【摘要】目的 探討乙酸脫氧酶2（ALDH2）基因G487A位點的單核苷酸多態(tài)性與腦梗死的相關(guān)性，為臨床提供參考。方法 選取2021年10月至2023年5月于?？谑腥嗣襻t(yī)院確診的150例腦梗死患者作為腦梗死組，選取同期在?？谑腥嗣襻t(yī)院進行體檢的150例健康者作為非腦梗死組進行回顧性分析。比較兩組研究對象的臨床資料、基因型和等位基因型頻率。結(jié)果 腦梗死組研究對象有吸煙史、飲酒史、糖尿病史、高血壓史占比，收縮壓（SBP）、舒張壓（DBP）、三酰甘油（TG）、總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）和葡萄糖（GLU）水平均高于非腦梗死組，高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、載脂蛋白Ⅰ（ApoAⅠ）水平均低非腦梗死組（均Plt;0.05）。腦梗死組研究對象A等位基因攜帶者（GA+AA基因型）占比、A等位基因頻率均高于非腦梗死組（均Plt;0.05）。多因素Logistic回歸分析結(jié)果顯示，ALDH2基因編碼區(qū)G487A的A等位基因攜帶是腦梗死發(fā)病的獨立危險因素（Plt;0.05）。結(jié)論 ALDH2基因G487A位點的多態(tài)性可能是影響腦梗死的危險因素，臨床應(yīng)注意篩查。

【關(guān)鍵詞】乙酸脫氧酶2；G487A；單核苷酸多態(tài)性；腦梗死

【中圖分類號】R743.9 【文獻標(biāo)識碼】A 【文章編號】2096-2665.2024.06.0010.03

DOI：10.3969/j.issn.2096-2665.2024.06.004

腦梗死是由于腦部血液無法及時供應(yīng)導(dǎo)致腦部發(fā)生不可逆性的損傷，進而引發(fā)腦部組織缺血缺氧性壞死，嚴(yán)重?fù)p害患者的腦功能[1-2]。乙酸脫氧酶2（ALDH2）普遍存在于腦、心臟和肝臟等部位。ALDH2基因變異與腦梗死的風(fēng)險增加有關(guān)，ALDH2基因包括12個內(nèi)含子與13個外顯子。機體ALDH2基因中第12個外顯子1 510位具有堿基鳥嘌呤（G）代替腺嘌呤（A）的多態(tài)性，進而賴氨酸可代替氨基酸序列第487位上的谷氨酸，從而降低ALDH2酶的活性，甚至使其喪失酶活性；同時，減少了乙醛的代謝和清除，可能引發(fā)氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)，與腦梗死的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)[3]。故本研究探討ALDH2基因G487A位點的單核苷酸多態(tài)性與腦梗死的相關(guān)性研究，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2021年10月至2023年5月于?？谑腥嗣襻t(yī)院確診的150例腦梗死患者作為腦梗死組，選取同期在海口市人民醫(yī)院進行體檢的150例健康者作為非腦梗死組進行回顧性分析。本研究經(jīng)海口市人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。腦梗死組患者納入標(biāo)準(zhǔn)：⑴符合《中國各類主要腦血管病診斷要點2019》[4]中腦梗死的診斷標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)頭顱MRI確診；⑵存在局灶性神經(jīng)功能缺損；⑶年齡54～76歲。非腦梗死組研究對象納入標(biāo)準(zhǔn)：⑴經(jīng)體檢明確無動脈狹窄；⑵年齡54～72歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴合并精神異常者；⑵合并惡性腫瘤者。

1.2 研究方法 ⑴采用動態(tài)血壓測量儀（深圳樂普智能醫(yī)療器械有限公司，粵械注準(zhǔn)20202071530，型號：LABP100U）測量研究對象清晨收縮壓（SBP）、舒張壓（DBP），測量3次，最后取平均值。采集研究對象清晨空腹外周靜脈血4 mL，分裝于2 mL離心管中，冷藏于-80 ℃的冰箱中。采用離心機以3 000 r/min轉(zhuǎn)速離心15 min（離心半徑為10 cm）。采用全自動生化分析儀（深圳海路生物技術(shù)有限公司，粵械注準(zhǔn)20192220978，型號：FB-460）測定三酰甘油（TG）、總膽固醇（TC）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、載脂蛋白（Apo）A Ⅰ、ApoB100和葡萄糖（GLU）水平。⑵ ALDH2基因型測定。采集患者的靜脈血3 mL，采用枸椽酸鈉進行抗凝，白細(xì)胞由Ficoll淋巴細(xì)胞分離，DNA由基因組DNA提取試劑盒[天根生化科技（北京）有限公司，規(guī)格：50次/盒]進行提取。目的DNA片斷擴增引物：上游引物5′-GTCAACTGCTATGATGTGTTTGG-3′，下游引5′-CCACCAGCAGACCCTCAAG-3′。雙蒸水補充至50 μL，引物各2 μL，2×Master Mix 25 μL，模板DNA 2 μg，反應(yīng)體系50 μL。反應(yīng)條件：94 ℃預(yù)變性3 min之后開始循環(huán)：94 ℃變性45 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸45 s，共35個循環(huán)，最后72 ℃延伸5 min，4 ℃保存。PCR擴增產(chǎn)物是200 bp。擴增產(chǎn)物在2%瓊脂糖凝膠內(nèi)電泳，用溴乙啶染色，凝膠成像系統(tǒng)下由紫外線觀察、分析電泳結(jié)果。切下目標(biāo)條帶，PCR產(chǎn)物由瓊脂糖凝膠回收試劑盒（北京索萊寶科技有限公司）純化，濟南博亞生物技術(shù)有限公司提供目的基因片段測序。

1.3 觀察指標(biāo) ⑴比較兩組研究對象的臨床資料。資料包括年齡、性別、血壓、吸煙史、飲酒史、糖尿病史、高血壓史、血脂指標(biāo)等。⑵比較兩組研究對象基因型/等位基因頻數(shù)。等位基因頻率=（2×純合子+雜合子）/（2×受檢人數(shù)）。⑶分析影響腦梗死發(fā)生的獨立危險因素。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS 22.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)分析。組間基因型頻率與等位基因由χ2進行檢驗。計數(shù)資料以[例（%）]表示，采用χ2檢驗；計量資料以（x）表示，采用t檢驗；多因素分析采用Logistic回歸分析。以Plt;0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組研究對象臨床資料比較 兩組研究對象年齡、性別構(gòu)成比和ApoB100水平比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均Pgt;0.05）；腦梗死組研究對象有吸煙史、飲酒史、糖尿病史、高血壓史占比，SBP、DBP、TG、TC、LDL-C和GLU水平均高于非腦梗死組，HDL-C、ApoAⅠ水平均低非腦梗死組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均Plt;0.05），見表1。

2.2 兩組研究對象基因型/等位基因頻數(shù)比較 ALDH2基因型G487A位點有GG、GA和AA 3種基因型，G、A兩種等位基因。腦梗死組研究對象A等位基因攜帶者（GA+AA基因型）、A等位基因頻率均高于非腦梗死組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均Plt;0.05），見表2。

2.3 影響腦梗死發(fā)生的多因素Logistic分析 以是否發(fā)生腦梗死為因變量，可能影響腦梗死發(fā)生的因素為自變量進行賦值后納入多因素Logistic回歸分析。結(jié)果顯示，ALDH2基因編碼區(qū)G487A的A等位基因攜帶者是腦梗死發(fā)病的獨立危險因素，見表3、表4。

3 討論

腦梗死多發(fā)于中老年群體，起病往往較為急驟，且患者常伴有高血脂、糖尿病和高血壓等基礎(chǔ)疾病，若未得到及時、有效的治療，易損傷患者的腦功能[5]。隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展與完善，有研究發(fā)現(xiàn)生化指標(biāo)、血液流變學(xué)和酶活性與腦梗死的發(fā)生、發(fā)展息息相關(guān)[6]。ALDH2酶作為醛氧化的主要酶之一，其基因的多態(tài)性會影響組織的結(jié)構(gòu)與表達(dá)水平。G487A位點的多態(tài)性會導(dǎo)致ALDH2酶的活性降低或喪失。有研究顯示，攜帶G487A位點特定變異的人群在飲酒后更容易出現(xiàn)乙醛積累，而乙醛是一種具有血管毒性的物質(zhì)，長期積累可能增加動脈粥樣硬化的風(fēng)險，進而增加腦梗死的發(fā)病率[7-8]。

本研究結(jié)果顯示，腦梗死組研究對象有吸煙史、飲酒史、糖尿病史、高血壓史占比，SBP、DBP、TG、TC、LDL-C和GLU水平均高于非腦梗死組，HDL-C、ApoAⅠ水平均低非腦梗死組。腦梗死組研究對象A等位基因攜帶者（GA+AA基因型）、A等位基因頻率高于非腦梗死組。多因素Logistic回歸分析結(jié)果顯示，ALDH2基因編碼區(qū)G487A的A等位基因攜帶是腦梗死發(fā)病的獨立危險因素，提示ALDH2基因G487A位點的多態(tài)性是影響腦梗死的危險因素。分析原因，ALDH2基因的第12個外顯子1 510位存在著堿基A被G替換的多態(tài)性，導(dǎo)致氨基酸序列第487位上的谷氨酸被賴氨酸所替換，這一突變使得ALDH2酶的活性下降甚至完全喪失，其活性的高低是由ALDH2基因多態(tài)性決定的。ALDH2基因突變型腔隙性腦梗死患者的腦損傷程度可能更為嚴(yán)重，其機制可能是突變型腦梗死發(fā)病過程中一氧化氮產(chǎn)生不足，從而導(dǎo)致了嚴(yán)重的腦血管損傷癥狀[9-10]。ALDH2基因中攜帶GG基因型、G等位基因會降低腦梗死的發(fā)病風(fēng)險，而攜帶GA基因型、A等位基因會增加腦梗死的發(fā)病風(fēng)險[11-12]。

綜上所述，ALDH2基因G487A位點的多態(tài)性可能是影響腦梗死的危險因素，臨床應(yīng)加以重視。

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