宋小飛，王紅芳，張輝，申曉婷，柴青葉，游蓉麗

（山西振東制藥股份有限公司，山西 長治 046000）

乙酸阿比特龍，化學名稱為17-(3-吡啶基)-雄甾-5，16-二烯-3β-乙酸酯，是一種口服CYPI7-A1 抑制劑，通過抑制酶活性從而阻止睪酮合成，與潑尼松聯(lián)用，主要用于轉移性去勢抵抗性前列腺癌和轉移性高風險前列腺癌的治療[1?4]。

1，1，3，3-四甲基胍是一種揮發(fā)性胺類，而揮發(fā)性胺類常用作乙酸阿比特龍合成過程中的催化劑，可以改變反應體系的pH 值，控制反應速度，提高產(chǎn)品收率[5?6]。由于1，1，3，3-四甲基胍具有一定的毒性[7]，需控制其在藥物中的含量。

胺類主要采用氣相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法進行測定[8?11]。胺類具有較強堿性，在進樣系統(tǒng)和色譜柱中有較強的表面吸附，從而導致色譜峰拖尾、重復性差、靈敏度低。解決這一問題的方法主要是采用特殊色譜柱及襯管、衍生化、添加無機鹽等[12?14]。目前采用氣相色譜法測定1，1，3，3-四甲基胍已有文獻報道[12]，是以乙腈為溶劑溶解樣品。而乙酸阿比特龍原料藥在乙腈中溶解度較低，無法滿足檢測要求，筆者通過優(yōu)化溶劑克服了1，1，3，3-四甲基胍測定過程中色譜峰拖尾和重復性差的問題[15?17]，建立了氣相色譜法測定乙酸阿比特龍中1，1，3，3-四甲基胍的方法，為化學原料藥中1，1，3，3-四甲基胍的質(zhì)量控制提供了技術參考。

1 實驗部分

1.1 主要儀器與試劑

氣相色譜儀：GC 7890B 型，配有氫火焰離子化(FID)檢測器，美國安捷倫科技有限公司。

電子分析天平：TB-215D 型，感量為0.01 mg，北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司。

乙酸阿比特龍樣品：批號為2109201，山西振東泰盛制藥有限公司。

乙酸乙酯：色譜純，北京百靈威科技有限公司。

N-甲基吡咯烷酮：色譜純，上海阿拉丁生化科技股份有限公司。

N，N-二甲基甲酰胺：色譜純，北京伊諾凱科技有限公司。

N，N-二甲基乙酰胺：分析純，天津市永大化學試劑有限公司。

苯甲醇：色譜純，上海阿拉丁生化科技股份有限公司。

1，1，3，3-四甲基胍：含量(質(zhì)量分數(shù))為99%，上海麥克林生化科技有限公司。

高純氮氣、高純氫氣：純度均為99.999%(體積分數(shù))，山西省長治炬能化工氣體有限公司。

1.2 色譜條件

色譜柱：CP-Volamine 型毛細管柱(30 m×0.32 mm，0.45 μm，美國安捷倫科技有限公司)；載氣：高純氮氣；進樣口溫度：250 ℃；檢測器：FID；檢測器溫度：300 ℃；柱溫：160 ℃；柱流量：2.0 μL/min；進樣方式：溶液直接進樣，分流比為10∶1；進樣體積：1 μL；定量方法：色譜峰面積外標法。

1.3 溶液配制

1，1，3，3-四甲基胍對照品貯備液：1 mg/mL，精密稱取1，1，3，3-四甲基胍0.05 g，置于50 mL容量瓶中，用乙酸乙酯稀釋至標線，搖勻。

1，1，3，3-四甲基胍對照品溶液：0.1 mg/mL，精密量取1，1，3，3-四甲基胍對照品貯備液0.5 mL，置于5 mL容量瓶中，用乙酸乙酯稀釋至標線，搖勻。

乙酸阿比特龍樣品溶液：0.1 g/mL，精密稱取乙酸阿比特龍樣品0.5 g，置于5 mL容量瓶中，用乙酸乙酯溶解并稀釋至標線，搖勻。

乙酸阿比特龍加標樣品溶液：精密稱取乙酸阿比特龍0.5 g，置于5 mL 容量瓶中，加入1，1，3，3-四甲基胍對照品貯備液0.5 mL，用乙酸乙酯溶解并稀釋至標線，搖勻。

2 結果與討論

2.1 色譜柱選擇

將1，1，3，3-四甲基胍溶于乙酸乙酯中，制成0.1 mg/mL 的1，1，3，3-四甲基胍對照品溶液，采用溶液直接進樣進行氣相色譜法測定，分別考察不同極性色譜柱(DB-1、DB-5、DB-624、DB-FFAP)對1，1，3，3-四甲基胍定量分析的影響。結果顯示，在4 種不同極性色譜柱中1，1，3，3-四甲基胍均拖尾嚴重，無法進行定量分析。這是由于1，1，3，3-四甲基胍有較強的堿性，容易吸附于色譜柱而導致拖尾嚴重[12]。隨后考察了用于胺類分析的CP-Volamine型毛細管色譜柱，結果顯示1，1，3，3-四甲基胍色譜峰對稱度較好，拖尾因子小于2.0，故選用CP-Volamine 色譜柱。

2.2 色譜條件優(yōu)化

由于該方法為單成分1，1，3，3-四甲基胍的測定，柱溫程序宜采用等溫分析。將1，1，3，3-四甲基胍溶于乙酸乙酯中，制成0.1 mg/mL 的1，1，3，3-四甲基胍對照品溶液。分別設置柱溫為140、150、160 ℃，考察不同柱溫時1，1，3，3-四甲基胍的色譜峰面積、峰高、理論塔板數(shù)及拖尾因子，結果見表1。由表1可知，隨著柱溫升高，1，1，3，3-四甲基胍色譜峰高增大，靈敏度增加，拖尾因子降低，理論塔板數(shù)增大，柱效增高，有利于1，1，3，3-四甲基胍的分析，由于1，1，3，3-四甲基胍沸點為160 ℃，柱溫不宜過高，故選擇柱溫為160 ℃。

表1 不同柱溫時1，1，3，3-四甲基胍的色譜峰面積、峰高、理論塔板數(shù)及拖尾因子

2.3 溶劑選擇

將1，1，3，3-四甲基胍溶于N，N-二甲基甲酰胺中，制成0.1 mg/mL 的1，1，3，3-四甲基胍對照品溶液。取適量的乙酸阿比特龍，溶于N，N-二甲基甲酰胺中，配制成0.1 g/mL 的乙酸阿比特龍樣品溶液。采用溶液直接進樣法，按1.2色譜條件考察方法的系統(tǒng)適用性與定量準確度。結果顯示，色譜柱中1，1，3，3-四甲基胍會產(chǎn)生殘留，影響后續(xù)樣品測定。依據(jù)中國藥典(四部)9102 藥品雜質(zhì)分析指導原則[14]，將1，1，3，3-四甲基胍控制限度確定為0.1%。按1，1，3，3-四甲基胍限量的50%、100%、150%制備9 份樣品溶液，并進行測定，1，1，3，3-四甲基胍回收率為128.1%～158.7%，表明方法準確度較差，不適用1，1，3，3-四甲基胍的定量分析，這可能是溶劑N，N-二甲基甲酰胺的基質(zhì)效應較大所致。

分別考察N，N-二甲基乙酰胺、苯甲醇、N-甲基吡咯烷酮、乙酸乙酯作為溶劑對1，1，3，3-四甲基胍測定結果的影響，分別用上述4 種溶劑稀釋1，1，3，3-四甲基胍對照品溶液，使其質(zhì)量濃度均為0.1 mg/mL，按1.2 色譜條件進行分析，比較其色譜峰面積、峰高、理論塔板數(shù)、拖尾因子和分離度，結果見表2。

表2 不同種溶劑時1，1，3，3-四甲基胍的色譜峰面積、峰高、理論塔板數(shù)、拖尾因子及分離度

結果表明，采用苯甲醇作為溶劑時，苯甲醇中雜質(zhì)峰與1，1，3，3-四甲基胍色譜峰保留時間一致，影響1，1，3，3-四甲基胍測定；N-甲基吡咯烷酮中存在與1，1，3，3-四甲基胍色譜峰相鄰的雜質(zhì)峰，分離度為1.4，無法與1，1，3，3-四甲基胍色譜峰有效分離，進行方法優(yōu)化的空間較小，不適合作為溶劑；而N，N-二甲基乙酰胺分子結構及物理性質(zhì)與N，N-二甲基甲酰胺相似，且對照品溶液會發(fā)生殘留，影響后續(xù)進樣分析，故不適合作為溶劑；采用乙酸乙酯作為溶劑時，1，1，3，3-四甲基胍色譜峰響應值較高，理論塔板數(shù)不小于5 000，拖尾因子不大于2.0，分離度不小于1.5，對照品溶液進樣后無殘留，故采用乙酸乙酯作為溶劑。

2.4 系統(tǒng)適用性與專屬性試驗

按照1.2 色譜條件，分別對溶劑空白、1，1，3，3-四甲基胍對照品溶液、乙酸阿比特龍加標樣品溶液進行測定，色譜圖如圖1所示。結果表明，1，1，3，3-四甲基胍色譜峰理論塔板數(shù)大于5 000，與相鄰色譜峰分離度大于1.5，拖尾因子小于2.0，樣品基質(zhì)不干擾1，1，3，3-四甲基胍測定。

圖1 溶劑空白、對照品溶液和加標樣品溶液色譜圖

2.5 線性方程與檢出限

精密量取一定量1，1，3，3-四甲基胍對照品貯備液，用乙酸乙酯稀釋成適宜質(zhì)量濃度的溶液，在1.2色譜條件下分別測定，以信噪比為3 確定方法檢出限，以信噪比為10確定定量限。

以定量限為起始濃度，分別精密量取1，1，3，3-四甲基胍對照品貯備液0.5、0.8、1.0、1.5、2.0 mL，分別置于5 只10 mL 容量瓶中，用乙酸乙酯稀釋至標線，搖勻，配制成系列標準工作溶液，在1.2色譜條件下分別測定，以質(zhì)量濃度為橫坐標、色譜峰面積為縱坐標進行線性回歸，計算線性方程、相關系數(shù)。

1，1，3，3-四甲基胍質(zhì)量濃度線性范圍、線性方程、相關系數(shù)、檢出限和定量限結果見表3。由表3可知，1，1，3，3-四甲基胍在質(zhì)量濃度為10.22～204.38 μg/mL 范圍內(nèi)與色譜峰面積線性關系良好，線性相關系數(shù)為0.999 4，方法檢出限為3.07 μg/mL，定量限為10.22 μg/mL。

表3 質(zhì)量濃度線性范圍、線性方程、相關系數(shù)、檢出限與定量限

2.6 加標回收與精密度試驗

精密稱取乙酸阿比特龍樣品9 份，分別加入適量的1，1，3，3-四甲基胍對照品貯備液，配制成低、中、高三種不同質(zhì)量濃度的加標樣品溶液，在1.2 色譜條件下分別測定，結果列于表4。由表4可知，1，1，3，3-四甲基胍的回收率為97.9%～113.3%，平均回收率為107.5%，9 份樣品測定結果的相對標準偏差為5.0%，表明方法的準確度、精密度均較高。

表4 加標回收與精密度試驗結果

2.7 溶液穩(wěn)定性試驗

取1，1，3，3-四甲基胍對照品溶液、乙酸阿比特龍樣品溶液、乙酸阿比特龍加標樣品溶液，分別在配制完成后第0、4、8、12、16、20、24 h進樣分析，結果見表5。由表5可知，1，1，3，3-四甲基胍對照品溶液室溫放置24 h，1，1，3，3-四甲基胍的平均色譜峰面積為63.19，色譜峰面積的相對標準偏差為1.47%；乙酸阿比特龍樣品溶液放置24 h，均未檢出1，1，3，3-四甲基胍；乙酸阿比特龍加標樣品溶液放置24 h，1，1，3，3-四甲基胍的平均色譜峰面積為62.34%，相對標準偏差為4.86%，表明對照品溶液、乙酸阿比特龍樣品溶液、乙酸阿比特龍加標樣品溶液室溫放置24 h，穩(wěn)定性良好。

表5 放置不同時間后溶液中1，1，3，3-四甲基胍峰面積測定結果

3 結語

建立了氣相色譜法測定乙酸阿比特龍中1，1，3，3-四甲基胍的分析方法，該方法操作簡單，專屬性好，準確度高，為乙酸阿比特龍中1，1，3，3-四甲基胍的質(zhì)量控制提供了一定依據(jù)。