【摘要】目的 分析支氣管鏡肺泡灌洗液GeneXpert MTB/RIF技術(shù)（簡(jiǎn)稱(chēng)GeneXpert）、結(jié)核分枝桿菌基因（TB-DNA）擴(kuò)增檢測(cè)、涂片找抗酸桿菌對(duì)肺結(jié)核的診斷價(jià)值，為臨床上明確疾病診斷提供依據(jù)。方法 選取2021年6月至2022年6月梅州市人民醫(yī)院收治的214例疑似肺結(jié)核患者作為研究對(duì)象，所有患者行支氣管肺泡灌洗，并行GeneXpert、TB-DNA、涂片找抗酸桿菌檢測(cè)，并以結(jié)核分枝桿菌液體培養(yǎng)結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，比較三種方法對(duì)肺結(jié)核的檢出情況；計(jì)算三種方法診斷肺結(jié)核的靈敏度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值等診斷效能指標(biāo)。結(jié)果 結(jié)核分枝桿菌液體培養(yǎng)結(jié)果顯示陽(yáng)性有147例，陰性有67例；GeneXpert、TB-DNA、涂片找抗酸桿菌檢測(cè)對(duì)肺結(jié)核的檢出率分別為93.46%、73.83%、45.79%；GeneXpert診斷肺結(jié)核的靈敏度最高，涂片找抗酸桿菌診斷靈敏度最低；GeneXpert的診斷特異度最低，涂片找抗酸桿菌的診斷特異度最高（均Plt;0.05），三種檢測(cè)方法的陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均Pgt;0.05）。結(jié)論 三種檢測(cè)方法均能有效診斷肺結(jié)核，且各有優(yōu)勢(shì)，臨床需要結(jié)合患者的實(shí)際情況，酌情考慮多種檢測(cè)方法的使用，以提高肺結(jié)核特別是耐藥結(jié)核的早期診斷的準(zhǔn)確率。

【關(guān)鍵詞】肺結(jié)核 ; 結(jié)核分枝桿菌 ; 傳染病 ; 干酪樣壞死 ; 支氣管鏡 ; 肺泡灌洗液

【中圖分類(lèi)號(hào)】R521 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】2096-3718.2023.24.0111.03

DOI：10.3969/j.issn.2096-3718.2023.24.035

肺結(jié)核是由結(jié)核分枝桿菌引起的一種傳染病，患者常伴有咳嗽、咳痰、胸痛、乏力、發(fā)熱等癥狀。肺結(jié)核具有較強(qiáng)的傳染性，且病程時(shí)間較長(zhǎng)，因此現(xiàn)階段對(duì)于肺結(jié)核的預(yù)防控制和檢出工作仍十分重要[1]。GeneXpert MTB/RIF技術(shù)（以下簡(jiǎn)稱(chēng)GeneXpert）是一種新型的結(jié)核分枝桿菌檢測(cè)技術(shù)，可對(duì)結(jié)核分枝桿菌的rpoB基因突變性進(jìn)行檢測(cè)，且操作簡(jiǎn)單，用時(shí)少，現(xiàn)在臨床得到廣泛應(yīng)用[2]；結(jié)核分枝桿菌基因（TB-DNA）擴(kuò)增檢測(cè)是一種基于實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）技術(shù)的結(jié)核分枝桿菌脫氧核糖核酸（DNA）檢測(cè)方法，與GeneXpert類(lèi)似可快速準(zhǔn)確地診斷肺結(jié)核[3]；而涂片找抗酸桿菌是傳統(tǒng)的顯微鏡檢測(cè)方法，是通過(guò)染色后在顯微鏡下觀察痰液中的抗酸桿菌[4]。以上三種檢測(cè)方式是臨床上常用的肺結(jié)核檢測(cè)方法，但是每種方法都各有優(yōu)勢(shì)與劣勢(shì)，故而本研究旨在對(duì)比分析支氣管鏡肺泡灌洗液GeneXpert、TB-DNA、涂片找抗酸桿菌對(duì)肺結(jié)核的診斷價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2021年6月至2022年6月梅州市人民醫(yī)院收治的214例疑似肺結(jié)核患者作為研究對(duì)象，其中男性患者178例，女性患者36例；年齡14～75歲，平均（44.60±18.25）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①患者出現(xiàn)長(zhǎng)期咳嗽（超過(guò)兩周）、咳痰、咳血或呼吸困難等呼吸系統(tǒng)癥狀；②胸部X線、CT或其他影像學(xué)檢查顯示肺部結(jié)節(jié)、陰影、空洞、浸潤(rùn)或其他異常改變；③患者肺部組織活檢或刷片檢查發(fā)現(xiàn)結(jié)核分枝桿菌或典型的干酪樣壞死組織；④均行支氣管鏡肺泡灌洗；⑤所有患者行GeneXpert、TB-DNA、涂片找抗酸桿菌檢測(cè)，⑥首次入院檢查，此前未接受過(guò)相關(guān)治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并嚴(yán)重基礎(chǔ)疾病或嚴(yán)重外傷；②合并惡性腫瘤或其他部位結(jié)核；③依從性差或因身體原因等無(wú)法配合完成研究；④既往有結(jié)核病史或肺部手術(shù)史。本研究經(jīng)梅州市人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核并通過(guò)，所有患者均知曉并簽署知情同意書(shū)。

1.2 檢測(cè)方法

1.2.1 支氣管鏡肺泡灌洗 患者入院后先進(jìn)行心電圖、凝血功能、血常規(guī)等常規(guī)檢查，充分了解患者既往病史及疾病身體狀況等情況后禁食水4 h，患者取平臥位，采用2%鹽酸利多卡因注射液（石藥銀湖制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H14024045，規(guī)格：5 mL∶0.1 g）局部麻醉后從口腔將支氣管鏡（上海澳華內(nèi)鏡股份有限公司，型號(hào)：BBF-4）放入氣管，對(duì)雙側(cè)氣道行局部麻醉，通過(guò)配套顯示屏觀察，根據(jù)需求在病變部位取活檢組織、刷檢，然后取80～100 mL生理鹽水灌入支氣管及病變部位，灌洗后負(fù)壓吸引回收洗液，留取適量洗液送檢。

1.2.2 GeneXpert檢測(cè) 取1 mL支氣管鏡肺泡灌洗標(biāo)本放入預(yù)處理管中，然后加入液化液；15～20 min后將混合液2 mL放入反應(yīng)盒，采用結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針?lè)ǎ◤V州達(dá)安基因股份有限公司，規(guī)格：?jiǎn)喂軉稳朔荩?20人份/盒）和熒光PCR檢測(cè)系統(tǒng)（杭州博日科技有限公司，型號(hào)：FQD-48A），行擴(kuò)增檢測(cè)，應(yīng)用全自動(dòng)醫(yī)用PCR分析系統(tǒng)（美國(guó)賽沛公司，型號(hào)：GX-XVI R2）進(jìn)行自動(dòng)化檢測(cè)并報(bào)告結(jié)果。擴(kuò)增曲線呈S型，根據(jù)Ct值和擴(kuò)增曲線判斷（Ct值gt;10 Hu為陽(yáng)性，≤ 10 Hu為陰性）。

1.2.3 TB-DNA檢測(cè) 取1 mL支氣管鏡肺泡灌洗標(biāo)本，4%氫氧化鈉溶液稀釋液化搖勻后靜置30 min，離心（轉(zhuǎn)速3 000 r/min，時(shí)間10 min）用于基因擴(kuò)增。應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)標(biāo)本中TB-DNA。實(shí)驗(yàn)步驟及結(jié)果判讀嚴(yán)格按照試劑盒上的說(shuō)明書(shū)實(shí)施操作，同時(shí)做好室內(nèi)質(zhì)量控制。

1.2.4 涂片找抗酸桿菌檢測(cè) 取新鮮灌洗液，離心（轉(zhuǎn)速3 000 r/min，時(shí)間10 min），取下層濃縮液或沉淀涂片，若表面為活檢組織則通過(guò)勻漿后取勻漿液涂片，涂片后紫外線照射30 min進(jìn)行固定，萋 - 尼法染色后在10×100倍鏡下觀察標(biāo)本。

1.3 觀察指標(biāo) ①比較三種檢測(cè)方式下肺結(jié)核陽(yáng)性檢出情況。對(duì)比GeneXpert、TB-DNA、涂片找抗酸桿菌等方式的陽(yáng)性及陰性檢出率。②比較三種檢測(cè)方式對(duì)肺結(jié)核的診斷效能。以結(jié)核分枝桿菌液體培養(yǎng)結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)比GeneXpert、TB-DNA、涂片找抗酸桿菌等方式檢測(cè)診斷肺結(jié)核的靈敏度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值。陽(yáng)性預(yù)測(cè)值=[真陽(yáng)性數(shù)量/（真陽(yáng)性數(shù)量+假陽(yáng)性數(shù)量）]×100%；陰性預(yù)測(cè)值=[真陰性數(shù)量/（真陰性數(shù)量+假陰性數(shù)量）]×100%；特異度=[真陰性數(shù)量/（真陰性數(shù)量+假陽(yáng)性數(shù)量）]×100%；靈敏度=[真陽(yáng)性數(shù)量/（真陽(yáng)性數(shù)量+假陰性數(shù)量）]×100%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析本研究所有數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料以[例（%）]表示，兩組間比較用χ2檢驗(yàn)，3組間比較行χ2趨勢(shì)檢驗(yàn)。以Plt;0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 GeneXpert對(duì)肺結(jié)核檢出情況 結(jié)核分枝桿菌液體培養(yǎng)結(jié)果陽(yáng)性有147例，陰性有67例；GeneXpert診斷肺結(jié)核的檢出率為陽(yáng)性93.46%、陰性6.54%，見(jiàn)表1。

2.2 TB-DNA對(duì)肺結(jié)核檢出情況 結(jié)核分枝桿菌液體培養(yǎng)結(jié)果陽(yáng)性有147例，陰性有67例；TB-DNA檢測(cè)診斷肺結(jié)核的檢出率分別為陽(yáng)性73.83%、陰性26.17%，見(jiàn)表2。

2.3 涂片找抗酸桿菌對(duì)肺結(jié)核檢出情況 結(jié)核分枝桿菌液體培養(yǎng)結(jié)果陽(yáng)性有147例，陰性有67例；涂片找抗酸桿菌檢測(cè)診斷肺結(jié)核的檢出率分別為陽(yáng)性45.79%、陰性54.21%，見(jiàn)表3。

2.4 三種方法診斷肺結(jié)核診斷效能比較 GeneXpert診斷肺結(jié)核的靈敏度最高，涂片找抗酸桿菌最低；GeneXpert特異度最低，涂片找抗酸桿菌最高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均Plt;0.05）；三種檢測(cè)方法的陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均Pgt;0.05），見(jiàn)表4。

3 討論

肺結(jié)核是國(guó)內(nèi)最常見(jiàn)的傳染病之一，是目前最嚴(yán)峻的公共衛(wèi)生問(wèn)題之一，防治肺結(jié)核是醫(yī)護(hù)人員的重要工作內(nèi)容[5]。盡管醫(yī)療技術(shù)日益發(fā)達(dá)，肺結(jié)核的治療效果也有了明顯改善，死亡率和致殘率大幅度降低，治療后患者生活質(zhì)量明顯提高，但是我國(guó)人口基數(shù)大，絕對(duì)患病人數(shù)和新發(fā)病例數(shù)都較大，因此對(duì)肺結(jié)核的防治工作仍舊不能松懈?；颊吒腥痉谓Y(jié)核后早期大多無(wú)臨床表現(xiàn)，少數(shù)患者會(huì)出現(xiàn)咳嗽、咳痰等癥狀，隨著疾病發(fā)展或機(jī)體免疫力降低時(shí)才會(huì)出現(xiàn)明顯癥狀，若不及時(shí)治療可出現(xiàn)典型病變，包括發(fā)熱、咯血、咳嗽、乏力、結(jié)核結(jié)節(jié)、干酪樣壞死等，影響患者預(yù)后[6]。因此需要廣泛開(kāi)展結(jié)核病的篩查工作，對(duì)早期患者進(jìn)行準(zhǔn)確的診斷，這樣有助于保護(hù)患者及公眾健康，盡可能減少疾病的傷害，提高治療效果。

支氣管肺泡灌洗是肺部疾病診斷和治療中常用的方法，常用生理鹽水通過(guò)支氣管鏡的輔助灌入支氣管肺泡中，再將液體排出，進(jìn)而達(dá)到清潔氣道，標(biāo)本取材及治療的目的[7]。灌洗液可用于臨床上常見(jiàn)的生化、免疫、微生物、細(xì)胞學(xué)等檢查，應(yīng)用十分廣泛。

GeneXpert、TB-DNA、涂片找抗酸桿菌檢測(cè)是目前臨床應(yīng)用較多的肺結(jié)核篩查和診斷措施。每種檢測(cè)方法各有優(yōu)缺點(diǎn)，部分醫(yī)護(hù)人員尚不明確這幾種檢測(cè)方法在診斷肺結(jié)核中的價(jià)值，因此開(kāi)展本次研究，探索這幾種方法對(duì)肺結(jié)核的診斷效能。本研究結(jié)果顯示，結(jié)核分枝桿菌液體培養(yǎng)結(jié)果陽(yáng)性有147例，陰性有67例；GeneXpert、TB-DNA、涂片找抗酸桿菌檢測(cè)對(duì)肺結(jié)核的檢出率分別為93.46%、73.83%、45.79%，說(shuō)明3種方法均對(duì)肺結(jié)核具有一定的診斷價(jià)值，其中GeneXpert、TB-DNA的檢出率相對(duì)較高，雖然涂片找抗酸桿菌檢測(cè)檢出率雖然較低，但是作為傳統(tǒng)簡(jiǎn)單快速的檢測(cè)方法也是必不可少的。

本研究結(jié)果顯示，GeneXpert診斷肺結(jié)核的靈敏度最高，涂片找抗酸桿菌最低；GeneXpert特異度最低，涂片找抗酸桿菌最高。分析其原因，GeneXpert檢測(cè)技術(shù)是一種以 GeneXpert系統(tǒng)平臺(tái)及PCR原理為基礎(chǔ)的體外診斷技術(shù)，全自動(dòng)一體化實(shí)時(shí)定量檢測(cè)，以利福平耐藥rpoB基因?yàn)榘谢?，自?dòng)提取 DNA片段，并擴(kuò)增其基因的192bp片段，以進(jìn)行檢測(cè)的技術(shù)手段，并檢測(cè)出結(jié)核分枝桿菌對(duì)利福平是否耐藥情況；且與傳統(tǒng)的培養(yǎng)方法相比，GeneXpert具有更高的敏感性，并且結(jié)果可以在幾小時(shí)內(nèi)得出，這使得GeneXpert成為一種快速、準(zhǔn)確的肺結(jié)核診斷方法[8]。然而，GeneXpert的成本較高，限制了其在資源匱乏地區(qū)的應(yīng)用。TB-DNA可以檢測(cè)肺結(jié)核病原體的DNA，但是TB-DNA在測(cè)定中極易因采樣、試劑等污染致使結(jié)果出現(xiàn)誤差，而且TB-DNA的操作復(fù)雜常需要較高水平的實(shí)驗(yàn)室設(shè)備和技術(shù)人員，因此在資源匱乏地區(qū)的使用也受到限制[9]。而涂片找抗酸桿菌作為一種常見(jiàn)的快速病原體檢測(cè)方法，可以通過(guò)染色技術(shù)直接觀察抗酸桿菌（結(jié)核分枝桿菌）的存在，盡管涂片找抗酸桿菌具有簡(jiǎn)單、快速的優(yōu)點(diǎn)，但其敏感性較低，特別是對(duì)于微量感染和難以培養(yǎng)的菌株[10]，因此，涂片找抗酸桿菌常常與其他診斷方法聯(lián)合使用，以提高診斷準(zhǔn)確性。通過(guò)分析后發(fā)現(xiàn)，單一檢測(cè)雖具有一定優(yōu)勢(shì)但具體應(yīng)用還應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況酌情考慮。

綜上，GeneXpert具有較高的靈敏度、涂片找抗酸桿菌有較高的特異度，TB-DNA也有著比涂片找抗酸桿菌較高的檢出率和較GeneXpert更高的特異度。三種檢測(cè)方法均能有效診斷肺結(jié)核，且各有優(yōu)勢(shì)，臨床需要結(jié)合患者的實(shí)際情況，酌情考慮多種檢測(cè)方法的使用，以提高肺結(jié)核特別是耐藥結(jié)核的早期診斷率。

參考文獻(xiàn)

沈甜， 朱慧明， 田華， 等. 外周血降鈣素原、C-反應(yīng)蛋白、纖維蛋白原、D-二聚體水平對(duì)肺結(jié)核合并細(xì)菌性肺炎的早期診斷價(jià)值[J]. 中國(guó)熱帶醫(yī)學(xué)， 2023， 23（7）： 730-735.

李幸旻. 結(jié)核分枝桿菌/利福平耐藥性實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)與抗酸染色在肺結(jié)核中的診斷價(jià)值[J]. 中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥， 2022， 29（14）： 146-149.

何家花， 余成強(qiáng)， 李步榮， 等. TB-DNA、T-SPOT.TB和TB-Ab平行檢測(cè)在肺結(jié)核診斷中的應(yīng)用價(jià)值[J]. 檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床， 2021， 18（1）： 67-69， 72.

陳桂茹， 周欣瀅， 黃廣榮. 結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群核酸檢測(cè)聯(lián)合痰涂片找抗酸桿菌檢測(cè)對(duì)診斷肺結(jié)核的臨床應(yīng)用價(jià)值[J]. 智慧健康， 2022， 8（28）： 27-29， 35.

陳靜. 肺結(jié)核疾病的發(fā)病原因與護(hù)理手段淺析[J]. 中國(guó)科技期刊數(shù)據(jù)庫(kù)醫(yī)藥， 2021， 3（2）： 83-85.

王燕波， 胡陽(yáng)， 宋寧， 等. 支氣管鏡在菌陰肺結(jié)核診斷中應(yīng)用價(jià)值[J]. 臨床肺科雜志， 2022， 27（6）： 915-918.

張艷， 王華， 侯婧， 等. 支氣管肺泡灌洗液結(jié)核分子生物學(xué)檢測(cè)與外周血T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)對(duì)痰涂片陰性肺結(jié)核患者的診斷價(jià)值[J]. 中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)， 2023， 20（23）： 115-118， 124.

鄭永樂(lè)， 王秀英. GeneXpert 快速診斷肺結(jié)核和肺外結(jié)核標(biāo)本利福平耐藥的檢測(cè)研究[J]. 中國(guó)基層醫(yī)藥， 2019， 26（21）： 2574-2577.

李素華，陳莉，王歡. 熒光定量PCR檢測(cè)TB-DNA在各類(lèi)檢樣中的陽(yáng)性率分析[J]. 西南國(guó)防醫(yī)藥， 2007， 17（6）： 752-753.

李明瑛， 姚恒波， 柴青峰， 等. 液基細(xì)胞學(xué)涂片法檢測(cè)痰抗酸桿菌對(duì)肺結(jié)核的診斷價(jià)值[J]. 新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)， 2019， 36（4）： 364-367.