王丹 李琳 聶丹丹 王守彬

摘 要：目的：建立CI-LLME-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)果蔬中8種殺菌劑殘留量的方法。方法：使用冷凍誘導(dǎo)液液微萃取前處理技術(shù)結(jié)合三重四極桿分析技術(shù)檢測(cè)果蔬產(chǎn)品中8種殺菌劑的殘留量。結(jié)果：在給定的濃度范圍內(nèi)8種殺菌劑存在良好的線性關(guān)系（R2＞0.990）；方法檢出限為0.04～1.83 μg·kg-1，定量限為0.12～5.49 μg·kg-1。10.0 μg·L-1、20.0 μg·L-1、100.0 μg·L-1添加水平的回收率為81.5%～117.1%，精密度（RSD）為0.05%～6.12%，重復(fù)性實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.045～0.887，RSD為0.47%～9.47%，均符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)要求。結(jié)論：該前處理技術(shù)具備一步式樣品前處理能力，簡(jiǎn)單快速、成本較低，靈敏度高且重現(xiàn)性好，因此該技術(shù)可用于檢測(cè)果蔬中多種微量殺菌劑的含量。

關(guān)鍵詞：殺菌劑；果蔬；冷凍誘導(dǎo)液液微萃取；超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

Abstract： Objective： To create a method for detecting the residues of eight fungicides in fruits and vegetables using CI-LLME-ultra high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry. Method： The residue of eight fungicides in fruit and vegetable products was detected using liquid-liquid freeze-induced liquid-liquid microextraction pre-treatment technology combined with triple quadrupole analysis technology. Result： Good linear relationships （R2＞0.990） were observed for the eight fungicides in the given concentration ranges; the limits of detection of the method were in the range of 0.04～1.83 μg·kg-1， and the limits of quantification of the method were in the range of 0.12～5.49 μg·kg-1. The recoveries were in the range of 81.5%～117.1% at the spiked levels of?10.0 μg·L-1， 20.0 μg·L-1， 100.0 μg·L-1 and precision of the method was in the range of 81.5%～117.1%， the precision （RSD） was 0.05%～6.12%， and the standard deviation of repeatability experiment was 0.045～0.887 with the RSD of 0.47%～9.47%. Conclusion： This pre-treatment technology has the capability of one-step sample pretreatment， which is simple， fast， cost-effective， sensitive， and reproducible. Therefore， this technology can be used to detect the content of various trace fungicides in fruits and vegetables.

Keywords： fungicides; fruits and vegetables; liquid liquid freezing induced microextraction; ultra high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry

隨著生活水平的提高，人們對(duì)農(nóng)產(chǎn)品的質(zhì)量安全以及農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥的使用越來(lái)越關(guān)注。因此，加強(qiáng)農(nóng)藥殘留分析方法的研究至關(guān)重要，目前在檢測(cè)殺菌劑殘留量前，通常會(huì)采用分散固相萃取方法對(duì)樣品進(jìn)行處理。分散固相萃取方法是在水和乙腈溶液中加入無(wú)水硫酸鎂等物質(zhì)，實(shí)現(xiàn)乙腈層的分離[1-3]。

研究顯示，利用水和有機(jī)溶液進(jìn)行冷凍誘導(dǎo)液液微萃?。–ryoinduced Liquid-Liquid Microextraction，CI-LLME），能夠減少鹽的使用量，從而降低可能引入的雜質(zhì)，在多種食品基質(zhì)中得到了應(yīng)用[4-6]。本研究?jī)?yōu)化了CI-LLME檢測(cè)方法，使該方法可以快速準(zhǔn)確地檢測(cè)果蔬中的殺菌劑。

1 材料與方法

1.1 儀器與設(shè)備

Aglient 1290-6460超高效液相-三重四極桿分析儀、Aglient RRHD Eclipse plus C18分析柱，安捷倫公司。

1.2 材料與試劑

水果和蔬菜樣品為市場(chǎng)銷售產(chǎn)品。

液質(zhì)專用乙腈、甲酸（賽默飛）；無(wú)水硫酸鎂、C18、PSA粉末（Aglient）；屈臣氏蒸餾水；8種殺菌劑標(biāo)準(zhǔn)品（100 μg·mL-1，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所）。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)系列溶液配制

分別量取一定量的殺菌劑標(biāo)準(zhǔn)溶液（100 μg·mL-1），用乙腈溶液稀釋10倍后，搖勻制成混合標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液（10 μg·mL-1）。再取不同量的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用初始流動(dòng)相配制成濃度為0.5 ng·mL-1、1.0 ng·mL-1、5.0 ng·mL-1、10.0 ng·mL-1、20.0 ng·mL-1、40.0 ng·mL-1、80.0 ng·mL-1和100.0 ng·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。

1.3.2 樣品制備

準(zhǔn)確稱量5 g水果、蔬菜樣品，放入50 mL BD管中，加入乙腈溶液10 mL旋渦，混合6 min，加入4 g無(wú)水硫酸鎂和1 g氯化鈉混合5 min，以8 000 r·min-1冷凍離心4 min，取1.5 mL上清液，加入裝有250 mg無(wú)水硫酸鈉、50 mg PSA、25 mg C18粉的混合凈化劑中，混勻40 s，以8 000 r·min-1冷凍離心4 min，取1.0 mL上清液加入5 mL BD管中，加入1.5 mL純水混勻，進(jìn)行冷凍誘導(dǎo)液液微萃取、純化，-80 ?C冷凍6 min，提取上層有機(jī)相，以8 000 r·min-1冷凍離心4 min后，過(guò)0.22 μm濾膜上機(jī)。

1.4 儀器分析條件

（1）液相色譜條件。流動(dòng)相：A為0.05%甲酸水溶液，B為乙腈；洗脫梯度：80%A，0～0.01 min；70%A，0.01～3.00 min；15%A，3～5 min；70%A，5.0～7.5 min；10%A，7.5～10.0 min；80%A，10～15 min；柱溫：40 ℃；流速：0.2 mL·min-1；進(jìn)樣方式：自動(dòng)進(jìn)樣；進(jìn)樣體積：5 μL。

（2）質(zhì)譜條件。掃描方式：正離子掃描；離子源：ESI；檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)；霧化器壓力：30 psi；鞘氣溫度：300 ℃；流速：11 L·min-1；毛細(xì)管電壓：4 000 V；噴嘴電壓：250 V。8種殺菌劑的相關(guān)參數(shù)見(jiàn)表1。

2 結(jié)果與分析

2.1 方法線性、檢出限和定量限

按照1.4儀器條件測(cè)定1.3.1配制的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，以濃度為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，8種殺菌劑標(biāo)準(zhǔn)曲線線性相關(guān)系數(shù)見(jiàn)表2。線性回歸方程的相關(guān)系數(shù)為0.993 1～0.999 0，表明冷凍誘導(dǎo)液液微萃取技術(shù)聯(lián)合液相三重四極桿分析儀檢測(cè)8種殺菌劑能夠獲得良好的線性表現(xiàn)。以3倍信噪比計(jì)算得到檢出限為0.04～1.83 μg·kg-1，以10倍信噪比得出定量限為0.12～5.49 μg·kg-1，符合國(guó)標(biāo)要求。

2.2 加標(biāo)回收率

在空白樣品中分別加入1.0 μg·L-1、20.0 μg·L-1、100.0 μg·L-1 3種濃度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，3次進(jìn)樣測(cè)定。圖1展示了8種殺菌劑TIC圖，加標(biāo)回收率結(jié)果見(jiàn)表3。樣品加標(biāo)回收率在81.5%～117.1%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）在0.05%～6.12%。

2.3 樣品重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

對(duì)已知濃度的樣品進(jìn)行6次連續(xù)進(jìn)樣檢測(cè)，結(jié)果見(jiàn)表4。標(biāo)準(zhǔn)偏差在0.045～0.887，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）在0.47%～9.47%，均符合國(guó)標(biāo)要求。

3 結(jié)論

冷凍誘導(dǎo)液液微萃取前處理技術(shù)結(jié)合UPLC-MS/MS分析技術(shù)檢測(cè)果蔬中8種殺菌劑線性關(guān)系良好，檢出限和定量限均符合國(guó)標(biāo)要求，且方法重現(xiàn)性令人滿意。冷凍誘導(dǎo)液液微萃取前處理技術(shù)快速、高效，易操作，節(jié)約了試劑和時(shí)間成本。冷凍誘導(dǎo)液液微萃取前處理技術(shù)結(jié)合UPLC-MS/MS分析技術(shù)能夠?qū)崿F(xiàn)樣品提取、富集和凈化一步式處理，適用于果蔬中多種殺菌劑的檢測(cè)。

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