Hep，F(xiàn)PN，HFE and TfR2 increased in the model group，while mRNA expression of HJV decreased.Compared with the model group，Chuanxiong-Chishao and its effective ingredients of the intervention group showed obvious inhibitory effect，and the differences were statistically significant（P＜0.05 or P＜0.01）.Conclusion：Chuanxiong-Chishao and its effective ingredients could inhibit the ox-LDL-induced THP-1-derived macrophage foaming，and its mechanism of action was related to the regulation of iron metabolism related gene expression.

KeywordsChuanxiong-Chishao; macrophage foaming; ferroportin; ligustrazine; paeoniflorin; experimental study

活血化瘀中藥川芎-赤芍藥對(duì)防治動(dòng)脈粥樣硬化（atherosclerosis，AS）的臨床及動(dòng)物相關(guān)研究較多，抗AS療效已被證實(shí)，但具體作用機(jī)制尚未明確［1-3］。相關(guān)研究顯示，鐵代謝及鐵調(diào)素（hepcidin，Hep）/膜鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（ferroportin，F(xiàn)PN）信號(hào)通路異常是促進(jìn)AS的重要危險(xiǎn)因素，可能成為治療AS的新靶點(diǎn)［4-5］。鐵是機(jī)體必需的微量元素，Hep是富含半胱氨酸的具有負(fù)性鐵調(diào)節(jié)作用的在肝內(nèi)合成的抗菌多肽，可抑制單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)鐵的釋放及腸道鐵的吸收［6-7］。FPN是哺乳動(dòng)物膜鐵輸出的蛋白，受Hep調(diào)節(jié)，當(dāng)Hep與其受體FPN結(jié)合，泛素化誘導(dǎo)降解了FPN，使鐵在細(xì)胞內(nèi)滯留，減少鐵的輸出。Hepcidin/Ferroportin軸可調(diào)節(jié)鐵平衡，在體內(nèi)受到精準(zhǔn)的調(diào)控，通過(guò)協(xié)調(diào)小腸上皮細(xì)胞調(diào)控鐵的吸收，協(xié)調(diào)肝臟細(xì)胞和脾臟巨噬細(xì)胞中儲(chǔ)存的鐵釋放，調(diào)控機(jī)體游離的鐵濃度，維持機(jī)體鐵穩(wěn)態(tài)［7］。Hep的分子調(diào)控機(jī)制復(fù)雜，主要是通過(guò)骨形態(tài)發(fā)生蛋白（BMP）信號(hào)途徑［8］。鐵調(diào)素調(diào)節(jié)蛋白（HJV）是血色素沉著癥基因（HFE）2的產(chǎn)物，其是BMPs的協(xié)同受體，通過(guò)BMP受體增強(qiáng)BMP通路信號(hào)傳導(dǎo)［9］。當(dāng)機(jī)體累積過(guò)量的鐵時(shí)可產(chǎn)生一種復(fù)合物，這種復(fù)合物是由細(xì)胞膜上的轉(zhuǎn)鐵蛋白受體（TfR）1或TfR2、HFE與飽和轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合形成，通過(guò)促進(jìn)BMP信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)控Hep表達(dá)［10-11］。因此，在鐵調(diào)節(jié)中FPN、Hep、HFE、HJV、TfR2參與其中并發(fā)揮重要作用。

巨噬細(xì)胞泡沫化是公認(rèn)的體外AS細(xì)胞模型，為進(jìn)一步探討川芎-赤芍藥對(duì)及其有效成分對(duì)AS的影響及其機(jī)制，本研究采用人單核細(xì)胞白血?。═HP-1）細(xì)胞，通過(guò)丙二醇甲醚醋酸脂（PMA）及氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）誘導(dǎo)為泡沫細(xì)胞，構(gòu)建AS體外模型；建模成功后加入川芎-赤芍藥對(duì)及其有效成分進(jìn)行干預(yù)，并設(shè)置空白對(duì)照組及陽(yáng)性藥物組，進(jìn)而觀察川芎-赤芍藥對(duì)及其有效成分對(duì)THP-1巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞的影響及作用機(jī)制。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料

人單核/巨噬細(xì)胞株THP-1購(gòu)自中科院上海生命科學(xué)研究院生化與細(xì)胞所。

1.2實(shí)驗(yàn)藥物

川芎嗪、芍藥苷標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司；川芎-赤芍藥對(duì)及單體凍干粉購(gòu)自華潤(rùn)三九藥業(yè)；辛伐他汀（杭州默沙東制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：M023632，規(guī)格：每片20 mg）。

1.3實(shí)驗(yàn)試劑

RPMI-1640培養(yǎng)液，胎牛血清（Hyclone）；PMA（大連唯諾商貿(mào)有限公司）；Trizol（Takara）；油紅O染料（Sigma）；逆轉(zhuǎn)錄及SYBR Green PCR 試劑盒（ABI）。

1.4細(xì)胞培養(yǎng)及模型制備

THP-1細(xì)胞培養(yǎng)于RPMI-1640培養(yǎng)基（含10%標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清、100 U/mL鏈霉素及100 U/mL青霉素）中。培養(yǎng)條件：37 ℃恒溫培養(yǎng)箱，5%的CO2，細(xì)胞密度為2×106個(gè)細(xì)胞數(shù)，間隔2～4 d進(jìn)行傳代。

巨噬細(xì)胞泡沫化模型的建立：取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞計(jì)數(shù)后的THP-1細(xì)胞轉(zhuǎn)移至離心管中，以1 000 r/min離心3 min后，棄上清，加入PMA（160 nmol/L）的細(xì)胞培養(yǎng)基，48 h后觀察細(xì)胞狀態(tài)。THP-1單核細(xì)胞分化，表現(xiàn)為細(xì)胞體積增大，由懸浮變成貼壁，偽足由圓形變成不規(guī)則形狀，表明已分化成THP-1細(xì)胞源性的巨噬細(xì)胞。

分化誘導(dǎo)成功后，加入含ox-LDL（100 mg/L）、10%胎牛血清的細(xì)胞培養(yǎng)基，培養(yǎng)24 h后觀察到細(xì)胞體積繼續(xù)增大，脂質(zhì)變多，有透亮脂滴形成；使用油紅O對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色，細(xì)胞質(zhì)中可見(jiàn)較多圓形、亮紅色及典型戒環(huán)樣的脂滴，表明THP-1細(xì)胞巨噬源性泡沫細(xì)胞模型構(gòu)建成功。

1.5油紅O染色

取狀態(tài)較好的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期THP-1細(xì)胞接種于6孔板中，PMA處理48 h，使其分化為巨噬細(xì)胞，再給予ox-LDL誘導(dǎo)24 h后油紅O染色，蘇木素復(fù)染，顯微鏡下觀察并照相。

1.6實(shí)驗(yàn)分組

將PMA誘導(dǎo)后的THP-1源性巨噬細(xì)胞混勻后分為9組，每組4孔，分別為對(duì)照組（正常巨噬細(xì)胞）、模型組（ox-LDL 100 mg/L）、陽(yáng)性藥物組（ox-LDL 100 mg/L＋辛伐他汀 1 μmol/L）、川芎嗪組（ox-LDL 100 mg/L＋川芎嗪 500 μmol/L）、芍藥苷組（ox-LDL 100 mg/L＋芍藥苷 500 μmol/L）、川芎組（ox-LDL 100 mg/L＋川芎20 g/L）、赤芍組（ox-LDL 100 mg/L＋赤芍20 g/L）、川芎嗪＋芍藥苷組（ox-LDL 100 mg/L＋川芎嗪 500 μmol/L＋芍藥苷500 μmol/L）、芎芍藥對(duì)組（ox-LDL 100 mg/L＋川芎-赤芍藥對(duì)20 g/L）。

1.7逆轉(zhuǎn)錄定量聚合酶鏈反應(yīng)（RT-qPCR）測(cè)定目的基因

收集細(xì)胞，使用Trizol將細(xì)胞充分裂解，進(jìn)行RNA提??；按說(shuō)明書(shū)將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA；再經(jīng)過(guò)預(yù)變性、擴(kuò)增等PCR反應(yīng)計(jì)算目的基因相對(duì)表達(dá)量。Hep正向引物5′-CCTGACCAGTGGCTCTGTTT-3′，反向引物5′-CACATCCCACACTTTGATCG-3′；FPN正向引物5′-ACCTCGCTGGTGGTACAGAATGTT-3′，反向引物5′-AGCAGGAAGTGAGAACCCATCCAT-3′；HFE正向引物5′-GGATCTTGGAGCAAACCTCA-3′，反向引物5′-GACACCACTCCCAACTTCGT-3′；HJV正向引物5′-TTCCAATCCTGCGTCTTTGAT-3′，反向引物5′- GGAAAAGGTGCAAGTTCTCCAA-3′；TfR2正向引物5′-CCATCAGTGCTGACATTGCT-3′，反向引物5′- TGGGGGTAGAGACTCTGTGG-3′。以GAPDH為內(nèi)參，對(duì)照組及模型組作為對(duì)照，各藥物干預(yù)組目的基因的mRNA相對(duì)含量用2－△△Ct計(jì)算。

1.8統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

使用GraphPad Prism 9.4統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。符合正態(tài)分布的定量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩組間比較采用LSD檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1川芎-赤芍藥對(duì)及其有效成分對(duì)巨噬細(xì)胞泡沫化的影響

紅O染色后顯微鏡下可見(jiàn)：對(duì)照組細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有少量的紅色微粒；模型組經(jīng)ox-LDL誘導(dǎo)后，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有大量亮紅色的脂滴，細(xì)胞體積變大，并出現(xiàn)了戒環(huán)樣的典型泡沫細(xì)胞形態(tài)；與模型組比較，川芎嗪組、芍藥苷組、川芎組、赤芍組細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的紅色脂滴均顯著減少、變小，川芎嗪＋芍藥苷組及芎芍藥對(duì)組紅色脂滴減少更顯著。詳見(jiàn)圖1。

2.2川芎-赤芍藥對(duì)及其有效成分對(duì)泡沫細(xì)胞Hep mRNA表達(dá)的影響

與對(duì)照組比較，模型組Hep mRNA表達(dá)升高（P＜0.01）；與模型組比較，陽(yáng)性藥物組、川芎嗪組、芍藥苷組、川芎組、赤芍組、川芎嗪＋芍藥苷組、芎芍藥對(duì)組Hep mRNA表達(dá)均減少，且川芎嗪＋芍藥苷組降低最顯著，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）。詳見(jiàn)圖2。

2.3川芎-赤芍藥對(duì)及其有效成分對(duì)泡沫細(xì)胞FPN mRNA表達(dá)的影響

與對(duì)照組比較，模型組FPN mRNA表達(dá)升高（P＜0.01）；與模型組比較，陽(yáng)性藥物組、赤芍組、川芎嗪＋芍藥苷組、芎芍藥對(duì)組FPN mRNA表達(dá)均降低，且陽(yáng)性藥物組降低最顯著，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。詳見(jiàn)圖3。

2.4川芎-赤芍藥對(duì)及其有效成分對(duì)泡沫細(xì)胞HFE mRNA表達(dá)的影響

與對(duì)照組比較，模型組HFE mRNA表達(dá)升高（P＜0.01）；與模型組比較，陽(yáng)性藥物組、川芎嗪組、芍藥苷組、川芎組、赤芍組、川芎嗪＋芍藥苷組、芎芍藥對(duì)組HFE mRNA表達(dá)均降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。詳見(jiàn)圖4。

2.5川芎-赤芍藥對(duì)及其有效成分對(duì)泡沫細(xì)胞HJV mRNA表達(dá)的影響

與對(duì)照組比較，模型組HJV mRNA表達(dá)降低（P＜0.01）；與模型組比較，陽(yáng)性藥物組、川芎嗪組、芍藥苷組、川芎組、赤芍組、川芎嗪＋芍藥苷組、芎芍藥對(duì)組HJV mRNA表達(dá)均升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）。詳見(jiàn)圖5。

2.6川芎-赤芍藥對(duì)及其有效成分對(duì)泡沫細(xì)胞TfR2 mRNA表達(dá)的影響

與對(duì)照組比較，模型組TfR2 mRNA表達(dá)升高（P＜0.01）；與模型組比較，陽(yáng)性藥物組、川芎嗪組、芍藥苷組、川芎組、赤芍組、川芎嗪＋芍藥苷組、芎芍藥對(duì)組TfR2 mRNA表達(dá)均降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。詳見(jiàn)圖6。

3討論

AS是引起心腦血管疾病的重要病理因素之一，嚴(yán)重威脅人類(lèi)的健康及生命，但具體機(jī)制尚未明確。有研究證實(shí)，鐵代謝紊亂與AS關(guān)系密切，可促進(jìn)脂質(zhì)過(guò)氧化、炎癥等病理過(guò)程，AS斑塊不穩(wěn)定、斑塊內(nèi)出血、鐵沉積及脂質(zhì)過(guò)氧化是晚期AS斑塊的重要特征［12］。相關(guān)研究顯示，在AS的發(fā)展過(guò)程中，鐵代謝相關(guān)信號(hào)通路有重要的關(guān)聯(lián)作用，Hepcidin/Ferroportin信號(hào)通路是鐵代謝主要的信號(hào)通路，該通路異常是AS的重要危險(xiǎn)因素，可能成為治療AS的新靶點(diǎn)。研究表明，Hep和FPN比例在AS的發(fā)病中發(fā)揮著重要的作用［13-14］。一項(xiàng)流行病學(xué)調(diào)查顯示，絕經(jīng)后的女性Hep水平與AS的發(fā)生關(guān)系密切，Hep和FPN比例與AS的發(fā)病密切相關(guān)［15］。體內(nèi)研究發(fā)現(xiàn)，AS斑塊中的Hep水平升高，可促進(jìn)AS斑塊內(nèi)鐵沉積、炎癥反應(yīng)及脂質(zhì)在巨噬細(xì)胞聚積［16-17］。體外研究發(fā)現(xiàn)，ox-LDL通過(guò)刺激誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞Hep表達(dá)，內(nèi)化降解巨噬細(xì)胞膜的FPN，引起細(xì)胞內(nèi)鐵沉積，上調(diào)噬紅巨噬細(xì)胞內(nèi)聚積脂質(zhì)，從而誘發(fā)炎癥、氧化應(yīng)激及細(xì)胞凋亡［18］。Wunderer等［12］研究指出，BMP-Hep-FPN軸可能作為預(yù)防和治療心血管疾病的新靶標(biāo)。

中醫(yī)藥在抗氧化、抗炎、調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝等方面的多靶點(diǎn)作用使其在預(yù)防及抗AS方面有獨(dú)到的優(yōu)勢(shì)。瘀血阻滯是AS主要的病因病機(jī)，活血化瘀是目前防治該病的有效策略?；钛鏊帉?duì)（川芎-赤芍）是從經(jīng)典方血府逐瘀湯中精制簡(jiǎn)化得來(lái)［19］。川芎溫通辛散，是血中之氣藥，既化瘀活血又行血中氣滯；赤芍寒苦，散瘀止痛、涼血清熱；二藥配伍，增加活血化瘀功效同時(shí)借氣而行血，使破滯行血效力增倍。陳可冀院士治療冠心病經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入（PCI）術(shù)后血瘀證常用川芎-赤芍藥對(duì)，該藥對(duì)為治療該病的專(zhuān)方專(zhuān)藥［20］。川芎嗪為川芎發(fā)揮效用的主要成分，具有抗炎、減輕氧化應(yīng)激、抗血栓等作用［21］。芍藥苷為赤芍發(fā)揮效用的主要組分，可保護(hù)心臟、神經(jīng)，具有抗炎、抗凝、抗氧化等［22］。川芎-赤芍藥對(duì)及其效用組分相須互補(bǔ)，協(xié)同改善心腦血管疾病如AS等的病理變化［23］。多項(xiàng)研究顯示，活血化瘀中藥單體川芎嗪能有效改善AS小鼠鐵過(guò)載，降低血脂并抑制斑塊形成，具有調(diào)節(jié)機(jī)體鐵穩(wěn)態(tài)及抗氧化損傷的作用［18-19，24］。

本研究選用活血化瘀中藥藥對(duì)川芎-赤芍，構(gòu)建ox-LDL刺激誘導(dǎo)的THP-1巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞即AS體外模型，結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，模型組Hep、FPN、HFE、TfR2 mRNA表達(dá)均增多，HJV mRNA降低（P＜0.05）；與模型組比較，陽(yáng)性藥物組、川芎嗪組、芍藥苷組、川芎組、赤芍組、川芎嗪＋芍藥苷組、芎芍藥對(duì)組FPN、Hep、HFE、TfR2 mRNA表達(dá)均降低，HJV mRNA升高（P＜0.05）；油紅O結(jié)果提示巨噬細(xì)胞泡沫化模型造模成功，PCR結(jié)果證明模型組Hepcidin、FPN、HFE、TfR2表達(dá)增高、HJV降低，川芎-赤芍藥對(duì)及其有效成分可抑制其異常表達(dá)。提示中藥川芎-赤芍藥對(duì)及其有效成分通過(guò)降低Hepcidin、FPN、HFE、TfR2，升高HJV，調(diào)節(jié)Hepcidin/Ferroportin信號(hào)通路，從而發(fā)揮改善AS的作用。

綜上所述，鐵代謝及Hepcidin/Ferroportin軸為靶點(diǎn)的AS研究處于起步階段，活血化瘀藥對(duì)在AS過(guò)程中鐵代謝及Hepcidin/Ferroportin通路調(diào)節(jié)作用的研究較少，亟待開(kāi)發(fā)。本研究為川芎-赤芍藥對(duì)的臨床應(yīng)用提供了實(shí)驗(yàn)證據(jù)，并為活血化瘀新藥中成藥的研發(fā)及機(jī)制研究提供Hepcidin相關(guān)的新靶點(diǎn)和新思路，為中醫(yī)藥的現(xiàn)代化發(fā)展提供了科學(xué)的實(shí)驗(yàn)證據(jù)，對(duì)闡明AS病變加重、發(fā)現(xiàn)新的治療靶點(diǎn)及有效的治療藥物具有重要的臨床意義。

參考文獻(xiàn)：

［1］袁蓉，王燕，叢偉紅，等.芎芍膠囊治療心血管病研究進(jìn)展［J］.中國(guó)中藥雜志，2017，42（4）：640-643.

［2］佘一鳴，胡永慧，張莉野，等.中藥調(diào)血脂的研究進(jìn)展［J］.中草藥，2017，48（17）：3636-3644.

［3］胡楠，張威，于睿，等.中藥復(fù)方治療頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊臨床療效Meta分析［J］.中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2018，36（9）：2089-2093.

［4］CORNELISSEN A，GUO L，SAKAMOTO A，et al.New insights into the role of iron in inflammation and atherosclerosis［J］.E Bio Medicine，2019，47：598-606.

［5］GALESLOOT T E，HOLEWIJN S，KIEMENEY L A，et al.Serum hepcidin is associated with presence of plaque in postmenopausal women of a general population［J］.Arteriosclerosis，Thrombosis，and Vascular Biology，2014，34（2）：446-456.

［6］CAMASCHELLA C，NAI A，SILVESTRI L.Iron metabolism and iron disorders revisited in the hepcidin era［J］.Haematologica，2020，105（2）：260-272.

［7］RISHI G，SUBRAMANIAM V N.The relationship between systemic iron homeostasis and erythropoiesis［J］.Bioscience Reports，2017，37（6）：BSR20170195.

［8］LI Y K，HUANG X L，WANG J J，et al.Regulation of iron homeostasis and related diseases［J］.Mediators of Inflammation，2020，2020：6062094.

［9］SILVESTRI L，NAI A，DULJA A，et al.Hepcidin and the BMP-SMAD pathway：an unexpected liaison［J］.Vitamins and Hormones，2019，110：71-99.

［10］XIAO X，ALFARO-MAGALLANES V M，BABITT J L.Bone morphogenic proteins in iron homeostasis［J］.Bone，2020，138：115495.

［11］LI B C，GONG J，SHENG S Q，et al.Increased hepcidin in hemorrhagic plaques correlates with iron-stimulated IL-6/STAT3 pathway activation in macrophages［J］.Biochemical and Biophysical Research Communications，2019，515（2）：394-400.

［12］WUNDERER F，TRAEGER L，SIGURSLID H H，et al.The role of hepcidin and iron homeostasis in atherosclerosis［J］.Pharmacological Research，2020，153：104664.

［13］XIAO L，LUO G，GUO X P，et al.Macrophage iron retention aggravates atherosclerosis：evidence for the role of autocrine formation of hepcidin in plaque macrophages［J］.Biochimica et Biophysica Acta Molecular and Cell Biology of Lipids，2020，1865（2）：158531.

［14］GALARIS D，BARBOUTI A，PANTOPOULOS K.Iron homeostasis and oxidative stress：an intimate relationship［J］.Biochimica et Biophysica Acta Molecular Cell Research，2019，1866（12）：118535.

［15］FANG X X，WANG H，HAN D，et al.Ferroptosis as a target for protection against cardiomyopathy［J］.Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America，2019，116（7）：2672-2680.

［16］NEGRE-SALVAYRE A，GUERBY P，GAYRAL S，et al.Role of reactive oxygen species in atherosclerosis：lessons from murine genetic models［J］.Free Radical Biology amp; Medicine，2020，149：8-22.

［17］ZHANG M，SUN M Y，GUO C Y，et al.Effect of tetramethylpyrazine and hyperlipidemia on hepcidin homeostasis in mice［J］.International Journal of Molecular Medicine，2019，43（1）：501-506.

［18］ZHANG M，LIU J，GUO W L，et al.Icariin regulates systemic iron metabolism by increasing hepatic hepcidin expression through Stat3 and Smad1/5/8 signaling［J］.International Journal of Molecular Medicine，2016，37（5）：1379-1388.

［19］袁蓉，施偉麗，信琪琪，等.川芎-赤芍藥對(duì)研究進(jìn)展［J］.環(huán)球中醫(yī)藥，2019，12（5）：808-811.

［20］蔣躍絨，謝元華，張京春，等.陳可冀治療心血管疾病血瘀證用藥規(guī)律數(shù)據(jù)挖掘［J］.中醫(yī)雜志，2015，56（5）：376-380.

［21］HU Z G，SU H Z，ZENG Y L，et al.Tetramethylpyrazine ameliorates hepatic fibrosis through autophagy-mediated inflammation［J］.Biochimie et Biologie Cellulaire，2020，98（3）：327-337.

［22］ZHANG L L，WEI W.Anti-inflammatory and immunoregulatory effects of paeoniflorin and total glucosides of paeony［J］.Pharmacology amp; Therapeutics，2020，207：107452.

［23］YUAN R，SHI W L，XIN Q Q，et al.Tetramethylpyrazine and paeoniflorin inhibit oxidized LDL-induced angiogenesis in human umbilical vein endothelial cells via VEGF and Notch pathways［J］.Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine，2018，2018：3082507.

［24］SUN M Y，ZHANG M，CHEN S L，et al.The influence of hyperlipidemia on endothelial function of FPN1 Tek-cre mice and the intervention effect of tetramethylpyrazine［J］.Cellular Physiology and Biochemistry，2018，47（1）：119-128.

（收稿日期：2023-03-31）

（本文編輯薛妮）