摘要 目的： 通過構(gòu)建冠心病大鼠模型，探討微小RNA-362-3p（miR-362-3p）是否通過調(diào)節(jié)有絲分裂原活性蛋白激酶1（MAPK1）、蛋白酪氨酸磷酸酶基因（PTEN）、蛋白激酶B（AKT），參與影響冠心病大鼠的心肌細(xì)胞凋亡和內(nèi)皮細(xì)胞損傷。 方法： 構(gòu)建冠心病大鼠模型，隨即將大鼠分為健康組、冠心病組、miR-362過表達(dá)組、過表達(dá)陰性對照組、過表達(dá)＋MAPK1激活組，蘇木精-伊紅（HE）染色觀察各組大鼠冠狀動(dòng)脈組織病理學(xué)變化；原位末端標(biāo)記測定法（TUNEL）檢測各組大鼠心肌細(xì)胞凋亡情況；酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測血清中炎性相關(guān)因子及一氧化氮（NO）、內(nèi)皮素（ET）-1等含量；蛋白免疫印跡法（Western Blot）檢測各組大鼠冠狀動(dòng)脈組織中MAPK、磷酸化MAPK（p-MAPK）、PTEN、AKT、磷酸化AKT（p-AKT）信號(hào)通路蛋白表達(dá)水平。 結(jié)果： 健康組大鼠冠狀動(dòng)脈組織完好；與健康組比較，冠心病組大鼠冠狀動(dòng)脈組織增厚明顯，心肌細(xì)胞凋亡率、血清腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）、ET-1含量及冠狀動(dòng)脈組織p-MAPK/MAPK、PTEN蛋白表達(dá)量升高，NO含量、p-AKT/AKT降低（ P ＜0.05）；與過表達(dá)陰性對照組比較， miR-362過表達(dá)組冠狀動(dòng)脈組織厚度減小，心肌細(xì)胞凋亡率及血清TNF-α、IL-1β、IL-6、ET-1含量、冠狀動(dòng)脈組織p-MAPK/MAPK、 PTEN蛋白表達(dá)量降低，NO含量、p-AKT/AKT升高（ P ＜0.05）；與miR-362過表達(dá)組比較，過表達(dá)＋MAPK1激活組冠狀動(dòng)脈組織增厚明顯，且心肌細(xì)胞凋亡率、血清TNF-α、IL-1β、IL-6、ET-1含量及冠狀動(dòng)脈組織p-MAPK/MAPK、PTEN蛋白表達(dá)量升高，NO含量、p-AKT/AKT降低（ P ＜0.05）；冠心病組與過表達(dá)陰性對照組比較，各項(xiàng)指標(biāo)比較差 異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ P ＞0.05）。 結(jié)論： miR-362-3p 過表達(dá)可調(diào)控MAPK1/PTEN/AKT信號(hào)通路，緩解內(nèi)皮細(xì)胞損傷，減輕心肌組織損傷，從而改善冠心病病情。

關(guān)鍵詞 "冠心??；微小RNA-362-3p；有絲分裂原活性蛋白激酶1；蛋白酪氨酸磷酸酶基因；蛋白激酶B；心肌細(xì)胞凋亡；內(nèi)皮細(xì)胞損傷；實(shí)驗(yàn)研究

doi： "10.12102/j.issn.1672-1349.2023.14.009

miR-362-3p Regulates Cardiomyocyte Apoptosis and Endothelial Cell Injury in Rats with Coronary Heart Disease Through MAPK1/PTEN/AKT Signaling Pathway

XIONG Yunhui， WANG Juan， DENG Haihua

Fuyong People′s Hospital， Bao′an District， Shenzhen 518100， Guangdong， China

Corresponding Author "WANG Juan， E-mail： stingok@163.com

Abstract Objective： To explore "microRNA-362-3p（miR-362-3p） regulates mitogen-active protein kinase 1（MAPK1），protein tyrosine phosphatase gene（PTEN），and protein kinase B（AKT），involved in myocardial cell apoptosis and endothelial cell injury in rats with coronary heart disease. "Methods： The rat model of coronary heart disease was constructed.The rats were divided into the healthy group，coronary heart disease group，miR-362 overexpression group，overexpression negative control group，and overexpression＋MAPK1 activation group.Hematoxylin-eosin（HE） staining was used to observe the pathological changes of coronary arteries in rats in each group.The terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling（TUNEL） assay was used to detect myocardial cell apoptosis in each group.Enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA） was used to detect inflammation-related factors，nitric oxide（NO），and endothelin（ET）-1 in serum.The expression levels of MAPK，p-MAPK，PTEN，AKT，and p-AKT signaling pathway proteins in coronary artery tissue of rats in each group were detected by Western Blot. "Results： The coronary artery tissue of the rats in the healthy group was intact.Compared with the healthy group，the coronary artery tissue of the rats in the coronary heart disease group was significantly thickened.The myocardial cell apoptosis rate，serum tumor necrosis factor-α（TNF-α），interleukin-1β（IL-1β），interleukin-6（IL-6），ET-1 content，coronary artery tissue p-MAPK/MAPK，and PTEN protein expression increased;NO content，p-AKT/AKT decreased（ P ＜0.05）.Compared with the overexpression negative control group，the thickness of coronary artery tissue in the miR-362 overexpression group was reduced，the apoptosis rate of cardiomyocytes，serum TNF-α，IL-1β，IL-6，ET-1 contents，coronary artery tissue p- MAPK/MAPK，and PTEN protein expressions decreased，while NO content and p-AKT/AKT increased（ P ＜0.05）.Compared with the miR-362 overexpression group，coronary artery tissue thickening was obvious in the overexpression ＋ MAPK1 activation group;cardiomyocytes apoptosis rate，serum TNF-α，IL-1β，IL-6，ET-1 content，coronary artery tissue p-MAPK/MAPK，and PTEN protein expression increased;NO content and p-AKT/AKT decreased（ P ＜ 0.05）.Compared with the overexpression negative control group，there was no statistically significant difference in each index between the coronary heart disease group（ P ＞0.05）. "Conclusion： Overexpression of miR-362-3p could regulate the MAPK1/PTEN/AKT signaling pathway，relieve endothelial cell damage，and reduce myocardial tissue damage，thereby improving the condition of coronary heart disease.

Keywords "coronary heart disease; microRNA-362-3p; mitogen-activated protein kinase 1; protein tyrosine phosphatase gene; protein kinase B; cardiomyocyte apoptosis; endothelial cell injury; experimental study

冠心病是一種常見的心臟系統(tǒng)疾病，往往由于沉積物積聚堵塞動(dòng)脈壁，造成冠狀動(dòng)脈堵塞引發(fā)，導(dǎo)致病人心肌組織損傷，產(chǎn)生胸部疼痛，伴隨強(qiáng)烈的急迫感，引發(fā)呼吸急促［1］。目前，該疾病主要通過防治血栓類藥物進(jìn)行治療，但往往難以根除疾病，需要長期服藥控制缺血癥狀，防止動(dòng)脈壁堵塞［2］，故急需開發(fā)具有針對性的治療藥物緩解疾病復(fù)發(fā)。有絲分裂原活性蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）作為酪氨酸激酶系統(tǒng)，介導(dǎo)細(xì)胞間物質(zhì)傳遞和各種生理反應(yīng)［3］。有研究指出MAPK的激活在冠心病發(fā)作中發(fā)揮重要作用，可進(jìn)一步加重冠心病病情；在心肌組織再灌注引發(fā)的心肌組織損傷中可加劇細(xì)胞損傷［4］。MAPK的激活可促進(jìn)蛋白酪氨酸磷酸 酶基因（phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome "ten，PTEN）的表達(dá)［5］。PTEN與下游蛋白激酶B（protein kinase B，AKT）共同參與細(xì)胞凋亡，PTEN可抑制AKT的表達(dá)和激活，加重心肌損傷，PTEN/AKT通路在調(diào)控心肌損傷過程中發(fā)揮重要作用［6-7］。

微小RNA（miRNA）是一種長度在20～23個(gè)核苷酸之間的非編碼RNA，隨著近年來分子生物學(xué)的進(jìn)一步發(fā)展，miRNA在生物中發(fā)揮作用和具體功能被進(jìn)一步揭示，可靶向調(diào)控多種基因的表達(dá)，抑制蛋白合成， 從而影響生理進(jìn)程［8］。微小RNA-362-3p（miR-362-3p） 可靶向調(diào)控多種蛋白表達(dá)，從而調(diào)控細(xì)胞凋亡［9］。miR-362-3p也被證實(shí)可參與緩解動(dòng)脈粥樣硬化，抑制組織中血管平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移［10］。通過TargetScan數(shù)據(jù)庫對miR-362-3p進(jìn)行靶基因預(yù)測，發(fā)現(xiàn)MAPK1為miR-362-3p潛在的靶基因。因此，本研究推測miR-362-3p很可能通過調(diào)控MAPK1及其下 游蛋白，在治療冠心病過程中發(fā)揮重要作用，相關(guān)機(jī) "制有待明確，故通過構(gòu)建冠心病大鼠模型，探究 "miR-362-3p是否參與治療冠心病，并探討其內(nèi)在機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器

miR-362-3p agomir及其陰性對照由吉瑪生物科技有限公司設(shè)計(jì)合成，MAPK1激活劑Scutebarbatine A（貨號(hào)HY-N1260）購自MCE公司，垂體后葉素（貨號(hào)YM-QV7071）購自遠(yuǎn)慕生物（上海）有限公司，白細(xì)胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測試劑盒（貨號(hào)ZN2877）購自百奧萊博生物科技有限公司，白細(xì)胞介素-6（interleukin-6，IL-6）ELISA檢測試劑盒（貨號(hào)AZ0652）購自普利萊基因技術(shù)有限公司，血清腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis "factor-α，TNF-α）ELISA檢測試劑盒（貨號(hào)ZY-TNFa-Ra） 購自澤葉生物科技有限公司，一氧化氮（nitric oxide，NO）ELISA檢測試劑盒（貨號(hào)ZK-R3046）購自深圳子科生物科技有限公司，內(nèi)皮素-1（endothelin1，ET-1）ELISA檢測試劑盒（貨號(hào)LZ-R6682）購自上海聯(lián)祖生物科技有限公司，蘇木精-伊紅（HE）染色試劑盒（貨號(hào)C0105S）、DNA斷裂的原位缺口末端標(biāo)記測定法（TUNEL）染色試劑盒（貨號(hào)C1091）購自碧云天生物科技有限公司，GAPDH抗體（貨號(hào)ab9485）、MAPK抗體（貨號(hào)ab170099）、p-MAPK抗體（貨號(hào)ab207483）、PTEN抗體（貨號(hào)ab267787）、AKT抗體（貨號(hào)ab38449）購于Abcam公司，p-AKT抗體（貨號(hào)9271T）購自美國CST公司，凝膠成像系統(tǒng)（WD-9413B），購自寶醫(yī)療器械。

1.2 動(dòng)物模型的構(gòu)建

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物購自山東艾萊克生物科技有限公司［SCXK（魯）2019 0007］，60只清潔級(jí)SD大鼠，4月齡，體質(zhì)量（160±15）g，隨機(jī)將大鼠分為健康組、 冠心病組、miR-362過表達(dá)組、過表達(dá)陰性對照組、過表達(dá)＋ MAPK1激活組，每組12只。健康組選用常規(guī)飼料飼喂，其余各組大鼠均選用高脂飼料飼喂。連續(xù)飼喂6周，除健康組外，其余各組大鼠腹腔注射垂體后葉素30 μg/kg，每日1次，連續(xù)注射3 d，采用心電圖檢測大鼠，若ST段下移且T波改變，則視為具有典型冠心病癥狀，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)，同期健康組大鼠注射等劑量的生理鹽水。miR-362過表達(dá)組大鼠腹腔注射miR-362-3p agomir 20 nmol/kg，過表達(dá)陰性對照組大鼠腹腔注射agomir 生理鹽水20 nmol/kg，過表達(dá)＋MAPK1激活組大鼠腹腔注射miR-362-3p agomir 20 nmol/kg和MAPK1激活劑Scutebarbatine A 5 mg/kg，健康組、冠心病組大鼠腹腔注射等量的生理鹽水，每日1次，連續(xù)注射6周。

1.3 ELISA檢測血清炎性相關(guān)因子、血管內(nèi)皮活性物質(zhì)含量

末次干預(yù)12 h后，麻醉并處死各組大鼠，用手術(shù)剪剪開頸部皮膚，暴露頸總動(dòng)脈，頸總動(dòng)脈取血6 mL，4 ℃，以3 000 r/min離心10 min，取上層清液，依次按照ELISA檢測試劑盒說明書方法檢測炎性因子IL-6、IL-1β、TNF-α和血管內(nèi)皮活性物質(zhì)NO、ET-1的含量。

1.4 HE染色觀察冠狀動(dòng)脈組織病理學(xué)變化

各組大鼠取血后暴露心臟，切開右心耳處，緩慢灌注生理鹽水至左心室，直至切口處流出清澈的液體，換用10%甲醛灌注心臟，灌注結(jié)束后分離冠狀動(dòng)脈，部分置于10%甲醛中固定，部分液氮處理后研磨至粉，凍存冰箱備用。固定12 h后取出冠狀動(dòng)脈組織，不同乙醇梯度脫水，石蠟包埋后制作切片，切片厚度4 μm，隨后切片脫蠟至水，按照HE染色試劑盒說明書方法進(jìn)行染色，清水洗凈后梯度脫水，二甲苯透明，中性樹脂封片，置于顯微鏡下觀察。

1.5 TUNEL檢測心肌細(xì)胞凋亡

剝離各組大鼠心肌組織，置于4%多聚甲醛中固定，12 h后取出，不同濃度乙醇梯度脫水，石蠟包埋后制作切片，切片厚度4 μm，脫蠟至水，按照TUNEL染色試劑盒說明書方法進(jìn)行染色，梯度脫水，二甲苯透明，中性樹脂封片，置于顯微鏡下觀察，記錄凋亡細(xì)胞數(shù)，計(jì)算心肌細(xì)胞凋亡率。

1.6 蛋白免疫印跡法（Western Blot）檢測冠狀動(dòng)脈組織MAPK1/PTEN/AKT通路蛋白表達(dá)

取出凍存?zhèn)溆玫墓跔顒?dòng)脈組織粉末，加入少量蛋白裂解液，充分振蕩混勻，確保蛋白充分裂解，加入蛋白提取液，充分振蕩混勻，靜置片刻后離心獲取上層蛋白，定量檢測后加入上樣緩沖液，加熱變性后加入蛋白孔道中，跑膠后轉(zhuǎn)膜，脫脂牛奶封閉2 h，加入一抗（GAPDH抗體、MAPK抗體、p-MAPK抗體、PTEN抗體、AKT抗體、p-AKT抗體，1∶1 500），4 ℃孵育過夜。TBST清洗3次，加入二抗（1∶1 000），室溫孵育40 min，TBST清洗3次，將發(fā)光液混合后均勻倒于膜上，浸泡1 min，隨后取出擦干多余水分，置于Syngene光密度掃描系統(tǒng)進(jìn)行條帶灰度分析。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

使用SPSS 22.0軟件分析數(shù)據(jù)，定量資料符合正態(tài)分布以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x "± s ）表示，組間差異采用單因素方差分析（One-Way ANOVA），兩兩比較采用SNK- q 檢驗(yàn)，以 P ＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 miR-362-3p過表達(dá)對大鼠冠狀動(dòng)脈組織病理學(xué)變化的影響

健康組大鼠冠狀動(dòng)脈組織完整無損，細(xì)胞排列緊密，組織內(nèi)膜厚度較??；與健康組比較，冠心病組、過表達(dá)陰性對照組大鼠冠狀動(dòng)脈組織增厚明顯，細(xì)胞間排列松散；與過表達(dá)陰性對照組比較，miR-362過表達(dá)組大鼠冠狀動(dòng)脈組織厚度明顯減小，組織逐漸恢復(fù)正常， 細(xì)胞排列較為緊密；與miR-362過表達(dá)組比較，過表達(dá)＋ MAPK1激活組大鼠冠狀動(dòng)脈組織恢復(fù)緩慢，厚度未出現(xiàn)明顯減小，細(xì)胞排列較為松散。詳見圖1。

2.2 miR-362-3p過表達(dá)對大鼠心肌細(xì)胞凋亡的影響

與健康組比較，冠心病組大鼠心肌細(xì)胞凋亡率升高（ P ＜0.05）；與過表達(dá)陰性對照組比較，miR-362過 表達(dá)組大鼠心肌細(xì)胞凋亡率降低（ P ＜0.05）；與 miR-362過表達(dá)組比較，過表達(dá)＋MAPK1激活組大鼠心肌細(xì)胞凋亡率升高（ P ＜0.05）；冠心病組與過表達(dá)陰性對照組比較，細(xì)胞凋亡率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ P ＞0.05）。詳見表1。

2.3 miR-362-3p過表達(dá)對內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)、細(xì)胞損傷的影響

與健康組比較，冠心病組大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6、ET-1含量升高，NO含量降低（ P ＜0.05）；與過表 達(dá)陰性對照組比較，miR-362過表達(dá)組大鼠血清TNF-α、 IL-1β、IL-6、ET-1含量降低，NO含量升高（ P ＜0.05）； 與miR-362過表達(dá)組比較，過表達(dá)＋MAPK1激活組血 清TNF-α、IL-1β、IL-6、ET-1含量升高，NO含量降低（ P ＜ 0.05）；冠心病組與過表達(dá)陰性對照組比較，血清各項(xiàng)指標(biāo)含量比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ P ＞0.05）。詳見表2。

2.4 miR-362-3p過表達(dá)對MAPK1/PTEN/AKT信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響

與健康組比較，冠心病組大鼠冠狀動(dòng)脈組織 p-MAPK/MAPK、PTEN蛋白表達(dá)量升高，p-AKT/AKT降低（ P ＜0.05）；與過表達(dá)陰性對照組比較，miR-362過表達(dá)組大鼠冠狀動(dòng)脈組織p-MAPK/MAPK、PTEN蛋 白表達(dá)量降低，p-AKT/AKT升高（ P ＜0.05）；與miR-362 過 表達(dá)組比較，過表達(dá)＋MAPK1激活組冠狀動(dòng)脈組織 p-MAPK/MAPK、PTEN蛋白表達(dá)量升高，p-AKT/AKT 降低（ P ＜0.05）；冠心病組與過表達(dá)陰性對照組比較，大鼠冠狀動(dòng)脈組織p-MAPK/MAPK、p-AKT/AKT、PTEN蛋白表達(dá)量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ P ＞0.05）。詳見表3、圖2。

3 討 論

冠心病是心臟系統(tǒng)中常見的一類疾病，常由于動(dòng)脈壁堵塞造成心肌缺血引發(fā)損傷，最終造成病人心臟及呼吸功能異常，嚴(yán)重時(shí)會(huì)危及生命［11］。該疾病主要通過藥物治療，克服冠狀動(dòng)脈組織管壁堵塞從而緩解心肌損傷，冠狀動(dòng)脈組織病理學(xué)觀察被認(rèn)為是評(píng)估冠心病發(fā)病情況的重要依據(jù)［12］。本研究參照文獻(xiàn)［13］方法，采用高脂飼料喂食法構(gòu)建冠心病大鼠模型，以冠心病癥狀心電圖作為造模成功標(biāo)準(zhǔn)，發(fā)現(xiàn)冠心病大鼠冠狀動(dòng)脈組織管壁增厚明顯，細(xì)胞排列松散，再次表明大鼠具有冠心病癥狀，模型構(gòu)建成功。

有研究表明，miRNA在調(diào)控蛋白表達(dá)中發(fā)揮重要作用，利用miRNA調(diào)控疾病相關(guān)蛋白從而改善疾病的研究逐漸增多［14］。目前發(fā)現(xiàn)多種miRNA參與調(diào)控冠心病，如miR-145在冠心病病人體內(nèi)表達(dá)量降低，加劇病情發(fā)作［15］。有研究發(fā)現(xiàn)，miR-362-3p可參與緩解動(dòng)脈粥樣硬化，減緩冠心病發(fā)作，但具體的作用機(jī)制尚未明確［16］。本研究推測miR-362-3p可緩解冠狀動(dòng)脈組織硬化，參與治療冠心病，并通過過表達(dá)miR-362-3p發(fā)現(xiàn)，大鼠冠狀動(dòng)脈組織管壁厚度明顯變薄，表明miR-362-3p可恢復(fù)冠狀動(dòng)脈組織，改善疾病。有文獻(xiàn)指出，冠心病可造成心肌組織損傷，引發(fā)心肌細(xì)胞凋亡，造成內(nèi)皮細(xì)胞損傷，進(jìn)一步加劇病情［17］。炎癥反應(yīng)與內(nèi)皮細(xì)胞損傷息息相關(guān)，炎性相關(guān)因子和血管內(nèi)皮活性物質(zhì)在內(nèi)皮細(xì)胞損傷過程中含量激增，被認(rèn)為是評(píng)估內(nèi)皮細(xì)胞損傷的重要標(biāo)志［18］。本研究發(fā)現(xiàn)，冠心病大鼠心肌細(xì)胞凋亡率及血清TNF-α、IL-1β、IL-6、ET-1含量升高，NO含量降低；而miR-362-3p過表達(dá)后，大鼠心肌細(xì)胞凋亡率及血清TNF-α、IL-1β、IL-6、ET-1含量降低，NO含量升高，且冠狀動(dòng)脈組織趨于正常，表明過表達(dá)miR-362-3p可抑制心肌細(xì)胞凋亡，緩解內(nèi)皮細(xì)胞損傷，從而治療疾病，但具體的作用機(jī)制有待明確。

有文獻(xiàn)指出，MAPK可參與調(diào)控細(xì)胞凋亡，加重心肌損傷引發(fā)疾病，MAPK的激活可促進(jìn)下游PTEN的表達(dá)，MAPK/PTEN通路激活在心肌重構(gòu)病理過程中起負(fù)調(diào)控作用，可加劇冠心病發(fā)作［19］。PTEN可抑制下游AKT的表達(dá)，引發(fā)內(nèi)皮損傷，MAPK1/PTEN/AKT信號(hào)通路蛋白在心肌損傷過程中發(fā)揮重要作用［20］。本研究發(fā)現(xiàn)，冠心病大鼠冠狀動(dòng)脈組織PTEN蛋白表達(dá)量和MAPK磷酸化水平升高，AKT磷酸化水平降低，而miR-362-3p過表達(dá)后，PTEN蛋白表達(dá)量和MAPK磷酸化水平降低，AKT磷酸化水平升高，推測miR-362-3p可通過調(diào)控MAPK1/PTEN/AKT信號(hào)通路，參與影響冠心病病情。為進(jìn)一步證實(shí)，本研究在miR-362-3p過表達(dá)的同時(shí)激活MAPK，發(fā)現(xiàn)PTEN蛋白表達(dá)量和MAPK磷酸化水平升高，AKT磷酸化水平降低，同時(shí)大鼠心肌細(xì)胞凋亡率及血清TNF-α、IL-1β、IL-6、ET-1含量升高，NO含量降低，冠狀動(dòng)脈組織增厚且恢復(fù)緩慢。

綜上所述，miR-362-3p過表達(dá)可調(diào)控MAPK1/PTEN/AKT 信號(hào)通路，抑制PTEN表達(dá)和MAPK磷酸化，促進(jìn)AKT激活，緩解內(nèi)皮組織炎癥反應(yīng)，減少血管內(nèi)皮活性物質(zhì)，從而緩解內(nèi)皮細(xì)胞損傷，減輕心肌組織損傷，改善冠心病病情。但miR-362-3p調(diào)控機(jī)制中是否有其他通路間接參與調(diào)控冠心病病情，還需進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)加以驗(yàn)證。

參考文獻(xiàn)：

［1］ "JENKINS D A，JACK B，ROBINSON H A， et al. Adiposity-mortality relationships in type 2 diabetes，coronary heart disease，and cancer subgroups in the UK biobank，and their modification by smoking［J］.Diabetes Care，2018，41（9）：1878-1886.

［2］ "MEI Y X，WU H，ZHANG H Y， et al. Health-related quality of life and its related factors in coronary heart disease patients：results from the Henan Rural Cohort study［J］.Sci Rep，2021，11（1）：5011-5014.

［3］ "ZHU Y，YANG T R，DUAN J L， et al. MALAT1/miR-15b-5p/MAPK1 mediates endothelial progenitor cells autophagy and affects coronary atherosclerotic heart disease via mTOR signaling pathway［J］.Aging，2019，11（4）：1089-1109.

［4］ "YANG L，ZHANG C，CHEN J， et al. Shenmai injection suppresses "multidrug resistance in MCF-7/ADR cells through the MAPK/NF-κB "signalling pathway［J］.Pharm Biol，2020，58（1）：276-285.

［5］ ""ZHOU L L，YANG K，DUNAWAY S， et al. Suppression of MAPK signaling "in BRAF-activated PTEN-deficient melanoma by blocking β-catenin ""signaling in cancer-associated fibroblasts［J］.Pigment Cell amp; Melanoma Research，2018，31（2）：297-307.

［6］ "吳若霞，李正陽，任婷，等.加味丹參飲結(jié)合miR-21對缺血再灌注損傷心肌細(xì)胞的影響研究［J］.中國藥理學(xué)通報(bào)，2020，36（2）：277-281.

［7］ "朱宏文，喻溥蛟，許嘉鴻.MiR-19b通過激活A(yù)kt信號(hào)通路保護(hù)心肌細(xì)胞凋亡［J］.上海大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2019，25（1）：10-17.

［8］ "JIA Q W，CHEN Z H，DING X Q， et al. Predictive effects of circulating miR-221，miR-130a and miR-155 for coronary heart disease：a multi-ethnic study in China［J］.Cell Physiol Biochem，2017，42（2）：808-823.

［9］ "SHEN H X，LI W J，TIAN Y， et al. Upregulation of miR-362-3p modulates proliferation and anchorage-independent growth by directly targeting Tob2 in hepatocellular carcinoma［J］.Journal of Cellular Biochemistry，2015，116（8）：1563-1573.

［10］ "LI M，LIU Q，LEI J， et al. MiR-362-3p inhibits the proliferation and migration of vascular smooth muscle cells in atherosclerosis by targeting ADAMTS1［J］.Biochem Biophys Res Commun，2017，493（1）：270-276.

［11］ "KIVINEN P，SULKAVA R，HALONEN P， et al. Coronary heart disease mortality trends during 50 years as explained by risk factor changes：the European cohorts of the seven countries study［J］.Eur J Prev Cardiol，2019，27（9）：988-998.

［12］ "LIN A，NITESH N，JEREMY Y， et al. Pericoronary adipose tissue computed tomography attenuation distinguishes different stages of coronary artery disease：a cross-sectional study［J］.Eur Heart J Cardiovasc Imaging，2021，22（3）：298-306.

［13］ "曹雪明，朱娜.黃連素對冠心病大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)機(jī)制研究［J］.中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2018，46（5）：30-33.

［14］ "劉新橋.芪藶強(qiáng)心膠囊對冠心病心力衰竭病人氧化應(yīng)激及外周血miRNA-21和miRNA-145表達(dá)的影響［J］.中國動(dòng)脈硬化雜志，2020，28（8）：697-701.

［15］ "蔡曉航.冠心病病人血清miR-145、TREML4水平變化及臨床意義［J］.四川生理科學(xué)雜志，2020，42（1）：26-29.

［16］ "李美玲.MiR-362-3p靶向調(diào)控ADAMTS1基因參與動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展的機(jī)制研究［D］.重慶：重慶醫(yī)科大學(xué)，2018.

［17］ "孫平，侯東彬，邱靜，等.瑞舒伐他汀與阿托伐他汀對早發(fā)冠心病急性心肌梗死病人血管內(nèi)皮功能和心臟功能的影響［J］.基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué)，2016，35（8）：1893-1898.

［18］ "張曉蕾，許國瑩，王士珍，等.MiR-186-5p對冠心病大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷及FGF2/FGFR1信號(hào)通路的影響［J］.天津醫(yī)藥，2021，49（11）：1169-1174.

［19］ "SHUHUI C，ELISA C，CATHERINE B， et al. Beside P53 and PTEN：identification of molecular alterations of the RAS/MAPK and PI3K/AKT signaling pathways in high-grade serous ovarian carcinomas to determine potential novel therapeutic targets［J］.Oncol Lett，2016，12（5）：3264-3272.

［20］ ""ZHANG Q，WU X，YANG J.miR-194-5p protects against myocardial "ischemia/reperfusion injury via MAPK1/PTEN/AKT pathway［J］.Ann Transl Med，2021，9（8）：654-656.

（收稿日期：2022-03-29）

（本文編輯 王雅潔）