摘要目的：探究漢黃芩素調(diào)節(jié)Hippo/Yes相關(guān)蛋白（YAP）信號(hào)通路對(duì)慢性心力衰竭（CHF）大鼠心肌纖維化的影響。方法：采用腹腔注射阿霉素的方式構(gòu)建大鼠CHF模型，成功造模36只大鼠，將其隨機(jī)分為模型組、漢黃芩素組（漢黃芩素100 mg/kg）、漢黃芩素＋維替泊芬組（100 mg/kg 漢黃芩素＋100 mg/kg 維替泊芬），每組12只。剩余12只大鼠作為對(duì)照組。采用彩色多普勒超聲系統(tǒng)檢測(cè)各組大鼠心功能參數(shù)：左室射血分?jǐn)?shù)（LVEF）、左室短軸縮短率（LVFS）、左室舒張末期內(nèi)徑（LVEDD）、左室收縮末期內(nèi)徑（LVESD）；稱重并計(jì)算各組大鼠心臟質(zhì)量指數(shù)（HMI）和左心室質(zhì)量指數(shù)（LVMI）；酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)心肌組織超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）水平；Masson染色法檢測(cè)大鼠心肌膠原容積分?jǐn)?shù)（CVF）和血管周圍纖維面積和血管管腔面積比值（PVCA/LA）；蘇木精-伊紅（HE）染色觀察大鼠心肌組織病理學(xué)變化；蛋白免疫印跡（Western Blot）法檢測(cè)大鼠心肌組織Hippo/YAP信號(hào)通路相關(guān)蛋白、基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）-2、MMP-9、結(jié)締組織生長因子（CTGF）表達(dá)。結(jié)果：與對(duì)照組相比，模型組大鼠LVEF、LVFS、心肌組織SOD水平及哺乳動(dòng)物ste-20樣激酶（MST）1/2、大型腫瘤抑制因子（LATS）1/2磷酸化水平明顯降低（P＜0.05），LVEDD、LVESD、HMI、LVMI、心肌組織MDA水平、CVF、PVCA/LA、心肌組織YAP、MMP-2、MMP-9、CTGF蛋白表達(dá)明顯升高（P＜0.05），心肌組織出現(xiàn)大量膠原纖維沉積和損傷。與模型組相比，漢黃芩素組LVEF、LVFS、心肌組織SOD水平、MST1/2、LATS1/2磷酸化水平明顯升高（P＜0.05），LVEDD、LVESD、HMI、LVMI、心肌組織MDA水平、CVF、PVCA/LA、心肌組織YAP、MMP-2、MMP-9、CTGF蛋白表達(dá)明顯降低（P＜0.05），心肌組織膠原纖維沉積和損傷減少。維替泊芬增強(qiáng)了漢黃芩素對(duì)CHF大鼠心肌纖維化的改善作用。結(jié)論：漢黃芩素可能通過激活Hippo/YAP信號(hào)通路、抑制YAP表達(dá)來減輕CHF大鼠心肌纖維化。

關(guān)鍵詞慢性心力衰竭；心肌纖維化；漢黃芩素；Hippo/YAP信號(hào)通路；實(shí)驗(yàn)研究

doi：10.12102/j.issn.1672-1349.2024.15.008

Effect of Wogonin on Myocardial Fibrosis in Rats with Chronic Heart Failure by Regulating Hippo/YAP Signaling Pathway

HUO Yujia， YANG Yuanzhou， ZOU Chengli， JIANG Zhongyong， LIU Quanwei

The Second People′s Hospital of Neijiang， Neijiang 641100， Sichuan， China

Corresponding AuthorLIU Quanwei， E-mail： dianyingc7@163.com

AbstractObjective：To explore the effect of Wogonin on myocardial fibrosis in rats with chronic heart failure（CHF） regulating Hippo/Yes associated protein（YAP） signaling pathway.Methods：The rat CHF model was established by intraperitoneal injection of adriamycin.Thirty-six rats were successfully modeling and randomly divided into model group，wogonin group（100 mg/kg baicalein） and wogonin ＋ vetipofen group（100 mg/kg baicalein ＋100 mg/kg vetipofen），with 12 rats in each group.The remained 12 rats served as the control group.Left ventricular ejection fraction（LVEF），left ventricular brachyaxis shortening rate（LVFS），left ventricular end-diastolic diameter（LVEDD） and left ventricular end-systolic diameter（LVESD） were measured by color Doppler ultrasound.Heart mass index（HMI） and left ventricular Mass index（LVMI） were detected.The levels of superoxide dismutase（SOD） and malondialdehyde（MDA） in myocardial tissue were detected by enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）.Masson staining was used to detect myocardial collagen volume fraction（CVF） and the ratio of perivascular fiber area to vascular lumen area（PVCA/LA）.Hematoxylin-eosin（HE） staining was used to observe the histopathological changes of rat myocardium.The expressions of Hippo/YAP signaling pathway related proteins，matrix metalloproteinase（MMP-2），MMP-9 and connective tissue growth factor（CTGF） were detected by Western Blot.Results：Compared with the control group，LVEF，LVFS，SOD in myocardial tissue and the phosphorylation levels of STE-20-like kinase（MST） 1/2 and large tumor suppressor factor（LATS）1/2 in the model group significantly decreased（P＜0.05），LVEDD，LVESD，HMI，LVMI，MDA，CVF，PVCA/LA，YAP，MMP-2，MMP-9，and CTGF protein expressions in myocardial tissue significantly increased（P＜0.05），and a large number of collagen fiber deposition and injury appeared in myocardial tissue.Compared with the model group，LVEF，LVFS，SOD，MST1/2 and LATS1/2 phosphorylation in myocardial tissue in the wogonin group significantly increased（P＜0.05），LVEDD，LVESD，HMI，LVMI，MDA，CVF，PVCA/LA，YAP，MMP-2，MMP-9，and CTGF protein expressions in myocardial tissue significantly decreased（P＜0.05），and collagen fiber deposition and injury in myocardial tissue decreased.Vitipofen enhanced the ameliorative effect of wogonin on myocardial fibrosis in CHF rats.Conclusion：Wogonin might reduce myocardial fibrosis in CHF rats by activating Hippo/YAP signaling pathway and inhibiting the expression of YAP.

Keywordschronic heart failure; myocardial fibrosis; Wogonin; Hippo/YAP signaling pathway; experimental study

慢性心力衰竭（chronic heart failure，CHF）是一種心室結(jié)構(gòu)和功能異常引起的心室射血功能減少的綜合征，主要由于冠心病、高血壓等心血管疾病進(jìn)展而誘發(fā)，是各種心血管疾病的終末階段［1-2］。CHF的臨床表現(xiàn)為心肌收縮功能和心排血量下降，機(jī)體組織血液供應(yīng)減少，病人自理能力降低，嚴(yán)重影響著病人的健康和生活質(zhì)量［3］。心肌纖維化（myocardial fibrosis，MF）是CHF的重要病理學(xué)基礎(chǔ)之一，是指心臟基質(zhì)內(nèi)膠原纖維大量聚集、膠原含量增加或膠原成分發(fā)生變化的現(xiàn)象，可導(dǎo)致CHF的發(fā)生發(fā)展和心功能的惡化［4-5］。因此，減輕CHF病人的心肌纖維化進(jìn)程，可能是治療CHF的有效方式之一。漢黃芩素（Wogonin）是從黃芩中提取出的一種重要的黃酮類化合物，研究發(fā)現(xiàn)漢黃芩素具有多種藥理活性，如抗炎、抗氧化、降血糖、抗腫瘤、心血管保護(hù)等作用［6-8］。Shi等［9］研究發(fā)現(xiàn)，漢黃芩素作為一種抗氧化劑可治療心肌肥厚。但漢黃芩素是否能減輕CHF病人的心肌纖維化還尚不清楚。Hippo/Yes相關(guān)蛋白（Yes-associated protein，YAP）信號(hào)通路是一個(gè)高度保守的絲氨酸激酶級(jí)聯(lián)通路，能夠調(diào)節(jié)癌細(xì)胞等的存活和生長［10］。YAP是其下游關(guān)鍵的效應(yīng)器和信號(hào)調(diào)節(jié)介質(zhì)，在細(xì)胞增殖、凋亡等過程中發(fā)揮重要作用［11］。近年來，研究發(fā)現(xiàn)Hippo/YAP信號(hào)通路在肝纖維化的發(fā)生發(fā)展和進(jìn)展期具有重要調(diào)節(jié)作用，但是否參與CHF病人心肌纖維化進(jìn)程尚未明確。本研究通過構(gòu)建大鼠CHF模型，觀察漢黃芩素對(duì)CHF大鼠心肌纖維化的影響，并分析其作用機(jī)制。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

48只無特定病原體（SPF）級(jí)SD大鼠，雄性，8～10周齡，體質(zhì)量180～220 g，購自湖南遠(yuǎn)泰生物技術(shù)有限公司，許可證號(hào)為SYXK（湘）2020-0004。所有大鼠飼養(yǎng)在溫度20～23 ℃、相對(duì)濕度45%～60%、12 h光/暗循環(huán)的通風(fēng)實(shí)驗(yàn)室中，標(biāo)準(zhǔn)大鼠顆粒飼料喂養(yǎng)，大鼠自由獲取食物和水，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后用于實(shí)驗(yàn)。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)內(nèi)江市第二人民醫(yī)院動(dòng)物倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)，實(shí)驗(yàn)操作符合《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理?xiàng)l例》相關(guān)要求和3R原則。

1.2主要試劑與儀器

漢黃芩素（純度≥98%）購自成都瑞芬思生物科技有限公司；YAP抑制劑維替泊芬（verteporfin）購自美國MedChemExpress公司；注射用鹽酸阿霉素購自浙江海正藥業(yè)股份有限公司；超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、丙二醛（malondial dehyde，MDA）酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）試劑盒購自武漢艾美捷科技有限公司；Masson染色試劑盒購自北京索萊寶科技有限公司；蘇木精-伊紅（HE）染色試劑盒購自上?？茀R生物技術(shù)有限公司；RIPA裂解液、二喹啉甲酸（BCA）蛋白定量試劑盒購自美國EMD Millipore公司；哺乳動(dòng)物ste-20樣激酶（mammalian sterile 20-like，MST）1/2、磷酸化MST1/2（p-MST1/2）、大型腫瘤抑制因子（large tumor suppressor，LATS）1/2、磷酸化LATS1/2（p-LATS1/2）、YAP、基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMP）-2、MMP-9、結(jié)締組織生長因子（connective tissue growth factor，CTGF）、甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）一抗和相應(yīng)二抗購自Abcam公司。小動(dòng)物彩色多普勒超聲影像系統(tǒng)（Vevo2100）購自加拿大Visualsonics公司。

1.3建立大鼠CHF模型

采用腹腔注射阿霉素的方式構(gòu)建大鼠CHF模型［12］。每只大鼠腹腔注射鹽酸阿霉素注射液，劑量為4 mg/kg，連續(xù)注射6周，每周注射1次。末次注射后采用戊巴比妥鈉麻醉大鼠，經(jīng)彩色多普勒超聲測(cè)定每只大鼠左室射血分?jǐn)?shù)（left ventricular ejection fraction，LVEF），當(dāng)LVEF≤60%時(shí)，說明大鼠CHF模型建立成功。

1.4動(dòng)物分組與給藥

本實(shí)驗(yàn)共成功造模36只大鼠，將其隨機(jī)分為模型組、漢黃芩素組（漢黃芩素100 mg/kg［13］）、漢黃芩素＋維替泊芬組（100 mg/kg 漢黃芩素＋100 mg/kg 維替泊芬［14］），每組12只。剩余12只大鼠作為對(duì)照組。造模成功后漢黃芩素組灌胃給藥漢黃芩素100 mg/kg，每日1次，共給藥4周；漢黃芩素＋維替泊芬組灌胃給藥漢黃芩素100 mg/kg，每日1次，腹腔注射維替泊芬100 mg/kg，隔天給藥，共給藥4周。對(duì)照組、模型組灌胃和腹腔注射等量生理鹽水。

1.5檢測(cè)指標(biāo)及方法

1.5.1心功能參數(shù)

末次給藥后，使用戊巴比妥鈉麻醉大鼠，仰臥固定，局部剃毛后涂抹超聲耦合劑，使用彩色多普勒超聲系統(tǒng)檢測(cè)大鼠心功能參數(shù)。包括LVEF、左室短軸縮短率（left ventricular shortening fraction，LVFS）、左室舒張末期內(nèi)徑（left ventricular end diastolic diameter，LVEDD）、左室收縮末期內(nèi)徑（left ventricular end systolic diameter，LVESD）。測(cè)定3個(gè)心動(dòng)周期取平均值。

1.5.2心臟質(zhì)量指數(shù)（heart mass index，HMI）和左心室質(zhì)量指數(shù)（left ventricular mass index，LVMI）

測(cè)定心功能參數(shù)后，脫頸處死所有大鼠。解剖取出心臟，采用4 ℃的生理鹽水清洗干凈心臟殘血，用濾紙吸干水分。稱重心臟和左心室的質(zhì)量，計(jì)算HMI和LVMI。HMI＝心臟質(zhì)量（mg）/體質(zhì)量（g）；LVMI＝左心室質(zhì)量（mg）/體質(zhì)量（g）。

1.5.3ELISA法檢測(cè)大鼠心肌組織SOD、MDA水平

稱重后的心臟，一半立即放入4%多聚甲醛中固定48 h，另一半置于－80 ℃凍存。取凍存的心肌組織制備組織勻漿。根據(jù)SOD、MDA ELISA試劑盒說明書，測(cè)定各組大鼠心肌組織SOD、MDA水平。

1.5.4Masson染色觀察大鼠心肌組織纖維化程度

取4%多聚甲醛固定的大鼠心肌組織，進(jìn)行乙醇脫水、常規(guī)的石蠟包埋，切片（5 μm），根據(jù)Masson染色試劑盒進(jìn)行Masson染色，在顯微鏡下進(jìn)行觀察，檢測(cè)大鼠心肌膠原容積分?jǐn)?shù)（collagen volume fraction，CVF）及血管周圍纖維面積和血管管腔面積比值（perivascular collagen area/lumen area，PVCA/LA）［15］。CVF＝心肌間質(zhì)膠原面積/心肌組織總面積（視野內(nèi)）×100%；PVCA/LA＝血管周圍纖維面積/血管管腔面積×100%。

1.5.5HE染色觀察大鼠心肌組織病理學(xué)變化

取4%多聚甲醛固定的大鼠心肌組織，進(jìn)行乙醇脫水、常規(guī)的石蠟包埋，切片（5 μm），進(jìn)行HE染色，光鏡下觀察大鼠心肌組織的病理學(xué)變化。

1.5.6蛋白免疫印跡（Western Blot）法檢測(cè)大鼠心肌組織Hippo/YAP信號(hào)通路相關(guān)蛋白、MMP-2、MMP-9、CTGF表達(dá)

取凍存的大鼠心肌組織，加入RIPA裂解液提取組織的總蛋白。根據(jù)BCA蛋白測(cè)定試劑盒測(cè)定總蛋白的濃度。經(jīng)十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）電泳分離蛋白質(zhì)，轉(zhuǎn)移到聚偏二氟乙烯（PVDF）膜上，在37 ℃下用5%脫脂奶粉封閉2 h，將膜與一抗MST1/2（1∶1 000）、p-MST1/2（1∶1 000）、LATS1/2（1∶1 000）、p-LATS1/2（1∶1 000）、YAP（1∶1 000）、MMP-2（1∶1 000）、MMP-9（1∶1 000）、CTGF（1∶1 000）、GAPDH（1∶1 000）于4 ℃下孵育過夜，之后加入相應(yīng)二抗（1∶3 000）室溫孵育2 h后，加入增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光試劑（enhanced chemiluminescence，ECL），觀察拍照，利用Image Lab軟件計(jì)算目標(biāo)蛋白的灰度值。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用Graph Pad Prism 9.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。符合正態(tài)分布的定量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1各組大鼠心功能參數(shù)比較

與對(duì)照組相比，模型組大鼠LVEF、LVFS明顯降低（P＜0.05），LVEDD、LVESD明顯升高（P＜0.05）。與模型組相比，漢黃芩素組、漢黃芩素＋維替泊芬組大鼠LVEF、LVFS明顯升高（P＜0.05），LVEDD、LVESD明顯降低（P＜0.05）；與漢黃芩素組相比，漢黃芩素＋維替泊芬組大鼠LVEF、LVFS明顯升高（P＜0.05），LVEDD、LVESD明顯降低（P＜0.05）。詳見表1。

2.2各組大鼠HMI、LVMI比較

與對(duì)照組相比，模型組大鼠HMI、LVMI明顯升高（P＜0.05）；與模型組相比，漢黃芩素組、漢黃芩素＋維替泊芬組大鼠HMI、LVMI明顯降低（P＜0.05）；與漢黃芩素組相比，漢黃芩素＋維替泊芬組大鼠HMI、LVMI明顯降低（P＜0.05）。詳見表2。

2.3各組大鼠心肌組織SOD、MDA水平比較

與對(duì)照組相比，模型組大鼠心肌組織SOD水平明顯降低（P＜0.05），MDA水平明顯上升（P＜0.05）；與模型組相比，漢黃芩素組、漢黃芩素＋維替泊芬組大鼠MDA水平明顯降低（P＜0.05），SOD水平明顯上升（P＜0.05）；與漢黃芩素組相比，漢黃芩素＋維替泊芬組大鼠MDA水平明顯降低（P＜0.05），SOD水平明顯上升（P＜0.05）。詳見表3。

2.4各組大鼠CVF和PVCA/LA比較

Masson染色觀察大鼠心肌組織的膠原纖維沉積，對(duì)照組大鼠心肌組織未見明顯的膠原纖維沉積，模型組大鼠心肌細(xì)胞和血管周圍可見有大量的被染成藍(lán)色的膠原纖維。與模型組相比，漢黃芩素組大鼠心肌組織中可見少量的膠原纖維沉積。與漢黃芩素組相比，漢黃芩素＋維替泊芬組大鼠心肌細(xì)胞和血管周圍的膠原纖維減少。詳見圖1。

與對(duì)照組相比，模型組大鼠心肌組織CVF、PVCA/LA明顯升高（P＜0.05）；與模型組相比，漢黃芩素組、漢黃芩素＋維替泊芬組大鼠心肌組織CVF、PVCA/LA明顯降低（P＜0.05）；與漢黃芩素組相比，漢黃芩素＋維替泊芬組心肌組織CVF、PVCA/LA明顯降低（P＜0.05）。詳見表4。

2.5漢黃芩素對(duì)大鼠心肌組織病理學(xué)的影響

對(duì)照組大鼠心肌組織細(xì)胞排列整齊、結(jié)構(gòu)正常完整，橫紋正常；模型組大鼠心肌細(xì)胞排列紊亂，出現(xiàn)腫脹、心肌橫紋消失溶解，胞漿空泡樣變，心肌組織纖維化明顯，有明顯炎性細(xì)胞浸潤；與模型組相比，漢黃芩素組個(gè)別心肌細(xì)胞出現(xiàn)腫脹，心肌纖維排列較整齊，心肌纖維化減輕，炎性細(xì)胞浸潤減輕；與漢黃芩素組相比，漢黃芩素＋維替泊芬組心肌組織結(jié)構(gòu)清楚、排列整齊，炎性細(xì)胞浸潤和心肌纖維化減輕。詳見圖2。

2.6各組大鼠心肌組織Hippo/YAP信號(hào)通路相關(guān)蛋白、MMP-2、MMP-9、CTGF表達(dá)比較

與對(duì)照組相比，模型組大鼠心肌組織p-MST1/2/MST1/2、p-LATS1/2/LATS1/2明顯降低（P＜0.05），YAP、MMP-2、MMP-9、CTGF蛋白表達(dá)明顯升高（P＜0.05）。與模型組相比，漢黃芩素組、漢黃芩素＋維替泊芬組大鼠心肌組織p-MST1/2/MST1/2、p-LATS1/2/LATS1/2明顯升高（P＜0.05），YAP、MMP-2、MMP-9、CTGF蛋白表達(dá)明顯降低（P＜0.05）。與漢黃芩素組相比，漢黃芩素＋維替泊芬組大鼠心肌組織p-MST1/2/MST1/2、p-LATS1/2/LATS1/2差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），YAP、MMP-2、MMP-9、CTGF蛋白表達(dá)明顯降低（P＜0.05）。詳見表5、圖3。

3討論

CHF是導(dǎo)致心血管疾病病人死亡的主要原因之一，主要的病理特征為心肌纖維化、心肌細(xì)胞肥大、心肌細(xì)胞凋亡等，其中心肌纖維化是CHF病人心室重構(gòu)的重要組成［16］。當(dāng)病人發(fā)生心肌纖維化時(shí)，心肌組織間質(zhì)的膠原纖維合成增加，降解減少，進(jìn)而促進(jìn)膠原大量合成和分泌，使CVF明顯增加且排列紊亂，過量的心肌膠原沉積，導(dǎo)致心室順應(yīng)性降低或充盈異常，心肌的舒張和收縮功能出現(xiàn)障礙［17］。LVEF、LVESD和LVEDD常用于評(píng)價(jià)心肌局部或整體的收縮功能。SOD是抗氧化酶，可以清除機(jī)體自由基，當(dāng)發(fā)生CHF時(shí)，氧化應(yīng)激反應(yīng)增強(qiáng)，SOD含量可以間接反映心肌纖維化的發(fā)生［4］。研究發(fā)現(xiàn)，MMP是反映心肌纖維化的重要標(biāo)志物，當(dāng)MMP表達(dá)增加后，可能引起細(xì)胞外基質(zhì)中膠原蛋白的過度降解，加重心肌纖維化［18］。CTGF具有絲裂原性和趨化性，能夠誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞的增殖，在心肌纖維化的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用，其表達(dá)一定程度反映心肌纖維化的進(jìn)展。本研究通過連續(xù)腹腔注射阿霉素建立大鼠CHF模型，結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，模型組大鼠LVEF、LVFS、心肌組織SOD水平明顯降低，LVEDD、LVESD、HMI、LVMI、心肌組織MDA水平及CVF、PVCA/LA、MMP-2、MMP-9、CTGF蛋白表達(dá)明顯升高，心肌組織出現(xiàn)大量膠原纖維沉積，心肌細(xì)胞排列紊亂，出現(xiàn)腫脹、心肌橫紋消失溶解，胞漿空泡樣變，有明顯炎性細(xì)胞浸潤。說明大鼠CHF模型建立成功。

漢黃芩素是從中藥黃芩中提取的黃酮類化合物，目前已有研究證實(shí)漢黃芩素能夠干預(yù)各種心血管疾病和細(xì)胞纖維化等。李曼等［19］研究發(fā)現(xiàn)，漢黃芩素能夠抑制類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的成纖維樣滑膜細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，下調(diào)炎性因子白細(xì)胞介素-6（IL-6）等。瞿晶田等［20］研究發(fā)現(xiàn)，漢黃芩素可能通過促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)皮型一氧化氮合酶（eNOS）蛋白表達(dá)和一氧化氮（NO）的產(chǎn)生，增強(qiáng)乙酰膽堿對(duì)血管的舒張作用。Wei等［21］研究發(fā)現(xiàn)，漢黃芩素可以通過線粒體釋放細(xì)胞色素C，減少心肌細(xì)胞凋亡，減輕阿霉素誘導(dǎo)的心臟毒性。本研究結(jié)果顯示，與模型組相比，漢黃芩素組LVEF、LVFS、心肌組織SOD水平明顯升高，LVEDD、LVESD、HMI、LVMI、心肌組織MDA水平及CVF、PVCA/LA、MMP-2、MMP-9、CTGF蛋白表達(dá)明顯降低，個(gè)別心肌細(xì)胞出現(xiàn)腫脹，心肌纖維排列較整齊，心肌纖維化減輕，炎性細(xì)胞浸潤減輕。說明漢黃芩素可以減輕CHF大鼠的心肌纖維化。

Hippo/YAP信號(hào)通路主要參與細(xì)胞的增殖、分化和遷移，當(dāng)心臟處于應(yīng)激狀態(tài)，該通路被激活，從而磷酸化MST1，磷酸化的MST1可以磷酸化下游激酶LATS1/2，最后使下游轉(zhuǎn)錄激活因子YAP磷酸化，磷酸化后的YAP滯留在細(xì)胞質(zhì)中，抑制了YAP的轉(zhuǎn)錄活性［21］。研究發(fā)現(xiàn)，Hippo信號(hào)通路的抑制與核心因子YAP的異常激活會(huì)導(dǎo)致炎癥、纖維化、癌癥、心血管疾病等［22-24］。Mia等［25］研究發(fā)現(xiàn)，YAP的異常激活增強(qiáng)了心肌梗死誘導(dǎo)的心臟纖維化和心室重建。本研究結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，模型組大鼠心肌組織p-MST1/2/MST1/2、p-LATS1/2/LATS1/2明顯降低，YAP蛋白表達(dá)明顯升高；與模型組相比，漢黃芩素組大鼠心肌組織p-MST1/2/MST1/2、p-LATS1/2/LATS1/2明顯升高，YAP蛋白表達(dá)明顯降低。說明漢黃芩素可能通過激活Hippo/YAP信號(hào)通路，抑制YAP表達(dá)來減輕CHF大鼠心肌纖維化。為了驗(yàn)證此作用，本研究用YAP抑制劑維替泊芬來干預(yù)漢黃芩素組大鼠，結(jié)果發(fā)現(xiàn)維替泊芬增強(qiáng)了漢黃芩素對(duì)CHF大鼠心肌纖維化的改善作用。

綜上所述，漢黃芩素可能通過激活Hippo/YAP信號(hào)通路，抑制YAP表達(dá)來減輕CHF大鼠心肌纖維化。本研究為改善CHF病人的心肌纖維化提供了新的治療靶點(diǎn)，進(jìn)一步豐富了對(duì)心肌纖維化分子機(jī)制的認(rèn)識(shí)。然而漢黃芩素減輕CHF大鼠的心肌纖維化的具體分子機(jī)制還需進(jìn)一步研究。

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（收稿日期：2023-02-06）

（本文編輯郭懷?。?/p>