摘要 目的： 探討冠心病病人血清長(zhǎng)鏈非編碼RNA X染色體失活特異轉(zhuǎn)錄本（XIST）、微小RNA-1197（miR-1197）表達(dá)情況及其與冠狀動(dòng)脈CT血管造影（CTA）鈣化積分（CACS）的相關(guān)性。 方法： 選擇2019年4月—2021年12月在我院接受檢測(cè)擬診為冠心病的病人143例為觀察對(duì)象，將75例冠心病病人作為冠心病組，68例非冠心病病人作為對(duì)照組，冠心病組冠狀動(dòng)脈單支病變17例、雙支病變35例，多支病變23例，收集所有受試對(duì)象性別、年齡、 血清炎性因子水平等臨床資料，采用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-qPCR） 檢測(cè)血清lncRNA XIST、miR-1197相對(duì)表達(dá)量，Pearson分析血清lncRNA "XIST與miR-1197水平及l(fā)ncRNA XIST、miR-1197水平與CACS評(píng)分、血清炎性因子的相關(guān)性。 結(jié)果： 冠心病組病人血清C-反應(yīng)蛋白（CRP）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）水平及l(fā)ncRNA "XIST表達(dá)水平高于對(duì)照組（ P ＜0.001），miR-1197表達(dá)水平低于對(duì)照組（ P ＜0.001）；與單支病變組比較，雙支病變組、多支病變組病人血清lncRNA XIST水平、CACS評(píng)分升高，miR-1197水平降低（ P ＜0.001）；與雙支病變組比較，多支病變組病人血清lncRNA XIST水平、CACS評(píng)分升高，miR-1197水平降低（ P ＜0.001）；相關(guān)性分析結(jié)果顯示，冠心病病人血清lncRNA XIST水平與CACS評(píng)分、CRP、IL-6、TNF-α呈正相關(guān)（ P ＜0.001），miR-1197水平與CACS評(píng)分、lncRNA XIST、 CRP、IL-6、TNF-α呈負(fù)相關(guān)（ P ＜ 0.05）。 結(jié)論： 冠心病病人血漿lncRNA XIST水平升高，miR-1197水平降低，與冠狀動(dòng)脈CTA鈣化積分相關(guān)，可作為評(píng)估病情嚴(yán)重程度的標(biāo)志物。

關(guān)鍵詞 "冠心??；長(zhǎng)鏈非編碼RNAX染色體失活特異轉(zhuǎn)錄本；微小RNA-1197；血漿；冠狀動(dòng)脈CTA鈣化積分

doi： "10.12102/j.issn.1672-1349.2023.14.022

冠心病是由動(dòng)脈粥樣硬化（atherosclerosis， AS）引起血管管腔狹窄或阻塞導(dǎo)致的心肌缺血性疾病，主要表現(xiàn)為胸悶、胸痛、心肌梗死等，多發(fā)于老年人，其發(fā)生率與死亡率逐年增加，因此，準(zhǔn)確、有效評(píng)估冠心病病人病情并及時(shí)治療具有重要意義［1-2］。長(zhǎng)鏈非編碼RNA（lncRNA）可參與調(diào)控血管再生、血管內(nèi)皮細(xì)胞功能，在心血管疾病中發(fā)揮重要作用，長(zhǎng)鏈非編碼RNAX染色體失活特異轉(zhuǎn)錄本（lncRNA X chromosome inactivation specific transc ript，XIST）屬于lncRNA，可通過調(diào)控心肌細(xì)胞的增殖與凋亡促進(jìn)心肌梗死［3］。韓虎魁等［4］研究顯示，慢性心力衰竭（chronic heart failure， CHF）病人血漿lncRNA XIST表達(dá)水平升高，與病人B型利鈉肽（B type natriuretic peptide， BNP）水平及左心室射血分?jǐn)?shù)有關(guān)，是CHF病人預(yù)后的獨(dú)立影響因素。微小RNA-1197（miR-1197）在腫瘤中異常表達(dá)，參與腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡［5］，通過生物信息學(xué) （starbase）分析顯示，lncRNA XIST與miR-1197有靶向結(jié)合位點(diǎn)，推測(cè)miR-1197可能與冠心病有關(guān)，冠狀動(dòng)脈CT血管造影（CTA）可明確診斷冠心病，鈣化積分（coronary artery calcification scores，CACS）是評(píng)估冠狀動(dòng)脈粥樣硬化的指標(biāo)［6］。本研究檢測(cè)冠心病病人血清lncRNA XIST、miR-1197表達(dá)情況，探討lncRNA XIST、miR-1197水平及其與冠狀動(dòng)脈CTA鈣化積分的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2019年4月—2021年12月在我院接受檢測(cè)擬診為冠心病的病人143例為觀察對(duì)象，男83例，女60例，年齡45～78歲，確診為冠心病的75病人例作為冠心病組，68例非冠心病病人作為對(duì)照組，其中冠心病組冠狀動(dòng)脈單支病變17例，雙支病變35例，多支病變23例。納入標(biāo)準(zhǔn)：所有病人均行CTA檢查；冠心病均為首次發(fā)病，且經(jīng)冠狀動(dòng)脈造影明確診斷，符合冠心病的診斷標(biāo)準(zhǔn)；病人臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并瓣膜性心臟病、心律失常等心臟相關(guān)疾病史或治療史；合并感染性疾病、肝腎功能不全等；合并惡性腫瘤、風(fēng)濕免疫性疾病者。

1.2 主要試劑與儀器

Trizol試劑（15596018）購(gòu)自Invitrogen公司，miScript Reverse Transcription Kit（218061）、miScript SYBR Green PCR Kit（218075）購(gòu)自德國(guó)Qiagen公司，ABI 7500實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）檢測(cè)儀購(gòu)自美國(guó)ABI公司。

1.3 研究方法

1.3.1 血清lncRNA XIST、miR-1197水平檢測(cè)

采集所有觀察對(duì)象入院后空腹靜脈血5 mL， 3 000 r/min，離心半徑10 cm，離心10 min后采集血清，置于－80 ℃冰箱保存待檢。采用RT-qPCR檢測(cè) 血清lncRNA XIST、miR-1197相對(duì)表達(dá)量，Trizol 試劑提取血清總RNA，使用miScript Reverse Transcription Kit逆轉(zhuǎn)錄成cDNA后，按照試劑盒說(shuō)明進(jìn)行RT-qPCR擴(kuò)增，lncRNA XIST正向引物序列：5′-GCATAACTCGGCTTAGGGCT-3′， 反向引物序列：5′-TCCTCTGCCTGACCTGCTAT-3′；miR-1197正向引物序列：5′-GGACACATGGTCTACTTC-3′，反向引物序 列：5′-GAACATGTCTGCGTATCTC-3′；分別以GAPDH、 U6為內(nèi)參，采用2－△△Ct法計(jì)算lncRNA XIST、miR-1197相對(duì)表達(dá)量。

1.3.2 CACS評(píng)分 "對(duì)所有病人進(jìn)行冠狀動(dòng)脈CTA檢查，采用西門子SOMATOM Definition AS128層螺旋CT機(jī)進(jìn)行掃描，選擇最清晰圖像血管顯影行圖像重建，根據(jù)Agatston積分法［7］，計(jì)算右冠狀動(dòng)脈、左主干、左前降支、左回旋支的鈣化積分，并計(jì)算總CACS積分值。

1.3.3 其他資料收集 "收集兩組觀察對(duì)象年齡、性別、高血壓、糖尿病、吸煙史、高脂血癥等臨床資料及血清炎性因子C-反應(yīng)蛋白（C-reactive protein，CRP）、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（interleukin-6，IL-6）水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 "采用SPSS 25.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)，符合正態(tài)分布的定量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x "± s ）表示，兩組間比較行 t 檢驗(yàn)，多組間比較使用單因素方差分析；定性資料用頻數(shù)、百分比（%）表示，組間比較采用 χ 2檢驗(yàn)，Pearson相關(guān)性分析血清lncRNA XIST與miR-1197水平及l(fā)ncRNA XIST、miR-1197水平與CACS評(píng)分、血清炎性因子的相關(guān)性，以 P ＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組臨床資料及血清炎性因子水平比較 "對(duì)照組與冠心病組在年齡、性別、吸煙史、高血壓、 糖尿病、高脂血癥方面比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （ P ＞0.05），冠心病組血清CRP、IL-6、TNF-α水平高于對(duì)照組（ P ＜0.001）。詳見表1。

2.2 兩組血清lncRNA XIST、miR-1197水平 ""冠心病組血清lncRNA XIST水平高于對(duì)照組 （ P ＜0.001）， 血清miR-1197表達(dá)水平低于對(duì)照組（ P ＜ 0.001）。詳見表2。

2.3 不同冠狀動(dòng)脈病變程度病人血清lncRNA XIST、miR-1197水平及CACS評(píng)分 "單支病變組、雙支病變組、多支病變組間血清lncRNA XIST、miR-1197水平及CACS評(píng)分比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ P ＜0.05）。與單支病變組比較，雙支病變組、多支病變組血清lncRNA XIST水平、CACS評(píng)分升高，miR-1197水平降低（ P ＜0.05）；與雙支病變組比較，多支病變組血清lncRNA XIST水平、CACS評(píng)分升高，miR-1197水平降低（ P ＜0.05）。詳見表3。

2.4 冠心病病人血清lncRNA XIST、miR-1197水平與CACS評(píng)分的相關(guān)性 "相關(guān)性分析顯示，冠心病病人血清lncRNA XIST水平與CACS評(píng)分呈正相關(guān)（ r ＝0.518， P ＜0.05）， miR-1197水平與CACS評(píng)分呈負(fù)相關(guān)（ r ＝－0.692， "P ＜0.05）。詳見圖1、圖2。

2.5 冠心病病人血清lncRNA XIST、miR-1197水平與血清炎性因子的相關(guān)性 "冠心病病人血清lncRNA XIST水平與CRP、IL-6、TNF-α水平呈正相關(guān)（ P ＜0.001），miR-1197水平與 lncRNA XIST、CRP、IL-6、TNF-α水平呈負(fù)相關(guān)（ P ＜ 0.001）。詳見表4。

3 討 論

lncRNA在心血管疾病中發(fā)揮重要作用，研究顯示，lncRNA與冠心病、高血壓病、心臟發(fā)育及心臟衰竭等密切相關(guān)，lncRNA可參與調(diào)節(jié)心血管內(nèi)皮細(xì)胞功能，促進(jìn)AS的形成，與冠狀動(dòng)脈狹窄有關(guān)［8］。lncRNA XIST為L(zhǎng)ncRNA之一，位于人X染色體q13.2上，目前對(duì)lncRNA XIST的研究主要集中在腫瘤領(lǐng)域，如在肺癌、胰腺癌中異常表達(dá)［9］。研究顯示，抑制lncRNA XIST表達(dá)可通過增加miR-30c-5p和降低PTEN表達(dá)抑制氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（human umbilical vein endothelial cells， HUVEC）的炎癥反應(yīng)和凋亡［10］。劉旭幫等［11］研究顯示，lncRNA-XIST在冠心病病人血清表達(dá)水平升高，與心功能分級(jí)有關(guān)，是冠心病心臟事件發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。miRNA可參與氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)、自噬等過程，與冠心病、動(dòng)脈粥樣硬化、心力衰竭等心血管疾病發(fā)生有關(guān)［12-13］。miR-1197均屬于miRNAs，在腫瘤領(lǐng)域研究較多，調(diào)控腫瘤細(xì)胞增殖、遷移與凋亡等［14］。最新研究顯示，miR-1197可靶向調(diào)控COX10表達(dá)參與動(dòng)脈粥樣硬化的形成［15］。本研究結(jié)果顯示，冠心病組病人血清lncRNA XIST水平高于對(duì)照組，miR-1197表達(dá)水平低于對(duì)照組，提示lncRNA XIST、miR-1197水平變化可能與冠心病發(fā)生有關(guān)。本研究還發(fā)現(xiàn)，與單支病變組比較，雙支病變組、多支病變組病人血清lncRNA XIST水平、CACS評(píng)分升高，miR-1197水平降低；與雙支病變組比較，多支病變組血清lncRNA XIST水平、CACS評(píng)分升高，miR-1197水平降低，提示冠心病病人血清lncRNA XIST、miR-1197水平變化可能與冠狀動(dòng)脈病變程度有關(guān)。

動(dòng)脈粥樣硬化的形成與血管內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞的增殖/凋亡不平衡有關(guān)，研究顯示，lncRNA XIST通過作為miR-599的ceRNA增加TLR4的表達(dá)，促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞增殖［16］。本研究通過相關(guān)性分析顯示，冠心病病人血清lncRNA XIST與miR-1197水平呈負(fù)相關(guān)，lncRNA XIST、miR-1197有靶向結(jié)合位點(diǎn)，提示lncRNA XIST可能靶向負(fù)調(diào)控miR-1197表達(dá)參與冠心病的進(jìn)展［16］。由此可以推測(cè)，lncRNA XIST可能通過調(diào)節(jié)miR-1197表達(dá)參與血管平滑肌細(xì)胞的增殖，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的形成，進(jìn)而發(fā)展為冠心病。

炎癥反應(yīng)是冠心病發(fā)生的機(jī)制之一，全身炎癥反應(yīng)與血管局部炎癥程度與冠狀動(dòng)脈損傷程度有關(guān)，CRP是一種急性時(shí)相反應(yīng)蛋白，可直接參與動(dòng)脈粥樣硬化的形成，IL-6水平升高可加重管腔狹窄，與冠狀動(dòng)脈斑塊程度有關(guān)，TNF-α可激活中性粒細(xì)胞使之聚集并阻塞缺血區(qū)微血管，引起心肌細(xì)胞損傷［17-18］。本研究顯示，冠心病組血清CRP、IL-6、TNF-α水平高于對(duì)照組，提示病人存在冠狀動(dòng)脈損傷。相關(guān)性分析顯示， lncRNA XIST與CRP、IL-6、TNF-α呈正相關(guān)，miR-1197 水平與CRP、IL-6、TNF-α呈負(fù)相關(guān)，提示lncRNA XIST、miR-1197可反映冠心病病人炎癥反應(yīng)程度。CACS水平可宏觀反映冠心病狹窄血管累及支數(shù)，與動(dòng)脈粥樣硬化及病變嚴(yán)重程度有關(guān)，冠心病病人CACS評(píng)分升高［19］。本研究顯示，冠心病病人CACS評(píng)分高于對(duì)照組，且血清lncRNA XIST水平與CACS評(píng)分呈正相關(guān)，miR-1197水平與CACS評(píng)分呈負(fù)相關(guān)，提示lncRNA XIST水平越高、miR-1197水平越低，冠狀動(dòng)脈病變程度越嚴(yán)重，檢測(cè)lncRNA XIST、miR-1197水平對(duì)判定冠狀動(dòng)病變嚴(yán)重程度具有參考價(jià)值。

綜上所述，冠心病病人血漿lncRNA XIST水平升高，miR-1197水平降低，與冠狀動(dòng)脈CTA鈣化積分相關(guān)，可作為評(píng)估病情嚴(yán)重程度的標(biāo)志物。

參考文獻(xiàn)：

［1］ "鄧靜，陳墾，楊大春，等.血清CTX、PINP、COMP表達(dá)水平與冠心病發(fā)生發(fā)展及疾病嚴(yán)重程度的相關(guān)性［J］.中國(guó)老年學(xué)雜志，2021，41（18）：3899-3901.

［2］ "LV F，LIU L，F(xiàn)ENG Q， et al. Long non-coding RNA MALAT1 and its target microRNA-125b associate with disease risk，severity，and major adverse cardiovascular event of coronary heart disease［J］.J Clin Lab Anal，2021，35（4）：e23593.

［3］ "ZHOU T，QIN G，YANG L， et al. LncRNA XIST regulates myocardial infarction by targeting miR-130a-3p［J］.J Cell Physiol，2019，234（6）：8659-8667.

［4］ "韓虎魁，李剛，李其勇，等.慢性心力衰竭病人血漿長(zhǎng)鏈非編碼核糖 核酸XIST的表達(dá)及臨床意義［J］.中國(guó)循環(huán)雜志，2018，33（9）：889-893.

［5］ "WANG H，ZHANG Q，CUI W Y， et al. Circ_0004018 suppresses cell "proliferation and migration in hepatocellular carcinoma via miR-1197/ PTEN/PI3K/AKT signaling pathway［J］.Cell Cycle（Georgetown，Tex），2021，20（20）：2125-2136.

［6］ "張紹金，唐誠(chéng)，陳紅，等.冠脈CTA鈣化積分與冠心病病人血清炎性因子、斑塊穩(wěn)定性指標(biāo)的相關(guān)性［J］.海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2018，24（4）：452-455.

［7］ "楊德勝.16層螺旋CT冠狀動(dòng)脈鈣化積分在冠心病診斷中的應(yīng)用價(jià)值研究［J］.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2016，13（16）：2297-2298;2302.

［8］ "張浩，徐寅，郭明凱，等.血清LncRNA MIR155HG對(duì)冠心病病人PCI后冠狀動(dòng)脈再狹窄的預(yù)測(cè)價(jià)值［J］.中國(guó)循證心血管醫(yī)學(xué)雜志，2020，12（8）：984-987.

［9］ "LIU J L，YAO L，ZHANG M Y， et al. Downregulation of LncRNA-XIST inhibited development of non-small cell lung cancer by activating miR-335/SOD2/ROS signal pathway mediated pyroptotic cell death［J］.Aging，2019，11（18）：7830-7846.

［10］ "HU W N，DUAN Z Y，WANG Q， et al. The suppression of ox-LDL-induced inflammatory response and apoptosis of HUVEC by lncRNA XIAT knockdown via regulating miR-30c-5p/PTEN axis［J］.Eur Rev Med Pharmacol Sci，2019，23（17）：7628-7638.

［11］ "劉旭幫，張朝華，魏娟玲，等.血清LncRNA-XIST在慢性心力衰竭病人中表達(dá)及臨床價(jià)值［J］.中國(guó)循證心血管醫(yī)學(xué)雜志，2020，12（8）：923-926.

［12］ "LIU F，LIU Y，DU Y， et al. MiRNA-130a promotes inflammation to accelerate atherosclerosis via the regulation of proliferator-activated receptor γ（PPARγ）expression［J］.Anatol J Cardiol，2021，25（9）：630-637.

［13］ "劉艷賓，楊樹涵，陳紅偉，等.老年冠心病病人血清miRNA-34a表達(dá)及其臨床意義［J］.實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2019，35（22）：3482-3486.

［14］ "WANG J Y，ZHANG F，HONG L， et al. CircRNA_0000429 regulates development of NSCLC by acting as a sponge of miR-1197 to control MADD［J］.Cancer Manag Res，2021，13（1）：861-870.

［15］ "ZHANG B，WANG J，DU L， et al. Knockdown of NCK1-AS1 inhibits the development of atherosclerosis by targeting miR-1197/COX10 axis［J］.J Biol Eng，2022，16（1）：2.

［16］ "YANG K，XUE Y，GAO X.LncRNA XIST promotes atherosclerosis by regulating miR-599/TLR4 axis［J］.Inflammation，2021，44（3）：965-973.

［17］ "邸云峰，李德才，張大勇，等.冠心病病人IL-35、IL-6、CysC水平變化及其與冠狀動(dòng)脈病變支數(shù)、冠狀動(dòng)脈成像鈣化積分的相關(guān)性［J］.中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2021，19（9）：1530-1535.

［18］ "HE D，YAN L.MiR-29b-3p aggravates cardiac hypoxia/reoxygenation injury via targeting PTX3［J］.Cytotechnology，2021，73（1）：91-100.

［19］ ""孫時(shí)淼，張濤.冠心病病人術(shù)前血清超氧化物歧化酶和微小RNA-29b 表達(dá)及與冠脈CTA鈣化積分相關(guān)性研究［J］.陜西醫(yī)學(xué)雜志，2020，49（7）：855-857.

（收稿日期：2022-02-16）

（本文編輯 王雅潔）