摘要 目的: 探究丹皮酚(Pae)通過上調(diào)微小RNA-339-5p(miR-339-5p)靶向高遷移率族蛋白B1(HMGB1)對神經(jīng)病理性疼痛大鼠炎癥反應的影響。 方法: 通過L5神經(jīng)結(jié)扎橫切構(gòu)建神經(jīng)病理性疼痛大鼠模型,將72只SD大鼠隨機分為6組,假手術(shù)組(Sham)、模型組(Model)、Pae組、Pae+antagomir-NC組、Pae+miR-339-5p-antagomir組、Pae+miR-339-5p-antagomir+HMGB1抑制劑-甘草酸(GA)組,每組12只,給藥7 d。手術(shù)前1 d及手術(shù)后3 d、11 d,測定大鼠行為學機械痛閾值(MWT)、熱縮足反射潛伏期(TWL),手術(shù)后第12天,酶聯(lián)免疫吸附法測定脊髓組織中腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細胞介素-1β(IL-1β)水平,實時熒光定量聚合酶鏈式反應(RT-PCR)法測定脊髓組織中miR-339-5p、HMGB1、IL-1β、TNF-α mRNA的表達,蛋白免疫印跡法(Western Blot)檢測脊髓組織中HMGB1、IL-1β、TNF-α蛋白表達,雙熒光素酶報告實驗分析miR-339-5p與HMGB1的靶向關(guān)系。 結(jié)果: 術(shù)前1 d,各組大鼠MWT、TWL比較差異無統(tǒng)計學意義( P >0.05)。與Sham組比較,Model組大鼠術(shù)后MWT、TWL及miR-339-5p水平降低,IL-1β、TNF-α水平,HMGB1、IL-1β、TNF-α mRNA及蛋白水平升高( P <0.05);與Model組比較,Pae組大鼠術(shù)后MWT、TWL、miR-339-5p水平升高,IL-1β、TNF-α水平及HMGB1、IL-1β、TNF-α mRNA及蛋白水平降低( P <0.05);與Pae組比較,Pae+antagomir-NC組大鼠各指標差異無統(tǒng)計學意義( P >0.05),Pae+miR-339-5p-antagomir組大鼠術(shù)后MWT、TWL及miR-339-5p水平降低,IL-1β、TNF-α水平,HMGB1、IL-1β、TNF-α mRNA及蛋白水平升高( P <0.05);與Pae+miR-339-5p-antagomir組比較,Pae+miR-339-5p-antagomir+GA組大鼠術(shù)后MWT、TWL升高,IL-1β、TNF-α水平,HMGB1、IL-1β、TNF-α mRNA及蛋白水平降低( P <0.05);mir-339-5p與HMGB1存在靶向關(guān)系。 結(jié)論: Pae通過上調(diào)miR-339-5p,靶向抑制HMGB1的表達,減輕神經(jīng)病理性疼痛大鼠的炎癥反應。
關(guān)鍵詞 "神經(jīng)病理性疼痛;微小RNA-339-5p;高遷移率族蛋白B1;炎癥反應;丹皮酚;實驗研究
doi: "10.12102/j.issn.1672-1349.2023.14.012
Paeonol Attenuates Inflammatory Responses in Rats with Neuropathic Pain by Up-regulating miR-339-5p and Targeting HMGB1
WANG Zhen, WANG Yuping, ZHANG Aizhong
PKUCare Luzhong Hospital, Zibo 255400, Shandong, China, E-mail: walhqz@163.com
Abstract Objective: To explore the effect of paeonol(Pae) on the inflammatory response in rats with neuropathic pain by up-regulating microRNA-339-5p(miR-339-5p) and targeting high mobility group box B1(HMGB1). "Methods: The rat model of neuropathic pain was established by ligation and transection of the L5 nerve.A total of 72 Sprague-Dawley(SD) rats were randomly divided into 6 groups,including the sham group,model group,Pae group,Pae+antagomir-NC group,Pae+miR-339-NC group,Pae+miR-339- 5p-antagomir group,and Pae+miR-339-5p-antagomir+HMGB1 inhibitor-glycyrrhizic acid(GA) group,with 12 rats in each group and administered for 7 days.On 1 day before the operation,3 days,and 11 days after the operation,the mechanical withdrawal latency(MWL) and thermal withdrawal latency(TWL) of rats were measured.At the 12th day after the operation,enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA) was used to detect tumor necrosis in spinal cord tissue,factor-α(TNF-α),and interleukin-1β(IL-1β) levels;real-time fluorescent quantitative PCR(RT-PCR) method was used to detect miR-339-5p,HMGB1,IL-1β,TNF-α in spinal cord tissue mRNA expression;Western Blot was used to detect HMGB1,IL-1β,TNF-α protein expression in spinal cord tissue;dual luciferase reporter assay was used to analyze the targeting relationship between miR-339-5p and HMGB1. "Results: "At 1 day before the operation,there was no significant difference in MWT and TWL among the rats in each group( P >0.05).Compared with the sham group,the levels of MWT,TWL,and miR-339-5p decreased;the levels of IL-1β and TNF-α,HMGB1,IL-1β,TNF-α mRNA,and protein increased in the model group "after the operation( P < 0.05).Compared with the Model group,the levels of MWT,TWL,and miR-339-5p "increased;the levels of IL-1β,TNF-α,HMGB1,IL-1β,TNF-α "mRNA,and protein decreased in the Pae group after the operation( P <0.05).Compared with the Pae group,there was no significant difference in the indicators of the rats in the Pae+antagomir-NC group( P > 0.05);the postoperative levels of MWT,TWL,and miR-339-5p "decreased;the levels of IL-1β,TNF-α,HMGB1,IL-1β,TNF-α mRNA,and protein increased( P <0.05).Compared with the Pae+miR-339-5p-antagomir group,the postoperative levels of MWT and TWL increased in the Pae+miR-339-5p-antagomir+GA group;the levels of IL-1β,TNF-α,HMGB1,IL-1β,TNF-α mRNA,and protein decreased( P <0.05 ).There was a targeting relationship between miR-339-5p and HMGB1. "Conclusion: Pae could reduce the inflammatory response in rats with neuropathic pain by up-regulating miR-339-5p,targeting and inhibiting the expression of HMGB1.
Keywords ""neuropathic pain; microRNA-339-5p; high mobility group box B1; inflammatory response; paeonol; experimental study
神經(jīng)病理性疼痛是由中樞或外周感覺神經(jīng)系統(tǒng)損傷或疾病引起的常見癥狀[1]。炎癥反應是影響神經(jīng)病理性疼痛發(fā)生的重要原因,已有研究發(fā)現(xiàn),促炎和抗炎細胞因子在人類神經(jīng)性疼痛中都發(fā)揮著重要作用,且抗炎細胞因子在動物模型中具有鎮(zhèn)痛作用[2]。高遷移率族蛋白1(high mobility group box 1,HMGB1)是一種高度保守的非組蛋白DNA結(jié)合蛋白,可作為一種晚期促炎介質(zhì),介導炎癥的產(chǎn)生,并通過結(jié)合多種受體促進腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細胞介素-1β(IL-1β)等炎癥細胞因子的產(chǎn)生[3]。微小RNAs(microRNAs,miRNAs)是一類內(nèi)源性非編碼RNA,通過與靶基因的3′-UTR位點結(jié)合,從而調(diào)節(jié)基因表達[4]。大量研究表 明,miRNAs可能是連接神經(jīng)損傷、疼痛和炎癥的潛 "在主開關(guān),尤其和炎癥之間密切相關(guān),已有報道 miR-142-3p,miR-126等多種miRNAs通過靶向HMGB1來調(diào)節(jié)炎癥[2,5-6]。然而,關(guān)于治療神經(jīng)性疼痛一直僅限于特定類型的治療,如藥物治療或神經(jīng)刺激,治療效果尚不明顯,因此,需探索新的藥物用于治療該疾病。丹皮酚(paeonol,Pae)是一種活性成分,從牡丹皮中提取出來,具有抗腫瘤、抗炎鎮(zhèn)痛和神經(jīng)保護等作用[7]。有研究表明,Pae能有效改善認知障礙及其他中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病[8],Mei等[3]研究發(fā)現(xiàn)Pae可通過上調(diào)miR-339-5p靶向HMGB1減輕膿毒癥的炎癥反應。而關(guān)于Pae對神經(jīng)病理性疼痛大鼠炎癥反應的影響及作用機制目前尚不清楚。本研究通過制備神經(jīng)病理性疼痛大鼠模型,通過miR-339-5p靶向HMGB1介導的炎癥途徑,研究Pae對神經(jīng)病理性疼痛大鼠炎癥反應的作用,為神經(jīng)病理性疼痛提供潛在的治療靶點。
1 材料與方法
1.1 實驗動物 ""8周清潔級健康雌性SD大鼠72只,體質(zhì)量210~ 270 g,購自廣州銳格生物科技有限公司,許可證號 SCXK(粵)2021—0059。常規(guī)飼養(yǎng),溫度為(22±1)℃, 濕度為60%。本研究經(jīng)本院動物倫理委員會批準。
1.2 實驗藥物及試劑 "Pae購自源葉生物,批號B20266;戊巴比妥鈉購自上海思域化工科技有限公司,批號57330;HEK293細胞購自尚恩生物,批號SNLM-014;miR-339-5p模擬 物(miR-339-5 pmimics)及其陰性對照序列(mimics NC)、 pmirGLO-HMGB1-WT/MUT重組質(zhì)粒、miR-339-5p、 HMGB1、IL-1β、TNF-α、U6、GAPDH引物序列均由吉瑪基因構(gòu)建;pmirGLO熒光素酶表達載體及Dual-Luciferase 報告檢測系統(tǒng)購自美國Promega公司,批號3577193、N1610;大鼠IL-1β、TNF-α 酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)試劑盒購自美國Abcam公司,批號ab255730、ab236712;HMGB1抑制劑-甘草酸(glycyrrhizic acid,GA)(純度≥98%,貨號:HY-N0184)購自MCE公司; miR-339-5p拮抗劑陰性對照(antagomir-NC)、 miR-339-5p拮抗劑(miR-339-5p-antagomir)均由銳博生物合成;二喹啉甲酸法(BCA)試劑盒購自上海經(jīng)科化學科技有限公司,批號JK-201;兔抗IL-1β抗體、TNF-α抗體、HMGB1抗體、GAPDH抗體、辣根過氧化物酶HRP羊抗兔二抗購自美國Abcam公司,批號ab283818、ab6671、ab18256、ab9485、ab6721;RNA提取試劑盒購自北京天根生化科技有限公司,批號DP420;逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購自美國Genecopoeia公司,批號C0210B。
1.3 大鼠神經(jīng)病理性疼痛模型的制備[9] ""大鼠手術(shù)前禁食、不禁水12 h,腹腔注射45 mL/kg 戊巴比妥鈉麻醉,俯臥位固定大鼠,對脊椎背部皮膚進行常規(guī)消毒,分離腰椎第4~6脊椎肌肉,使第5腰椎神經(jīng)暴露,用3.0無菌絲線結(jié)扎,切口消毒后迅速逐層縫合切口。假手術(shù)組大鼠不予結(jié)扎。術(shù)后為防止感染,肌肉注射青霉素4×104 U/d,連續(xù)3 d。術(shù)后3 d大鼠出現(xiàn)跛行、舔足、抬足次數(shù)增多等行為,表明造模成功。
1.4 動物分組與給藥 "造模成功后,將所有大鼠按照隨機數(shù)字表法分為6組,每組12只,分別為假手術(shù)(Sham)組、模型(Model)組、Pae組、Pae+antagomir-NC組、Pae+ miR-339-5p-antagomir組、Pae+miR-339-5p-antagomir+ GA(HMGB1抑制劑甘草酸)組。建模后第4天進行給藥,Sham組、Model組尾靜脈注射等量的生理鹽水,Pae組腹腔注射120 mg/kg Pae,Pae+antagomir-NC 組腹腔注射120 mg/kg Pae、尾靜脈注射antagomir-NC (每只20 nnol),Pae+miR-339-5p-antagomir組腹腔注射120 mg/kg Pae,并尾靜脈注射antagomir-NC(每只20 nnol),Pae+miR-339-5p-antagomir+GA組腹腔注射120 mg/kg Pae,并尾靜脈注射miR-339-5p-antagomir (每只20 nnol),灌胃HMGB1抑制劑-GA 0.03 g/kg[10], 每天1次,連續(xù)7 d。
1.5 各組大鼠疼痛行為學測定 "手術(shù)前1 d及手術(shù)后3 d、11 d測試機械痛閾值(MWT)、熱縮足反射潛伏期(TWL),測試前將各組大鼠需適應30 min。采用Von Frey細絲刺激大鼠手術(shù)側(cè)后足趾面,每次刺激持續(xù)4~6 s,同時逐漸增強刺激力度,當肉眼可見細絲稍微彎曲時,為完全受力的標準,若大鼠出現(xiàn)縮足,則為陽性反應,記錄此時刺激力度,即為MWT。調(diào)整熱刺激器溫度為30 ℃,然后刺激大鼠手術(shù)側(cè)后足趾面,時間30 s,若大鼠出現(xiàn)舔爪、抬腿,則為陽性反應,記錄時間,即為TWL。每只大鼠測試6次,取平均值。
1.6 各組大鼠脊髓組織中IL-1β和TNF-α水平檢測 "手術(shù)后第12天,處死各組大鼠,收集大鼠左側(cè)脊髓。取適量各組大鼠脊髓組織,離心取上清液,采用酶聯(lián)免疫試劑盒檢測IL-1β和TNF-α水平。
1.7 各組大鼠脊髓組織中miR-339-5p、HMGB1 mRNA和炎性因子IL-1β、TNF-α mRNA表達的測定 "取適量各組大鼠脊髓組織,按照RNA 提取試劑盒提取總RNA,用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒反轉(zhuǎn)錄為cDNA,RT-PCR "引物序列見表1。反應體系為20 μL:2×SYBR Mix 10 μL, H2O 6 μL,0.4 μL ROX Reference Dye,正向、反向引物各0.8 μL,10×cDNA模板2 μL。反應條件設定為:95 ℃反應10 s,60 ℃反應1 min,95 ℃反應15 s,40個循環(huán)。以U6作為miR-339-5p內(nèi)參基因,GAPDH作為HMGB1和炎性因子的內(nèi)參基因,以2-△△Ct法計算表達量。
1.8 "脊髓組織中HMGB1、IL-1β、TNF-α蛋白表達的測定 ""取適量各組大鼠脊髓組織勻漿液,加入蛋白裂解液,冰浴40 min,4 ℃、12 000 r/min離心,取上清,嚴格按照BCA試劑盒測定蛋白含量。取20 μg蛋白樣品,10% SDS-PAGE電泳,轉(zhuǎn)至PVDF膜,放入37 ℃封閉液中1 h,PBS清洗,加入一抗(HMGB1抗體、IL-1β抗體、TNF-α抗體、GAPDH抗體)分別稀釋到一定的比例,孵育、輕搖過夜,PBS清洗,加入HRP二抗,稀釋一定的比例,孵育,室溫輕搖1 h,PBS洗膜后,使用增強化學發(fā)光試劑(ECL)顯影,觀察各組蛋白表達情況。
1.9 雙熒光素酶報告基因驗證miR-339-5p對HMGB1的靶向調(diào)控 "構(gòu)建pmirGLO-HMGB1-WT/MUT重組質(zhì)粒表達載體,用LipofectamineTM2000脂質(zhì)體將miR-339-5p "mimics、陰性對照序列(mimics NC)與pmirGLO-HMGB1- WT/MUT重組質(zhì)粒分別混合后轉(zhuǎn)染HEK293T細胞,轉(zhuǎn)染48 h后,根據(jù)Dual-Luciferase報告檢測系統(tǒng),對熒光素酶活性進行檢測。
1.10 統(tǒng)計學處理 "采用SPSS 24.0軟件進行統(tǒng)計,定量資料符合正態(tài)分布以均數(shù)±標準差( x "± s )表示,多組間比較采用單因素方差分析,進一步兩兩比較采用SNK- q 檢驗,以 P <0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
2 結(jié) 果
2.1 各組大鼠疼痛行為學指標比較 "各組大鼠手術(shù)前1 d的 MWT、TWL比較差異無統(tǒng)計學意義( P >0.05)。在手術(shù)后3 d、11 d,與Sham組比較,Model組大鼠MWT、TWL降低( P <0.05);與 Model組比較,Pae組大鼠MWT、TWL升高( P < 0.05);與Pae組比較,Pae+antagomir-NC組大鼠 MWT、TWL差異無統(tǒng)計學意義( P >0.05),Pae+miR-339- 5p-antagomir組大鼠MWT、TWL降低( P <0.05);與Pae+miR-339-5p-antagomir組比較,Pae+miR-339- 5p-antagomir+GA組大鼠MWT、TWL升高( P <0.05)。 詳見表2、表3。
2.2 各組大鼠脊髓組織中IL-1β和TNF-α水平測定 "與Sham組比較,Model組大鼠脊髓組織中IL-1β和TNF-α水平升高( P <0.05);與Model組比較,Pae 組大鼠脊髓組織中IL-1β和TNF-α水平降低( P < 0.05);與Pae組比較,Pae+antagomir-NC組大鼠脊 髓組織中IL-1β和TNF-α水平差異無統(tǒng)計學意義 ( P >0.05),Pae+miR-339-5p-antagomir組大鼠脊髓組織中 IL-1β和TNF-α水平升高( P <0.05);與Pae+miR-339-5p-antagomir組比較,Pae+miR-339-5p-antagomir+GA 組大鼠脊髓組織中IL-1β和TNF-α水平降低( P <0.05)。詳見表4。
2.3 各組大鼠脊髓組織中miR-339-5p、HMGB1 mRNA和炎性因子IL-1β、TNF-α mRNA表達 ""與Sham組比較,Model組大鼠脊髓組織中miR-339-5p 表達水平下降,HMGB1、IL-1β和TNF-α mRNA表達水平升高( P <0.05);與Model組比較,Pae組大鼠脊髓組織中miR-339-5p表達水平升高,HMGB1、IL-1β和TNF-α mRNA表達水平下降( P <0.05);與Pae組比 較,Pae+antagomir-NC組大鼠脊髓組織中miR-339-5p、 HMGB1、IL-1β、TNF-α mRNA表達水平差異無統(tǒng)計學意義( P >0.05),Pae+miR-339-5p-antagomir組大鼠脊髓組織中miR-339-5p表達水平降低,HMGB1、IL-1β和TNF-α mRNA表達水平升高( P <0.05);與Pae+miR-339-5p-antagomir組比較,Pae+miR-339-5p-antagomir+GA組大鼠脊髓組織中HMGB1、IL-1β和TNF-α mRNA表達水平下降( P <0.05)。詳見表5。
2.4 各組大鼠脊髓組織中HMGB1、IL-1β、TNF-α蛋白表達 "與Sham組比較,Model組大鼠脊髓組織中HMGB1、IL-1β、TNF-α蛋白表達水平升高( P <0.05); 與Model組比較,Pae組大鼠脊髓組織中HMGB1、 IL-1β、TNF-α蛋白表達水平下降( P <0.05);與Pae組 比較,Pae+antagomir-NC組大鼠脊髓組織中HMGB1、 "IL-1β、TNF-α蛋白表達水平差異無統(tǒng)計學意義( P >0.05), Pae+miR-339-5p-antagomir組大鼠脊髓組織中HMGB1、IL-1β、TNF-α蛋白表達水平升高( P <0.05); 與Pae+miR-339-5p-antagomir組比較,Pae+ miR-339-5p-antagomir+GA組大鼠脊髓組織中HMGB1、IL-1β、TNF-α蛋白表達水平下降( P <0.05)。詳見圖1、表6。
2.5 miR-339-5p靶向調(diào)控HMGB1的表達 "為了確定miR-339-5p是否靶向調(diào)控HMGB1蛋 白,利用生物信息學軟件預測了HMGB1序列中 miR-339-5p的靶位點(見圖2)。雙熒光素酶活性實驗結(jié)果表明,與mimics NC+pmirGLO-HMGB1-WT組比較,miR-339-5p mimics+pmirGLO-HMGB1-WT組熒光素酶活性下降( P <0.05),與mimics NC+pmirGLO-HMGB1-MUT組比較,miR-339-5p mimics+pmirGLO-HMGB1-MUT組熒光素酶活性差異無統(tǒng)計學意義( P >0.05)。詳見圖2、表7。
3 討 論
神經(jīng)病理性疼痛具有自發(fā)性、機械性疼痛等臨床表現(xiàn),是一種常見的慢性?。?1]。一旦機體發(fā)生神經(jīng)病理性疼痛,會使感受傷害的神經(jīng)元異常敏感,因此,使感受傷害的神經(jīng)元去敏感,可產(chǎn)生鎮(zhèn)痛的效果[12]。本研究通過L5神經(jīng)結(jié)扎橫切構(gòu)建神經(jīng)病理性疼痛大鼠模型,術(shù)后大鼠出現(xiàn)抬足次數(shù)增多、跛行、舔足等行為。且手術(shù)前1 d的 MWT、TWL比較差異無統(tǒng)計學意義,在手術(shù)后3 d、11 d時MWT、TWL降低,說明成功構(gòu)建神經(jīng)病理性疼痛大鼠模型,神經(jīng)病理性疼痛大鼠對疼痛、溫度非常敏感。
炎癥可發(fā)生在任何受感染的組織中,適當?shù)难装Y反應對于損傷后愈合是必不可少的,而免疫抑制反應對于防止過于嚴重的炎癥也至關(guān)重要[13]。然而一旦炎癥級聯(lián)反應發(fā)生,即抗炎/促炎反應之間的平衡被破壞,促炎細胞因子過度表達,會導致健康組織受損,該過程與許多人類疾病密切相關(guān)[14]。大量研究表明,細胞因子和趨化因子介導、協(xié)調(diào)神經(jīng)系統(tǒng)損傷后發(fā)生的神經(jīng)免疫反應與神經(jīng)性疼痛緊密相關(guān)[15]。IL-1β不但在炎癥反應中誘發(fā)促炎性因子的表達,還可引起神經(jīng)元興奮,從而誘發(fā)神經(jīng)性疼痛[16]。TNF-α由免疫細胞、神經(jīng)元細胞分泌,參與神經(jīng)病理性疼痛的調(diào)節(jié),與IL-1β共同參與降低抑制性電流而參與神經(jīng)病理性疼痛[17]。本研究發(fā)現(xiàn),與Sham組比較,Model組大鼠脊髓組織中IL-1β、TNF-α水平升高,說明神經(jīng)病理性疼痛與炎癥因子緊密相關(guān),機體炎性因子表達可能促使疾病發(fā)生。目前,對于神經(jīng)病理性疼痛的治療,臨床上多采用單一靶點的藥物,但常常伴隨著副作用[18]。Pae注射液已應用于炎癥/疼痛相關(guān)的病癥中,具有神經(jīng)保護、抗炎、抗腫瘤等作用,有研究表明,Pae可通過抑制炎性因子TNF-α和IL-1β的表達,減輕膿毒癥的炎癥反應[3,19]。本研究結(jié)果表明,與Model組比較,Pae組大鼠MWT、TWL升高,說明Pae可減輕神經(jīng)病理性疼痛大鼠的神經(jīng)疼痛及對溫度的敏感性,起到鎮(zhèn)痛作用。同時大鼠脊髓組織中IL-1β、TNF-α水平均降低,說明Pae可減輕神經(jīng)病理性疼痛大鼠脊髓組織炎癥反應。
miRNA作為一種非編碼RNA,參與機體生理、病理的發(fā)生、發(fā)展過程。目前有大量關(guān)于miRNA在神經(jīng)病理性疼痛中發(fā)揮作用的研究,過表達miR-129-5p可抑制HMGB1和促炎細胞因子的表達,并減輕了慢性限制性損傷大鼠的神經(jīng)性疼痛[20]。Mei等[3]進行體內(nèi)實驗發(fā)現(xiàn),Pae通過升高miR-339-5p的表達,降低HMGB1的表達,減輕炎癥反應,從而起到保護肝臟的作用。本研究發(fā)現(xiàn),與Sham組比較,Model組大鼠脊髓組織中miR-129-5p表達下降,HMGB1 mRNA及蛋白表達升高,說明miR-129-5p、HMGB1參與神經(jīng)病理性疼痛發(fā)生。與Model組比較,Pae組大鼠脊髓組織中miR-129-5p表達升高,HMGB1 mRNA及蛋白表達下降,說明Pae可通過升高miR-129-5p表達從而抑制HMGB1的表達,該過程可能與減輕神經(jīng)性疼痛有關(guān)。抑制miR-339-5p后,大鼠MWT、TWL降低,脊髓組織中IL-1β、TNF-α水平均升高,表明miR-129-5p與神經(jīng)病理性疼痛緊密相關(guān),抑制miR-129-5p可加重神經(jīng)病理性疼痛,并逆轉(zhuǎn)Pae對神經(jīng)病理性疼痛的療效。在抑制miR-339-5p的基礎(chǔ)上,使用HMGB抑制劑GA干預,可提高大鼠MWT、TWL,降低脊髓組織中IL-1β、TNF-α水平,說明抑制HMGB1表達,可減輕神經(jīng)疼痛,且miR-339-5p對神經(jīng)病理性疼痛的影響可能與介導HMGB1表達有關(guān)。雙熒光素酶報告基因結(jié)果表明,miR-339-5p與HMGB1的3′-UTR存在互補結(jié)合位點,HMGB1是miR-339-5p的靶基因,miR-339-5p對神經(jīng)病理性疼痛的影響與靶向HMGB1有關(guān)。
綜上所述,Pae通過上調(diào)miR-339-5p的表達,進而靶向抑制HMGB1表達,抑制炎癥反應,可成為臨床治療神經(jīng)病理性疼痛的關(guān)鍵靶點。
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(收稿日期:2022-03-24)
(本文編輯 王雅潔)