胡桂霞

三聚氰胺又稱為蛋白精，穩(wěn)定性好，常被用作化工原料、涂料和粘合劑，有些不法分子為了提高蛋白質(zhì)的含量會(huì)將其加入奶粉中，但人體若攝入過多會(huì)引起肝臟、腎臟等損傷。自2008年發(fā)生的“三聚氰胺毒奶粉”事件以來，三聚氰胺已成為乳與乳制品企業(yè)和市場監(jiān)管部門的重要監(jiān)控項(xiàng)目。

現(xiàn)行有效的國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 22388-2008《原料乳和乳制品中三聚氰胺檢測方法》第一法采用傳統(tǒng)的手動(dòng)固相萃取法對樣品提取純化后，利用高效液相色譜儀檢測三聚氰胺含量，存在對實(shí)驗(yàn)人員技術(shù)要求高、重復(fù)性差、實(shí)驗(yàn)時(shí)間長等缺點(diǎn)。隨著國產(chǎn)全自動(dòng)固相萃取儀的水平越來越高，將其應(yīng)用于三聚氰胺的檢測中，不僅能降低檢測人員的勞動(dòng)強(qiáng)度，提高實(shí)驗(yàn)效率，還可以有效保證結(jié)果的可靠性及重現(xiàn)性。本文旨在結(jié)合國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 22388-2008第一法，進(jìn)行國產(chǎn)全自動(dòng)固相萃取儀在測定乳與乳制品中三聚氰胺含量中的應(yīng)用研究，為國產(chǎn)科學(xué)儀器的應(yīng)用推廣提供數(shù)據(jù)支撐。

1. 儀器與材料

1.1 儀器。1260型高效液相色譜儀，安捷倫；Fotector plus高通量全自動(dòng)固相萃取儀，?？疲?810R高速離心機(jī)，Eppendorf； Waters Oasis MCX混合型陽離子交換固相萃取柱（60mg/3mL）；SECURA 224-1CN電子天平，賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司。

1.2 材料。甲醇、乙腈，均為色譜純；冰乙酸、氨水、檸檬酸、辛烷磺酸鈉、三氯乙酸，均為分析純；試驗(yàn)用水為Mili-Q型超純水機(jī)制取的超純水（電阻率為18.2MΩ·cm）。三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品來源為Dr.Ehrenstorfer GmbH（純度為99.44%，貨號DRE-C14861400、批號G976694）。樣品1為光明優(yōu)加純牛奶；樣品2為紐貝滋嬰幼兒奶粉；樣品3為大白兔奶糖。

2. 實(shí)驗(yàn)與方法

2.1 色譜條件。Waters XBridge C18 色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）；柱溫40℃；檢測波長240nm；進(jìn)樣量20μL；流量1.0mL/min。流動(dòng)相為離子對試劑緩沖液-乙腈（90+10，體積比）。離子對試劑緩沖液配制：準(zhǔn)確稱取檸檬酸2.10g和辛烷磺酸鈉2.16g于1L容量瓶中，加水980mL溶解后，用氨水調(diào)節(jié)pH為3.0，用水定容至刻度。

2.2 樣品前處理。稱取2g（精確至0.01g）試樣于50mL具塞塑料離心管中，加入15mL三氯乙酸溶液和5mL乙睛，超聲提取10min，再振蕩提取10min，以不低于4000r/min離心10min。上清液經(jīng)三氯乙酸溶液潤濕的濾紙過濾后，用三氯乙酸溶液定容至25.00mL，移取5mL濾液，加入5mL水混勻后待凈化。將待凈化液按照程序（表1）進(jìn)行全自動(dòng)固相萃取凈化。凈化液于50℃下用氮?dú)獯蹈?，殘留物?.00mL流動(dòng)相溶解，渦旋混合1min，過0.22μm微孔濾膜后，供高效液相測定。

3. 結(jié)果與分析

3.1 柱效評價(jià)、靈敏度和凈化圖譜。全自動(dòng)固相萃取法的柱效為92.3%，測定低限水平的樣品1三聚氰胺陽性樣的信噪比S/N 70.7＞10，柱效和方法靈敏度均滿足分析要求。在波長240nm下，本法與手動(dòng)固相萃取法凈化后三聚氰胺目標(biāo)峰峰形良好，與標(biāo)準(zhǔn)品圖譜基本一致，目標(biāo)物保留時(shí)間處無雜峰干擾，除雜效果較好。

3.2 準(zhǔn)確度和精密度。GB/T 22388-2008規(guī)定的測定低限為2mg/kg，分別制備6份測定低限、2倍測定低限、10倍測定低限水平的樣品1三聚氰胺陽性樣。3水平6平行陽性樣的三聚氰胺測得準(zhǔn)確度平均值為85.6%-97.0%，RSD為0.9%-3.0%（表2），均達(dá)到國標(biāo)GB/T 22388-2008規(guī)定“在添加濃度2mg/kg-10mg/kg濃度范圍內(nèi)，回收率在80%-110%之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于10%”的要求，達(dá)到分析要求。

3.3 儀器重復(fù)性。對2倍測定低限水平的樣品1三聚氰胺陽性樣，分別間隔0h、2h、4h、8h、24h和48h進(jìn)行6平行全自動(dòng)固相萃取，測得準(zhǔn)確度平均值分別為91.5%、89.6%、90.2%、90.1%、92.9%、93.0%，6個(gè)時(shí)間內(nèi)測得準(zhǔn)確度的RSD為1.6%，說明該方法重復(fù)性良好，滿足分析要求。

3.4 基質(zhì)耐受性。分別對2倍測定低限水平的樣品1、樣品2和樣品3三聚氰胺陽性樣，進(jìn)行6平行萃取凈化，準(zhǔn)確度平均值分別為90.8%、89.7%、92.0%，RSD分別為2.0%、2.2%、1.0%，說明該方法的基質(zhì)耐受性良好，滿足分析要求。

3.5 T檢驗(yàn)法結(jié)果對比。對樣品2三聚氰胺陽性樣，分別按本法（方法1）和手動(dòng)固相萃取法（方法2）進(jìn)行前處理，根據(jù)測得三聚氰胺含量的準(zhǔn)確度進(jìn)行比較，結(jié)果見表3。經(jīng)F檢驗(yàn)兩組數(shù)據(jù)的方差齊性，方法1和方法2的準(zhǔn)確度標(biāo)準(zhǔn)偏差S分別為2.01%和2.18%，F(xiàn)=S大2/S小2=1.18，F(xiàn)表=5.05，可知F＜F0.05，（5，5），表明兩組數(shù)據(jù)方差齊性。采用T檢驗(yàn)進(jìn)行比較，t=1.4，t＜t0.05，10（t表=2.23），說明兩種方法無顯著性差異。

4.結(jié)論與討論

本試驗(yàn)從柱效、靈敏度、凈化后圖譜、準(zhǔn)確度、精密度、重復(fù)性、基質(zhì)耐受性等方面與傳統(tǒng)方法進(jìn)行比較，結(jié)果表明，國產(chǎn)全自動(dòng)固相萃取儀的自動(dòng)化程度高、萃取效率好、凈化除雜效果好，靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度均滿足分析要求。與傳統(tǒng)手動(dòng)固相萃取法相比，對乳與乳制品中三聚氰胺的提取效果無顯著性差異，滿足國標(biāo)GB/T 22388-2008要求。在保證檢測結(jié)果準(zhǔn)確、可靠和可重復(fù)的基礎(chǔ)上，該國產(chǎn)全自動(dòng)固相萃取儀能降低實(shí)驗(yàn)人員勞動(dòng)強(qiáng)度，提高整體工作效率，適用于乳與乳制品中三聚氰胺含量的日常檢測工作。