許倫 李英 尤瑋

【摘要】? 目的? 探討治療前外周淋巴細胞亞群計數對晚期不可手術非小細胞肺癌（NSCLC）患者預后的預測價值。方法? 收集2018年1月- 2020年1月醫(yī)院確診的98例Ⅲ～Ⅳ期不可手術的NSCLC患者，并收集同期50名健康體檢者作為對照組。檢驗患者淋巴細胞亞群計數。病例組采用Kaplan-Meier 法計算患者總生存期，并用Log-rank檢驗進行比較。多因素分析采用Cox回歸模型，評估治療前外周血中T淋巴細胞亞群（CD3+T細胞、CD4+T細胞、CD8+T細胞、CD4+/CD8+T細胞）影響晚期不可手術NSCLC患者進展的因素。結果? 與健康體檢者相比，NSCLC患者的CD3+及CD8+明顯低于健康對照組，CD4+/CD8+比值、NK細胞明顯高于健康對照組，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。多因素Cox回歸分析結果表明，患者外周血的CD3+、CD8+、CD4+/CD8+水平對疾病進展有影響（P<0.05）。結論? 治療前患者外周血的CD3+、CD8+水平升高，CD4+/CD8+升高是影響患者進展的獨立危險因素。

【關鍵詞】? 晚期非小細胞肺癌；淋巴細胞亞群；免疫；預后

中圖分類號? R734.2? ? 文獻標識碼? A? ? 文章編號? 1671-0223（2023）15--04

Influence of peripheral blood lymphocyte subsets on prognosis of patients with advanced non-small cell lung cancer? Xu lun， Li Ying， You Wei. Zigong Fourth People's Hospital， Zigong 643000， China

【Abstract】? Objective? To investigate the prognostic value of peripheral lymphocyte subsets before treatment in patients with advanced inoperable non-small cell lung cancer（NSCLC）. Methods? The clinical characteristics of 98 NSCLC patients diagnosed with stage Ⅲ-Ⅳ non-surgical NSCLC in the hospital from January 2018 to January 2020 were collected， and 50 healthy individuals in the same period as the control group. Test the patient's lymphocyte subpopulation count. The case group used the Kaplan-Meier method to calculate the total survival time of patients， and compared it with the Log-rank test. Multivariate analysis used Cox regression model to evaluate the factors that affect the progression of advanced non-surgical NSCLC patients with peripheral blood T lymphocyte subsets （CD3+T cells， CD4+T cells， CD8+T cells， CD4+/CD8+T cells） before treatment. Results? Compared with healthy individuals undergoing physical examination， the CD3+and CD8+levels in NSCLC patients were significantly lower than those in the healthy control group， while the CD4+/CD8+ratio and NK cells were significantly higher than those in the healthy control group， with statistical significance （P<0.05）. The results of multivariate Cox regression analysis showed that the levels of CD3+， CD8+， CD4+/CD8+in patients' peripheral blood had an impact on disease progression （P<0.05）. Conclusion? Before treatment， the levels of CD3+ and CD8+ in the patient's peripheral blood increased， and CD4+/CD8+ elevation is an independent risk factor affecting patient progression.

【Key words】? ?Advanced non-small cell lung cancer; Lymphocyte subsets; Immunity; Prognosis

肺癌是最常見的癌癥，也是癌癥相關死亡的主要原因[1]。非小細胞肺癌（NSCLC）占肺癌的75%，大多數診斷為晚期，其5年生存率僅為15%。據估計，2015年中國新增肺癌病例總數為733300例，肺癌死亡人數為610200例[2]。隨著Burnet提出的腫瘤免疫監(jiān)測理論的發(fā)展，對腫瘤免疫的研究不斷深入，越來越多的研究者認識到腫瘤的發(fā)生發(fā)展與機體的免疫功能密切相關[3]。眾所周知，癌癥發(fā)展的每個階段都極易受免疫細胞的調節(jié)。盡管針對腫瘤的適應性免疫細胞的充分激活可能導致惡性細胞的根除，但實際上，抗腫瘤細胞毒性T細胞活性和細胞因子介導的腫瘤細胞溶解抑制了腫瘤生長[4]?；颊呙庖呦到y(tǒng)對臨床結果的潛在影響不僅具有學術意義，而且對于確定預測化療和放療反應的預后標志物也具有重要意義。因此，準確評估癌癥患者外周血淋巴細胞亞群的百分比和絕對計數至關重要。外周血中淋巴細胞亞群（AL）的絕對數量已通過雙平臺技術檢測，傳統(tǒng)方法是將流式細胞儀測定的陽性細胞亞群百分比與自動血液分析儀獲得的淋巴細胞絕對計數進行耦合[5]。一些研究已經證明，淋巴細胞計數可以影響NSCLC、直腸癌、卵巢癌、自然殺傷細胞/T細胞淋巴瘤等的無病生存率[6]。所有這些只表明淋巴細胞數量是影響因素，本研究通過流式細胞術檢測NSCLC患者外周血中CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、NK細胞的百分比和絕對數，分析淋巴細胞亞群與NSCLC患者免疫功能的關系。

1? 對象與方法

1.1? 調查對象

將2018年1月- 2020年1月醫(yī)院確診的98例Ⅲ～Ⅳ期不可手術的NSCLC患者作為調查對象。入組標準：據WHO分類，通過病理學和免疫組化確定不可手術的Ⅲ～Ⅳ期NSCLC的診斷；患者均未出現(xiàn)感染征象或者患有感染性疾病，或患有影響炎性指標的疾病，如白血病等；有完整的病歷和隨訪資料。 排除標準：確診后未經過系統(tǒng)性全身抗癌治療；急性炎性反應或感染性疾病及相關并發(fā)癥；其他惡性腫瘤、血液系統(tǒng)及自身免疫疾病史；半個月內使用激素治療；臨床資料缺失者。所有患者均經過MDT討論不可行手術治療，且治療是以鉑類為基礎的化療。98例患者中，男63例，女35例；年齡33～86歲，平均年齡63.15±10.19歲；低分化52例，中高分化46例；腺癌60例，鱗癌38例；中位隨訪時間為16.6個月（1～64個月），隨訪結束時，進展48例。根據組間性別、年齡等基本資料均衡可比的原則選擇醫(yī)院同期50名健康體檢者作為對照，男32例，女18例；年齡31～84歲，平均年齡61.43±11.98歲。

1.2? 資料收集

收集調查對象的一般資料（性別、年齡、吸煙史、身高及體重），臨床資料（分化程度、病理類型、病理分期、淋巴細胞亞群計數和患者治療以及隨訪資料。收集資料的時間節(jié)點為患者確診后，進行抗腫瘤治療前。

1.3? 隨訪

評估的主要研究終點為無進展生存期（PFS），即疾病患者從接受治療開始，到觀察到疾病進展或者發(fā)生因為任何原因的死亡的時間。采用電話與門診相結合的方式進行隨訪，確診2年內對患者每3個月隨訪1次，2年后每6個月隨訪1次。復查內容包括血常規(guī)、肝功能、腫瘤標志物、淋巴細胞亞群計數、胸片、胸部CT，每年至少復查1次胸部CT。隨訪截止時間為2021年12月。

1.4? 統(tǒng)計學處理

采用 SPSS 24.0統(tǒng)計學軟件處理數據，計量資料以“均數±標準差”表示，組間均數比較采用t檢驗；計數資料采用χ2檢驗。以患者疾病進展為終點，采用Kaplan-Meier法計算累積生存率，組間比較采用Log-rank檢驗；采用Cox回歸模型行多因素分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2? 結果

2.1? NSCLC患者與健康體檢者的淋巴細胞亞群的對比

通過對比，NSCLC患者的CD3+及CD8+明顯低于健康對照組，CD4+/CD8+比值、NK細胞明顯高于健康對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表1。

2.2? T淋巴細胞亞群與NSCLC患者進展的單因素分析

Kaplan-Meier生存分析表明， CD3+水平降低（χ2=14.620， P=0.003）、CD4+水平降低（χ2=4.450， P=0.036）、CD8+水平降低（χ2=11.400， P=0.012）、CD4+/CD8+水平降低（χ2=5.026， P=0.025）、NK細胞水平升高（χ2=8.977， P=0.030）的晚期NSCLC患者的無進展生存期顯著延長。見圖1～5。

圖1? CD3+與患者無進展生存的關系

圖2? CD4+與患者無進展生存的關系

圖3? CD8+與患者無進展生存的關系

圖4? CD4+/CD8+與患者無進展生存的關系

圖5? NK細胞與患者無進展生存的關系

2.3? T淋巴細胞亞群與NSCLC患者預后關系的多因素分析

以疾病有無進展為因變量（進展=1，無進展= 0），以性別、年齡、腫瘤分期、病例類型、CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、NK細胞為自變量，進行多因素Cox回歸分析，結果顯示，患者的CD3+、CD8+水平及CD4+/CD8+升高是造成患者進展的獨立危險因素（P<0.05）。見表3。

3? 討論

肺癌是全世界癌癥相關死亡的主要原因。大多數肺癌患者通常死于復發(fā)和遠端轉移[7]。目前，對肺癌的預后的預測仍然是一個挑戰(zhàn)。淋巴細胞亞群是一種異質性的惡性細胞群，它們擴散到血液循環(huán)中，在存在各種細胞因子的情況下逃避免疫監(jiān)視。在一定條件下，這些細胞可以進入靶器官并促進癌細胞的轉移。在此基礎上，外周血淋巴細胞亞群被認為是原發(fā)性和轉移性癌癥的預后因素[8-9]。在實體瘤患者的外周血中檢測到癌細胞，外周血淋巴細胞亞群也被認為是轉移和復發(fā)的來源。在過去幾十年中，據報道免疫系統(tǒng)可以抑制癌細胞的進展。在健康人外周血中檢測到大量免疫細胞，包括T淋巴細胞、NK細胞和B淋巴細胞，它們在免疫監(jiān)視、免疫抑制和殺傷作用中起著至關重要的作用。NSCLC患者與外周血淋巴細胞亞群變化相關，提示外周免疫監(jiān)測的下降與肺癌進展密切相關。這一過程是基于NK細胞升高、CD3+、CT4+和CD8+T細胞的降低，造成免疫紊亂導致癌細胞擴散到循環(huán)中，逃避免疫細胞的殺傷作用，并在遷移到靶器官后形成轉移，最終導致疾病進展和低生存期。越來越多的證據表明，免疫狀態(tài)與宿主癌癥的發(fā)病機制和發(fā)展密切相關[10-11]。在正常情況下，T細胞亞群之間的相互作用對個體的免疫功能至關重要。然而，在T細胞亞群數量和功能異常改變的情況下，癌細胞可能在存在免疫功能障礙和病理變化的情況下逃避免疫攻擊。據悉，T細胞亞群由具有不同功能的各種亞群組成，其中CD3+細胞被定義為代表整個免疫狀態(tài)的總T淋巴細胞，包括CD4+和CD8+細胞。NK細胞在抗腫瘤免疫和抑制惡性腫瘤細胞擴散中起著重要作用。這些細胞可以在沒有致敏的情況下通過分泌細胞毒性細胞因子殺死癌細胞，這有助于預防腫瘤的侵襲和轉移，最終阻止了癌細胞的早期擴散。

眾所周知，癌癥患者外周血中的T淋巴細胞亞群可能出現(xiàn)異常變化，這與惡性病變發(fā)病時CD3+、CD4+和CD8+細胞失衡引起的免疫反應失衡有關，尤其是CD4+/CD8+平衡失調[12-13]。本研究采用流式細胞術分析晚期NSCLC患者外周血T淋巴細胞亞群和NK細胞，結果表明，與健康對照組相比，晚期NSCLC患者外周血中總T淋巴細胞中CD3+和CD8+、細胞的數量顯著減少。此外，與健康對照組相比，患者的CD4+/CD8+、NK細胞數值明顯升高?？梢?，晚期NSCLC患者可能存在免疫功能紊亂。同時，經過生存分析表明，患者治療前外周血淋巴細胞亞群異常表明患者預后較差，同時，多因素分析表明CD3+、CD8+、CD4+/CD8+計數可以作為預測晚期NSCLC患者預后較好的獨立指標。這些結果表明NSCLC患者存在免疫抑制，同時免疫系統(tǒng)對癌細胞的識別和殺傷效率降低，從而導致癌細胞的生長和轉移。在此基礎上，晚期NSCLC患者的免疫功能受到嚴重損害，這阻礙了宿主對癌細胞的識別和殺傷，并引發(fā)癌細胞的廣泛傳播。隨著疾病的進展，T淋巴細胞亞群的平衡被破壞，同時免疫功能受到抑制，導致擴散在外周血中的癌細胞逃避免疫監(jiān)視。因此，本研究結果證實，晚期NSCLC患者外周血T淋巴細胞亞群的異常分布與患者預后密切相關[14-15]。

綜上，晚期NSCLC患者的淋巴細胞亞群絕對計數較低，表明患者的免疫功能受損?；颊呤軗p的免疫系統(tǒng)確實無法阻止腫瘤進展[16]。在臨床治療過程中，應注意患者的免疫狀態(tài)，提高免疫功能可增強自身抗腫瘤能力。

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[2021-12-21收稿]