趙美玉， 廖佳欣， 劉志強， 汪建國， 孫紅晨， 楊開倫

（1.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，新疆 烏魯木齊 830052；2.新疆上品美羊科技有限公司，新疆 昌吉 831100）

羔羊是養(yǎng)羊業(yè)的基礎(chǔ)， 羔羊培育是肉羊生產(chǎn)中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)， 其培育的優(yōu)劣直接影響到成年后的生產(chǎn)性能。 羔羊在出生后， 由于自身機能不健全，很容易受到環(huán)境條件、營養(yǎng)水平變化的影響，導(dǎo)致羔羊生長發(fā)育遲緩，影響成年后的育肥速度，使養(yǎng)殖者經(jīng)濟效益受損（張海雷，2022）。 因此，如何讓這一時期的羔羊快速、 健康的生長成為了當(dāng)前養(yǎng)殖業(yè)急需解決的問題。 D-Asp 已被證明具有促進動物生長的作用。Berg（1953）研究表明，在飼糧中添加適量D-Asp 可以使小鼠的生長性能得到有效提高。 在熱應(yīng)激條件下，飼糧添加適量DAsp 或添加可產(chǎn)生D-Asp 的活菌，可通過調(diào)節(jié)神經(jīng)系統(tǒng)有效降低直腸溫度，產(chǎn)生鎮(zhèn)靜作用，從而改善雛雞的采食量以及生長性能（Erwan 等，2014）。除了在緩解雛雞熱應(yīng)激方面有很大潛力，D-Asp也可以通過改變腸道微生物菌群區(qū)系影響斷奶仔豬的生長性能（王晨昱等，2021）。 基于D-Asp 生物學(xué)功能的研究及在其他動物上飼喂的結(jié)果。 本試驗通過對哺乳期羔羊及生長期羔羊補喂不同水平的D-Asp， 探究其對哺乳期羔羊及生長期羔羊生長以及生長軸相關(guān)激素水平的影響， 為通過營養(yǎng)代謝手段在哺乳期羔羊及生長期羔羊上的應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗時間與地點 本試驗于2022 年5 月10日至8 月1 日在新疆昌吉上品美羊科技有限公司進行。

1.2 試驗設(shè)計與分組 采用單因素多水平試驗設(shè)計方法。母羊產(chǎn)羔后第8 天，將體重（5.77±0.7）kg、日齡及胎次相近的32 只羔羊隨機均分為4 組，每組8 只 （4♂+4♀）， 分別為對照組、5 D-Asp組、10 D-Asp 組、20 D-Asp 組， 進行為期38 d的試驗。 所有試驗羔羊所喂試驗飼糧組成及營養(yǎng)水平一致，在此基礎(chǔ)上，試驗組補喂不同劑量的D-Asp（購自湖北信康醫(yī)藥化工有限公司，有效含量≥98%）。 5 D-Asp 組、10 D-Asp 組、20 D-Asp 組每只羊每天D-天冬氨酸的有效補喂量為5、10、20 mg/kg BW。 本試驗中D-Asp 的補喂量參照Li 等（2018）的研究結(jié)果。 將D-Asp 溶于熱水中，羔羊出生后第8 天補喂D-Asp，根據(jù)羔羊體重情況每7 d 調(diào)整一次補喂量，補喂到45 d斷奶結(jié)束。

1.3 飼養(yǎng)管理 所有羔羊隨母羊飼養(yǎng)于同一高床圈舍中，羔羊出生后7 d 正常隨母吮乳，第7 天用奶瓶裝熱水對羔羊進行誘導(dǎo)采食， 第8 天時試驗正式開始。 試驗期間，羔羊自由采食與飲水。 7 d開始補喂精料，試驗羔羊進行群飼，于09：00、18：00兩個時段補喂D-Asp。 羔羊飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 羔羊顆粒飼料組成及營養(yǎng)水平（干物質(zhì)基礎(chǔ)）%

1.4 指標(biāo)測定

1.4.1 生長性能的測定 試驗開始時哺乳期羔羊的體重記為初始體重（第7 天體重），試驗開始后第7、14、21、28、38 天進行一次稱重， 每次稱重在羔羊哺乳后與母羊分隔2 h 后進行， 稱重結(jié)束后計算平均總增重、平均日增重。

1.4.2 血漿樣品采集及處理 采集哺乳期羔羊試驗第14、28 天， 生長期羔羊試驗第20、45 天的頸靜脈血液至肝素鈉真空采血管中，3500 r/min 離心15 min， 用移液槍吸取血漿至2 mL Eppendorf管中，-20 ℃保存待測。

1.4.3 血漿指標(biāo)測定 本試驗中葡萄糖（GLU）、尿素（UREA）、甘油三酯（TG）、游離脂肪酸（NEFA）測定使用比色法， 生長激素 （GH）、 胰島素（INS）、胰島素樣生長因子-Ⅰ（IGF-Ⅰ）、生長激素釋放激素 （GHRH） 測定使用放射免疫分析方法， 血漿生化指標(biāo)均送至北京華英生物技術(shù)研究所進行檢測。

1.5 統(tǒng)計分析 試驗數(shù)據(jù)采用Excel 2010 進行初步整理，采用SPSS 24.0 統(tǒng)計軟件的ANOVA 程序進行單因素方差分析， 差異顯著則用Duncan氏法進行多重比較，采用正交多項式對比，檢驗血漿中生化指標(biāo)的線性和二次效應(yīng)，0.05≤P＜0.10為有差異趨勢， 以P＜0.05 為差異顯著水平，P＜0.01 為差異極顯著水平。

2 結(jié)果與分析

2.1 補喂D-Asp 對湖羊哺乳期羔羊生長的影響由表2 可知， 在7 日齡到45 日齡的體重、1 ～38 d總增重中10 D-Asp 組高于CON 組。與CON 組相比，試驗組補喂D-Asp 對哺乳期羔羊末重、總增重和平均日增重?zé)o顯著影響（P＞0.05）。

表2 補喂D-天冬氨酸對湖羊哺乳期羔羊生長的影響

2.2 補喂D-Asp 對湖羊哺乳期羔羊生長軸相關(guān)激素水平的影響 由表3 可知，補喂不同劑量D-天冬氨酸的羔羊14 日齡血漿中，試驗組生長激素釋放激素、生長激素、胰島素樣生長因子-Ⅰ的含量隨D-天冬氨酸的補喂水平呈線性增加。 其中20 D-Asp 組生長激素釋放激素、生長激素、胰島素樣生長因子-Ⅰ的含量與對照組相比顯著升高了32.41%、44.54%、27.72%（P＜0.05）。

表3 補喂D-天冬氨酸對湖羊哺乳期羔羊生長軸相關(guān)激素水平的影響ng/mL

補喂不同劑量D-天冬氨酸的羔羊28 日齡血漿中，試驗組生長激素釋放激素、生長激素、胰島素樣生長因子-Ⅰ的含量隨D-天冬氨酸的補喂水平呈線性增加。 其中20 D-Asp 組生長激素釋放激素、生長激素、胰島素樣生長因子-Ⅰ的含量與對照組相比顯著升高了33.81%、18.92%、32.33%（P＜0.05）。

2.3 補喂D-Asp 對湖羊哺乳期羔羊血液生化指標(biāo)的影響 由表4 可知， 補喂14 d 不同劑量DAsp 的哺乳期羔羊血漿中，5 D-Asp 組、20 D-Asp組尿素的含量與CON 組相比呈下降趨勢， 其中20 D-Asp 組與10 D-Asp 組相比顯著降低了23.82%（P＜0.05）；試驗組胰島素、甘油三酯的含量與CON 組相比呈下降趨勢，其中20 D-Asp 組胰島素的含量與CON 組相比顯著降低了15.92%（P＜0.01），甘油三酯10 D-Asp 組與CON 組相比顯著降低了56.95%（P＜0.05）； 葡萄糖和游離脂肪酸的含量無明顯變化（P＞0.05）。

表4 補喂D-天冬氨酸對湖羊哺乳期羔羊血液生化指標(biāo)的影響

補喂28 d 不同劑量D-Asp 的羔羊血漿中，試驗組尿素含量與CON 相比均有下降的趨勢，其中5 D-Asp 組與CON 組相比顯著降低了26.43%（P＜0.05）；5 D-Asp 組和20 D-Asp 組葡萄糖的含量與CON 組相比有上升的趨勢，10 D-Asp 組葡萄糖的含量與5 D-Asp 組相比顯著降低了13.01%（P＜0.05）；20 D-Asp 組胰島素的含量與CON 組相比顯著降低了12.62%（P＜0.01）；甘油三酯和游離脂肪酸的含量無明顯變化（P＞0.05）。

3 討論

3.1 補喂D-Asp 對湖羊羔羊生產(chǎn)性能的影響研究表明， 適量D-Asp 可以促進動物的生長發(fā)育，特別是對于幼年期的動物效果更為顯著，但是過量添加D-Asp 則會抑制其生長（Berg，1953）。胡鮮等（2021）研究發(fā)現(xiàn)，結(jié)腸炎小鼠直腸灌注DAsp 溶液，12 ～14 d 試驗組小鼠體重顯著提高。張明偉（2022）研究發(fā)現(xiàn)，日糧中添加50 mg/kg DAsp 可以顯著提高斷奶仔豬的體重及平均日增重，過低或過高的D-Asp 對其生長性能未產(chǎn)生顯著影響。 Kimiaki 等（1972）發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加2%D-Asp 會導(dǎo)致雛雞生長抑制。 Erwan 等（2013）研究報道，雛雞口服D-Asp 呈劑量依賴關(guān)系，在短期內(nèi) （口服后30、60、120 min） 會減少食物攝入量。Koyuncuoˇglu 等（1982a）在大鼠中發(fā)現(xiàn)，短期口服D-天冬氨酸的效果與長期口服D-天冬氨酸一致，都對食物攝入量的減少有明顯的影響。本試驗結(jié)果顯示，補喂不同劑量D-Asp 對哺乳期羔羊末重及平均日增重?zé)o顯著影響?？赡苁怯捎谘a喂DAsp 引起的消化道蠕動抑制了食物攝入量， 并且在飼喂含有其他D-氨基酸的飼料中攝入D-Asp會有拮抗作用（Marrett 和Sunde，1965）；其次，口服D-Asp 會引起腦膜中的D-Asp 濃度增加，雖然不知道D-Asp 減少食物攝入量與大腦中D-Asp濃度成比例的確切機制， 但由于主要的攝食中心下丘腦存在于腦膜中，因此D-Asp 可能作為攝食的調(diào)節(jié)器發(fā)揮作用（Erwan 等，2014）。

3.2 補喂D-Asp 對湖羊羔羊生長軸相關(guān)激素水平的影響 生長軸是指從下丘腦、 垂體到靶器官中， 與生長發(fā)育相關(guān)的激素及受體組成的神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)。下丘腦整合動物體內(nèi)外各種信息，通過釋放GHRH 和生長抑素來調(diào)節(jié)垂體GH 的合成和分泌。 而垂體釋放GH 還受血液GH 和IGF-Ⅰ濃度的反饋調(diào)節(jié)（邢力等，2015）。 研究表明，提高機體GH 水平可以顯著促進動物生長， 增加動物骨骼和肌肉細胞的代謝速度（范成莉，2008）。 D’Aniello（2007）研究表明，補充D-Asp 可誘導(dǎo)GH、促黃體生成素和催乳素的釋放， 并增加一氧化氮合酶的活性。 本試驗結(jié)果顯示，補喂D-Asp 提高了羔羊及生長期羔羊GHRH、GH、IGF-Ⅰ的含量。在大腦中D-Asp 通過D-天冬氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶轉(zhuǎn)化為N-甲基-D-天冬氨酸。 馮杰（2004）研究細胞培養(yǎng)結(jié)果顯示，N-甲基-D-天冬氨酸顯著提高了下丘腦細胞游離鈣離子的濃度， 從而激活在正常條件下受鈣調(diào)控的各種酶系統(tǒng)， 可能包括使GHRH 分泌增加。 D’Aniello（2000）等注射D-Asp后1 h，血漿中GH 濃度比基礎(chǔ)水平增加1.96 倍，5 h 后達到基礎(chǔ)水平的2.6 倍。N-甲基-D-天冬氨酸是神經(jīng)興奮性氨基酸天冬氨酸和谷氨酸的有效激動劑。當(dāng)給予嚙齒動物時，興奮性氨基酸會刺激催乳素分泌并改變GH 分泌的脈動模式 （Cass 和Martin，1981）。 血清IGF-Ⅰ水平主要受控于GH和GH 受體水平，Bramel 等（1995）報道，GH 可在轉(zhuǎn)錄水平調(diào)節(jié)IGF-Ⅰ基因的表達。 D-Asp 促進GH 的分泌，GH 與肝臟GH 受體結(jié)合后， 刺激肝臟IGF-Ⅰ合成與釋放。

3.3 補喂D-Asp 對湖羊羔羊血液生化指標(biāo)的影響 蛋白質(zhì)的沉積取決于氨基酸氧化和最終產(chǎn)物（即尿素和氨）形成和排泄的速度。 尿素是機體內(nèi)蛋白質(zhì)代謝的最終產(chǎn)物， 血清中的尿素含量可以直觀的顯示機體的氮代謝情況。 研究表明，GH 處理使豬尿素氮的排泄減少， 并指出GH 可能對蛋白質(zhì)降解后產(chǎn)生的氨基酸有較高的重復(fù)利用率（Tomas 等，1992）。 本試驗結(jié)果顯示，添加D-Asp對羔羊的血清尿素含量顯著降低， 對生長期羔羊的血清尿素含量無顯著影響，但呈下降趨勢?？赡苡捎谘a喂D-Asp 使GH 含量升高，降低血清中尿素的含量。 D-Asp 與機體血糖和胰島素之間的關(guān)系尚不明確。胰島素和IGF-Ⅰ通過高度同源的受體起作用， 這些受體參與相似的細胞內(nèi)信號傳導(dǎo)途徑，補喂D-Asp 增加了哺乳期羔羊及生長期羔羊IGF-Ⅰ的分泌，IGF-Ⅰ在胰島細胞內(nèi)的主要作用是刺激生長抑素釋放， 從而降低胰島素分泌（Leahy 和Vandekerkhove，1990）。 Koyuncuoˇglu 等（1982b）研究發(fā)現(xiàn)，口服D-Asp 小鼠甘油三酯和糖原含量低于對照組。 本試驗結(jié)果顯示，補喂14 d生長期羔羊10 mg/kg D-Asp BW 降低了甘油三酯含量，可能是由于補喂D-Asp 減少食物攝入量引起的。 從循環(huán)脂蛋白甘油三酯中釋放脂肪酸是通過脂蛋白脂肪酶進行的，研究表明，饑餓會降低脂蛋白脂肪酶活性（Jae-Joon 等，1998）。使參與甘油三酯水解的活性內(nèi)皮結(jié)合脂蛋白脂肪酶的數(shù)量減少 （Dijk 等，2016）， 降低血漿甘油三酯水平（Binod 等，2018）。

4 結(jié)論

湖羊哺乳期羔羊補喂D-Asp 能顯著提高血漿GHRH 水平，進而提高GH、IGF-I 水平，且具有劑量依賴性， 但對湖羊哺乳期羔羊生長總體無顯著影響，其原因需要進一步研究。