王 瑤 陳國江 馮健男 石艷春** 王 晶** 鄭源強**

（1）內(nèi)蒙古醫(yī)科大學，內(nèi)蒙古自治區(qū)分子生物學重點實驗室，呼和浩特 010058；2）軍事科學院軍事醫(yī)學研究院毒物藥物研究所，抗毒藥物與毒理學國家重點實驗室，北京 100850）

Polθ（DNA polymerase theta），又被稱為DNA聚合酶θ，是DNA 聚合酶 A 家族成員之一，參與DNA 雙鏈斷裂（DNA double-strand breaks，DSB）修復過程［1-4］。Polθ 具有獨特的結(jié)構(gòu)，是目前已知真核生物中發(fā)現(xiàn)的唯一含有解旋酶活性的聚合酶，同時也是一種易出錯的聚合酶。機體內(nèi)DSB 發(fā)生后常見有4種修復途徑（圖1），即經(jīng)典非同源末端連接 （classical-non homologous end joining，C-NHEJ）、同源重組（homologous recombination，HR）、單鏈退火（single-strand annealing，SSA）和選擇性末端連接（alternative-end joining，Alt-EJ）。當主要的DNA 修復通路缺陷時（如HR 通路），細胞會依賴Polθ 介導的Alt-EJ 通路來修復損傷的DNA，以維持基因組穩(wěn)定性［5］。然而，由于Polθ 具有低保真性的特點，Alt-EJ 修復常常會出錯。此外，癌癥中?？梢娺^度表達的Polθ，抑制Polθ 與各種DNA 修復基因的聯(lián)合缺失會導致合成致死（synthetic lethality，SL），包括已知的癌癥驅(qū)動因子（如BRCA1/2）［6］。近年來，小分子靶向化療藥成為抑制腫瘤生長的熱點，但是脫靶效應(yīng)和耐藥性成為困擾其臨床應(yīng)用的主要問題，尤其是對聚ADP 核糖聚合酶抑制劑（poly-ADP-ribose polymerase inhibitor，PARPi）的耐藥性。研究發(fā)現(xiàn)，在HR 缺陷腫瘤細胞中阻斷Polθ 活性可逆轉(zhuǎn)PARPi耐藥，這使Polθ在癌癥治療中成為一個非常有前途的治療靶點［7］。目前，已經(jīng)報道了多種Polθ抑制劑，如新生霉素（Novobiocin，NVB）［7］、ART558［8］和RP-6685［9］等。這些抑制劑的研制為治愈BRCA1/2突變的腫瘤提供了新的方向。此外，通過減少Polθ介導的Alt-EJ修復途徑還有助于提高HR 修復效率，增加外源基因靶向整合（target integration，TⅠ）幾率，使Polθ 抑制劑又具有新的潛在應(yīng)用價值。本文綜述近幾年關(guān)于Polθ 分子功能及其參與Alt-EJ通路修飾機制的研究進展，為深入了解該領(lǐng)域提供思路。

1 Polθ的結(jié)構(gòu)特征及功能

Polθ 由POLQ基因編碼，由2 590 個氨基酸組成，分子質(zhì)量為290 ku，主要參與Alt-EJ 途徑對DSB進行修復。POLQ基因在包括植物和原生生物在內(nèi)的多細胞真核生物中廣泛存在。然而，在包括酵母在內(nèi)的真菌中，并沒有發(fā)現(xiàn)POLQ類似基因［10］。Polθ 結(jié)構(gòu)獨特，是哺乳動物細胞中唯一包含解旋酶功能的DNA 聚合酶。該分子主要包含3個結(jié)構(gòu)域（圖2）：氮（N）端含保守序列的解旋酶樣結(jié)構(gòu)域（helicase-like domain）、碳（C） 端的DNA 聚合酶結(jié)構(gòu)域（polymerase domain）以及連接這兩個區(qū)域的一段無序序列的中心區(qū)域（central domain）［10］。

N端是超家族2解旋酶樣結(jié)構(gòu)域（superfamily 2 helicase domain，Polθ-Hel），具有DNA依賴的ATP酶活性，其在復制進化過程中基本保持不變。Polθ-Hel通過取代復制蛋白A（reputation protein A，RPA）來阻止HR 修復。Polθ-Hel 可以在長單鏈DNA （single-stranded DNA， ssDNA） 上促進Alt-EJ［11］。

C 端是DNA 聚合酶A 家族結(jié)構(gòu)域（family-A polymerase domain，Polθ-Pol），包括3 個插入氨基酸環(huán)，促使短單鏈DNA 引物的相互作用、退火和延伸［12-13］。在Alt-EJ 中，Polθ-Pol 可以作為末端轉(zhuǎn)移酶或催化經(jīng)過熱處理的序列的模板延伸。除了雙鏈斷裂修復外，該聚合酶還可以作為5'-dRP裂解酶在堿基切除修復（base excision repair，BER）中發(fā)揮作用，并對紫外線損傷進行跨損傷合成（translesion synthesis，TLS）。Alt-EJ 在連接退火的DSB末端之前，利用Polθ-Pol填充DNA間隙。

中心區(qū)域由一個外顯子跨越了整個非結(jié)構(gòu)化的中心氨基酸序列［14］組成，雖然在大小和跨物種序列方面保守性較差，但可將Polθ-Hel 和Polθ-Pol 連接在一起，其中包含與RAD51 結(jié)合模塊。另外，該中心區(qū)域?qū)Φ孜镞x擇至關(guān)重要，它能自動抑制短ssDNA上的Polθ的活性。

Fig. 2 The structure of Polθ圖2 Polθ結(jié)構(gòu)示意圖

2 Polθ與DSB修復通路

DSB 是由拓撲異構(gòu)酶抑制劑、電離輻射、紫外線照射、停滯的DNA 復制分叉以及CRⅠSPR/Cas9 等誘導，可造成DNA 復制或轉(zhuǎn)錄停滯，進而引發(fā)基因重排、細胞壞死甚至細胞減數(shù)分裂過程中斷和促進癌癥發(fā)生發(fā)展等。現(xiàn)階段發(fā)現(xiàn)，DSB 斷裂之后有4 種主要修復途徑（圖1），即C-NHEJ、HR、SSA和Alt-EJ。大多數(shù)DSB是由C-NHEJ介導修復的，可以發(fā)生在整個細胞周期中，通過在斷裂位點引入小DNA 片段的插入和刪除以及染色體易位來直接連接DNA 末端［15］。在S 和G2 期，HR 使用姐妹染色單體或同源染色體作為模板進行DNA合成，是目前已知唯一精確的DSB 修復途徑［16］。SSA 是DSB 修復的第三種途徑，消除了重復序列之間的DNA 片段［17］，通常導致大量的缺失和DNA重排，對基因組完整性有害。當主要的DNA修復通路缺失時，細胞會依賴替代通路，即Alt-EJ， 也稱微同源性介導的末端連接（microhomology-mediated end-joining，MMEJ） 和聚合酶介導的末端連接（theta-mediated end joining，TMEJ）［5］。這種修復途徑具有內(nèi)在的誘變性，斷裂位點通常因插入和刪除而受損。DSB 修復通路中，4 種通路都至關(guān)重要，除HR 介導靶向整合外，其他通路都介導隨機修復。

2.1 Polθ介導選擇性末端連接（Alt-EJ） 修復通路

Alt-EJ 包括許多由5'-3'的切除因子，如PARP1［18］、 Polθ［19］、 CtBP 相互作用蛋白（carboxy-terminal binding protein，CtⅠP）［20］，MRN復合體（MRE11-RAD50-NBS1，MRN）［21］，DNA連接酶1（DNA ligase Ⅰ，LⅠG1）和DNA 連接酶3（DNA ligase Ⅲ，LⅠG3）［22］等。Polθ 在Alt-EJ 通路中起著核心作用［23］，可以延長3'單鏈和雙鏈DNA的―OH末端，跨越脫嘌呤嘧啶位點或以不依賴模板的方式錯配。Alt-EJ 通路中（圖1），首先由PARP1募集到DSB處并激活MRN/CtⅠP復合物［24］，以暴露斷裂位點的微同源序列［25-28］。MRN/CtⅠP 處理DNA末端產(chǎn)生3' DNA懸垂，Polθ結(jié)合由DSB的5'-3'重剪切生成的長單鏈DNA（ssDNA）懸臂，并通過與具有2~6個堿基對的微同源序列退火，將它們用作DNA 合成的引物［29-30］，促使修復過程初始階段形成的中間DNA 結(jié)構(gòu)穩(wěn)定。經(jīng)過內(nèi)切酶等其他酶對過渡結(jié)構(gòu)的處理后，最后由LⅠG3或LⅠG1來促進最終DNA間隙的融合［31］。其中，PARP1依賴的Polθ 向DSB 位點的募集是這一途徑的關(guān)鍵步驟［6，19］。

2.2 Polθ參與DSB修復以外的修復途徑

Polθ 除了在DSB 修復途徑中發(fā)揮作用，還參與 BER、 DNA 鏈間交聯(lián) （DNA interstrand crosslinks，ⅠCLs）修復、TLS等過程，并且可能是特定類型DNA 損傷的唯一可用途徑［28］。由于Polθ-Pol有較弱的5'-脫氧核糖磷酸裂解酶活性，因此，通常認為Polθ在BER中起作用［32］。DNA單鏈斷裂在遇到復制分叉時轉(zhuǎn)化為DSB 也可能依賴于Polθ 的修復［33］。在果蠅和線蟲中，Polθ 參與的ⅠCLs 和Polθ-Hel 活性對果蠅對氮芥抗性至關(guān)重要［34-35］。另外，Polθ 對G4 四重體結(jié)構(gòu)的修復不可或缺，防止以小缺失為代價的基因組重排［5］。Bela等［36］證明，Polθ-Pol 可以催化一種獨特的誘變間隙填充反應(yīng)，稱為微同源介導的DNA 間隙跳躍（microhomology-mediated gap skipping，MMGS），該反應(yīng)通過微同源性退火導致間隙填充反應(yīng)中缺失的形成，可能是產(chǎn)生Polθ 依賴性基因組瘢痕的潛在機制。MMGS可以繞過多種病變，不需要與病變相對的核苷酸摻入，在HR缺陷細胞中引起Polθ活性的突變特征。Yi 等［37］證明，Polθ 的TLS 活性在高線能傳遞輻射誘導的復雜DSB中起著關(guān)鍵作用。

3 Polθ與基因組穩(wěn)定性

DNA 損傷反應(yīng) （DNA-damage response，DDR）通過內(nèi)源性和外源性DNA 損傷并激活特定的DNA 修復途徑來保持基因組的完整性。正常組織細胞中，ⅠCL和DSB修復缺陷可以導致染色體不穩(wěn)定，并抑制DNA 復制和轉(zhuǎn)錄，進一步導致相關(guān)疾病的發(fā)生。Ceccaldi 等［6］利用小干擾RNA 敲低Polθ，發(fā)現(xiàn)Polθ 減少與DSB 形成增加、復制叉的不穩(wěn)定以及對某些基因毒性因子的敏感性增強有關(guān)，因此，推測Polθ 在基因組穩(wěn)定性中起著至關(guān)重要的作用。另有研究發(fā)現(xiàn)，POLQ基因缺失的正常組織細胞甚至腫瘤細胞對外界因素，包括過氧化氫、γ射線等變得敏感［38-39］，進而引發(fā)基因不穩(wěn)定等突變事件發(fā)生。Polθ除了在哺乳動物基因組穩(wěn)定中起作用，在植物中同樣起著重要作用［40］。Plecenikova 等［41］發(fā)現(xiàn)，Polθ 缺失增加苔蘚和單細胞衣藻對博萊霉素（用于治療癌癥的藥物，會引起DNA 雙鏈斷裂）的敏感性。此外，擬南芥中Polθ缺失會干擾外源DNA片段插入基因［42］。雖然Polθ介導的Alt-EJ修復易出錯，但與其他在缺失情況下進行修復并可能導致總基因組畸變的過程相比，Polθ介導的Alt-EJ修復通常是更安全的選擇，具有維持基因組穩(wěn)定性的作用。然而學術(shù)界也有不同的結(jié)論，Mateos-Gomez等［19］報道Polθ本身會導致基因組不穩(wěn)定，這可能源于其在Alt-EJ 中的誘變作用。多個研究發(fā)現(xiàn)，Polθ損耗可減少染色體易位和紫外線相關(guān)突變，其過表達增加DNA 損傷標記物并損害細胞周期進展［4，19，43］。目前，Polθ 對于基因組穩(wěn)定的影響還存在一定爭議，這可能與特定的DSB誘導因素和細胞類型有關(guān)。

4 Polθ與腫瘤發(fā)生

4.1 Polθ在多種腫瘤組織中高表達

由于Polθ在DNA合成時具有低保真度的特點，當它在不同的時間和位點發(fā)揮作用時，其升高可能導致染色體重排，甚至腫瘤的發(fā)生。一般情況下，在正常細胞中Polθ 低表達或不表達，僅在骨髓和淋巴系統(tǒng)中高表達。而在惡性腫瘤如結(jié)直腸癌、肺癌、胃癌、乳腺癌、卵巢癌和頭頸部癌等中，發(fā)現(xiàn)Polθ 的高表達［1-4］，而且大量臨床數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)，Polθ過表達可能與患者預后不良、基因突變、腫瘤分級及無復發(fā)生存期縮短有關(guān)［1，44］。

4.2 抑制Polθ介導腫瘤細胞合成致死性

在惡性腫瘤細胞中，由于HR修復機制發(fā)生缺陷，抑制Polθ 具有顯著的合成致死效應(yīng)［6，19］。Ceccaldi 等［45］發(fā)現(xiàn)，在BRCA缺乏的癌細胞中，Polθ 表達升高會增加Alt-EJ 修復活性，以補償HR缺陷。因此，抑制Polθ 可以作為抗擊腫瘤的潛在治療靶點。目前PARPi 臨床多用于治療HR 缺陷類型腫瘤，但PARPi耐藥性問題成為其廣泛應(yīng)用的主要障礙［46］。Li 等［47］發(fā)現(xiàn)，Polθ 抑制與PARPi 聯(lián)合，在HR 缺陷腫瘤中可發(fā)揮“雙合成致死”作用，即兩個或多個基因和兩條途徑共同導致腫瘤細胞死亡，且敲除POLQ基因，可能會提高HR 缺陷腫瘤細胞對PARPi的敏感性［7］。

4.3 抑制Polθ促進腫瘤細胞死亡的其他機制

研究表明，Polθ也與先天免疫反應(yīng)激活存在聯(lián)系。腫瘤細胞中HR 修復不足，抑制Polθ 會導致Alt-EJ修復減少，造成基因組不穩(wěn)定，進而促進免疫細胞對癌細胞的免疫識別和免疫破壞［48］。其潛在機制為：a. 新抗原生成［49］；b. cGAS/STⅠNG 通路激活［50］；c. 免疫細胞死亡誘導［51］等，來觸發(fā)癌細胞的免疫原性。近期，Patterson-Fortin 等［52］也發(fā)現(xiàn)，在BRCA缺陷癌癥中，抑制Polθ 會激活cGAS/STⅠNG 通路，導致T 細胞浸潤和活性增加，并對免疫檢查點阻斷劑產(chǎn)生敏感性。

5 Polθ小分子抑制劑

靶向癌細胞的Alt-EJ修復通路既可以選擇性地殺死腫瘤細胞，同時又不影響正常細胞存活，因此Polθ 是治療HR 缺陷癌癥的一個很有前景的靶點［53］，此外，它還可以作為人類癌癥免疫腫瘤治療高應(yīng)答的潛在生物標志物。現(xiàn)階段已經(jīng)報道多個高特異性且有效的Polθ小分子抑制劑用于阻斷HR缺乏的各種癌癥（表1）。

5.1 ART558、ART812和ART899

Zatreanu 等［54］發(fā)現(xiàn)一種有效的、選擇性的小分子Polθ-Pol 抑制劑ART558，通過破壞Polθ-Pol DNA 復合物的穩(wěn)定性降低了生產(chǎn)能力，進而抑制引物的延伸。該研究發(fā)現(xiàn)，在BRCA2-/-的結(jié)直腸腺癌上皮細胞DLD1、胰導管腺癌腫瘤細胞CAPAN1和視網(wǎng)膜色素上皮細胞RPE 中給與1~10 μmol/L ART558 治療后，可誘導腫瘤細胞SL［6，54］。在BRCA2-/-DLD1細胞中，產(chǎn)生了DNA損傷相關(guān)的生物標志物，包括核γH2AX 病灶、磷酸化H2AX、染色體異常和微核的增加，這可能是導致合成致死的原因。在該細胞中，同時給與ART558 和PARPi奧拉帕尼處理對細胞存活、克隆培養(yǎng)率和凋亡的影響遠大于DLD1.BRCA2野生型細胞［54］。在BRCA-/-RPE細胞中，0.5 μmol/L ART558及0.1 μmol/L奧拉帕尼同時處理后，細胞存活顯著降低［54］。ART558不僅能使BRCA-/-腫瘤細胞合成致死，還能減弱由p53 結(jié)合蛋白1 抗體（p53-binding protein 1，53BP1）缺陷引起的PARPi 耐藥性［54］。53BP1-/-和BRCA1-/-的患者源性腫瘤體外培養(yǎng)類器官對PARPi奧拉帕尼或卡鉑耐藥，但是對ART558 處理敏感，腫瘤在1~100 μmol/L ART558 處理時存活顯著減少［54］。Rodriguez-Berriguete 等［55］在結(jié)腸癌細胞HCT116、大細胞肺癌細胞H460和膀胱癌細胞T24中發(fā)現(xiàn)，1 μmol/L ART558 即可增加3 種腫瘤細胞的放射敏感性。由于ART558 穩(wěn)定性較差，Zatreanu 等［8］進一步優(yōu)化衍生出新Polθ-Pol 抑制劑，ART812，發(fā)現(xiàn)對BRCA1/SHLD2-/-（SHLD2為在DNA 修復中起關(guān)鍵性作用的一種蛋白質(zhì)）乳腺癌細胞MDA-MB-436荷瘤大鼠模型給與100 mg/kg ART812 時即有明顯的腫瘤抑制作用［54］。隨后Rodriguez-Berriguete 等［55］又研制出另一種Polθ-Pol 抑制劑——ART899。1 mmol/L 和3 mmol/L ART899處理HCT116和H460細胞，可明顯增加腫瘤細胞放療敏感性［55］。

5.2 新生霉素（novobiocin，NVB）

NVB 是一種新發(fā)現(xiàn)的特異性的Polθ-Hel 抑制劑［7］，它與Polθ 的配體蛋白結(jié)合阻止Polθ 募集到DNA 損傷部位從而抑制Alt-EJ 修復。NVB 可以劑量依賴性誘導HR 缺陷的腫瘤死亡［7］。Zhou 等［7］發(fā)現(xiàn)，在骨肉瘤細胞U2OS 中，分別使用50 μmol/L、100 μmol/L NVB 時，MMEJ 活性下降約50%，而對HR活性沒有明顯影響。NVB可以與PARPi協(xié)同殺死HR缺陷型腫瘤，在BRCA-/-RPE細胞中，100 μmol/L NVB 與10 nmol/L PARPi 魯卡帕尼同時作用導致細胞提前死亡［7］。HR-/-人源腫瘤異種移植 （patient-derived tumor xenografts，PDXs）腫瘤模型（DF83 和DF59）中，NVB 與PARPi 奧拉帕利同時作用，使PARPi 耐藥性減弱，腫瘤完全/提前消退［7］。因此，NVB 和PARPi 聯(lián)合使用比單獨使用PARPi能更有效地殺死HR缺乏的腫瘤，且聯(lián)合治療可預防PARPi的耐藥性。Polθ表達水平是NVB 敏感性的預測性生物標志物，NVB還可誘導DSB 末端切除和RAD51 病灶增加［7］。Patterson-Fortin等［56］發(fā)現(xiàn)，隨著C-NHEJ關(guān)鍵蛋白DNA-PK抑制劑培塞替布濃度增加（1~5 μmol/L），給與100 μmol/L NVB，使TP53 缺陷腫瘤細胞，如非小細胞肺癌細胞A549 和H460 細胞毒性逐漸增強，且NVB可以減弱TP53突變腫瘤細胞對培塞替布的耐藥性。因此，靶向DNA-PK 抑制劑和Polθ抑制劑組合可能為TP53 突變實體瘤提供一種合理的治療策略。

5.3 RP-6685

RP-6685 是一種強效針對Polθ-Pol 的口服抑制劑，它對Polθ 表現(xiàn)出極好的選擇性，對其他幾種DNA 聚合酶（Pols α、ε、γ、λ 和μ） 均沒有活性［57］。Bubenik 等［57］發(fā)現(xiàn)，在人結(jié)腸癌細胞BRCA2-/-HCT116 的小鼠異種腫瘤移植模型中，給與80 mg/kg RP-6685 治療8 d，腫瘤細胞即被明顯抑制，并且出現(xiàn)微核和γH2AX增加的DNA損傷標志物。但遺憾的是，腫瘤細胞對RP-6685會產(chǎn)生耐藥。也許該抑制劑與其他化療藥聯(lián)合使用會產(chǎn)生更好的療效，相關(guān)工作還需進一步探索和研究。因此，靶向Polθ-Pol活性的抑制劑可能成為進一步開發(fā)的候選藥物。

Table 1 Small molecule inhibitors targeting Polθ and tumor lethality表1 Polθ小分子抑制劑與腫瘤致死

6 抑制Polθ有助于提高外源基因靶向整合效率

生理情況下，由于Polθ 與DNA 修復蛋白相互作用，會抑制HR 通路，進而導致依賴HR 通路的外源基因靶向整合效率低下。近期大量研究發(fā)現(xiàn)，抑制Polθ 有可能增加HR，可大幅度提高外源基因的靶向效率［6，19］（表2）。另一方面，在正常細胞中，由于內(nèi)在的HR修復機制的存在，抑制Polθ一般不會產(chǎn)生嚴重合成致死效應(yīng)。Zelensky 等［58］使用CRⅠSPR/Cas9 技術(shù)在小鼠胚胎干細胞（embryonic stem cell，ES）中同時敲除POLQ基因和C-NHEJ關(guān)鍵分子Ku80時，發(fā)現(xiàn)HR基因靶向效率在Rad54基因座和Pim1基因座分別提高了23%和3 倍，進而敲除POLQ基因和聯(lián)用DNA-PK 抑制劑NU-7441 時，外源基因在Rad54基因座的9 號和18 號外顯子位置的外源基因靶向整合效率分別提高9%、 11%， 同時發(fā)現(xiàn)隨機整合（random integration，RⅠ）的降低主要是通過抑制Polθ 介導的Alt-EJ 通路，而抑制C-NHEJ 通路對外源基因敲入效率影響不明顯。進一步研究發(fā)現(xiàn)，同時抑制Polθ和C-NHEJ關(guān)鍵蛋白Ku70/Ku80/LIG4，抑制RⅠ會更為明顯［58-60］。Saito等［60］也發(fā)現(xiàn)，在B淋巴細胞白血病細胞中同時敲除POLQ和LIG4基因，基因靶向效率提高約99.4%。同樣，在衣藻中使用CRⅠSPR/Cas9 體系敲除POLQ基因，發(fā)現(xiàn)HR 修復效率提高了28%~97%［59］。Arai 等［61］在小鼠ES 中利用shRNA 敲低POLQ基因并聯(lián)合DNA-PK 抑制劑M3814，提高雙等位基因敲入效率15倍。另外，NVB 與M3814 聯(lián)用可協(xié)調(diào)提高雙等位基因敲入效率［61］。另一項研究表明，在LIG4-/-HEK293 細胞中，用RP-6685敲低POLQ基因，靶向整合效率提高了2倍［9］。綜上所述，通過敲除或用小分子抑制劑阻斷Polθ 介導的Alt-EJ 通路有助于提高HR 通路活性，增加外源基因靶向整合效率。

Table 2 Inhibition of Polθ improves target integration efficiency表2 抑制Polθ提高HR效率

7 總結(jié)與展望

Polθ是Alt-EJ修復通路的關(guān)鍵分子，生理條件下主要參與維持基因組穩(wěn)定性，而其異常高表達則會促進多種癌癥的發(fā)生發(fā)展?，F(xiàn)階段，科學家已經(jīng)研發(fā)多種靶向Polθ的小分子抑制劑，發(fā)現(xiàn)阻斷Alt-EJ修復通路可增加腫瘤細胞對放療或化療敏感性，逆轉(zhuǎn)部分腫瘤的PARPi耐藥。因此，Polθ有望成為癌癥治療的新靶點，同時也可作為腫瘤免疫治療高反應(yīng)的潛在生物標志物。除此之外，抑制Polθ 活性還可以提高外源基因發(fā)生同源重組的效率，在基因靶向整合方面具有潛在應(yīng)用前景。相信隨著人們對Polθ介導Alt-EJ通路機制研究的不斷深入，越來越多的相關(guān)應(yīng)用會在生物制藥領(lǐng)域發(fā)揮重要的有益作用。