王蕊 李麗鑫 萬(wàn)靜 許秦 代佳和 朱強(qiáng)強(qiáng)

摘 要：研究建立一種基于QuEChERS的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢驗(yàn)50批普洱茶中茚蟲威、內(nèi)吸磷、克百威含量，了解普洱茶中3種殺蟲劑殘留現(xiàn)狀。以乙腈-醋酸為提取液，PSA、C18、GCB、MgSO4為凈化劑，在電噴霧離子源正離子模式下，使用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式檢測(cè)目標(biāo)物。結(jié)果顯示普洱茶中茚蟲威、內(nèi)吸磷在10～500 ng·mL-1，克百威在0.5～50.0 ng·mL-1具有良好的線性（r≥0.999）；檢出限為0.010 9～0.019 2 μg·kg-1；定量限為0.036 4～0.063 9 μg·kg-1。在5 ng·mL-1、10 ng·mL-1、50 ng·mL-1 3個(gè)加標(biāo)濃度的回收率為91.26%～105.66%，RSD為0.67%～2.58%。該方法簡(jiǎn)便、高效、靈敏，適合普洱茶中茚蟲威、內(nèi)吸磷、克百威的定量檢測(cè)分析。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法；測(cè)定；普洱茶；殺蟲劑

Abstract： Study and establish a high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry method based on QuEChERS to detect the content of indefencarb， phosphorus， and carbofuran in 50 batches of Puer tea， and understand the current status of three pesticide residues in Puer tea. With acetonitrile acetic acid as the extraction solution， PSA， C18， GCB， MgSO4 as the purification agent， the target substance was detected by multi reaction monitoring mode in the electric spray ion source and positive ion mode. The results showed that the content of indocarb and phosphorus in Puer tea showed good linearity （r≥0.999） at 10～500 ng·mL-1， and carbofuran at 0.5～50.0 ng·mL-1; the detection limit is 0.010 9～0.019 2 μg·kg-1； the quantitative limit is 0.036 4～0.063 9 μg·kg-1. The recovery rates at 3 spiked concentrations of 5 ng·mL-1， 10 ng·mL-1and 50 ng·mL-1 were 91.26%～105.66%， with RSD ranging were 0.67%～2.58%. This method is simple， efficient， and sensitive， suitable for the quantitative detection and analysis of indefencarb， phosphorus， and carbofuran in Puer tea.

Keywords： high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry method; determination; Puer tea; insecticide

普洱茶是云南特色茶葉，主要產(chǎn)自西雙版納、臨滄、普洱等地區(qū)，本文通過(guò)查閱文獻(xiàn)并結(jié)合茶農(nóng)在種植過(guò)程中常用的農(nóng)藥種類，參考以往檢驗(yàn)數(shù)據(jù)，以找出問(wèn)題、監(jiān)控風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)為目的，選取3種常見(jiàn)的殺蟲劑內(nèi)吸磷、茚蟲威、克百威進(jìn)行檢測(cè)。目前，農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)主要有氣相色譜法、液相色譜法、氣質(zhì)聯(lián)用法和液質(zhì)譜聯(lián)用法。其中，液相色譜–串聯(lián)質(zhì)譜法應(yīng)用廣泛、發(fā)展較為完善[1-2]。在檢測(cè)分析中，樣品凈化是較為關(guān)鍵的一個(gè)環(huán)節(jié)，目的是對(duì)目標(biāo)物最大限度地提取，將干擾降到最低、誤差降到最小，樣品的凈化效果直接影響到檢測(cè)結(jié)果的可靠性[3]。QuEChERS方法是近幾年發(fā)展起來(lái)的一種樣品前處理方法，具有便捷、高效及可靠安全等優(yōu)勢(shì)[4]。本試驗(yàn)將高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法與前處理技術(shù)QuEChERS方法相結(jié)合，建立了一種簡(jiǎn)便、高效、靈敏的分析方法應(yīng)用于普洱茶的檢測(cè)。

1 材料與方法

1.1 試劑與材料

普洱茶：普洱50批，市售；茚蟲威、內(nèi)吸磷、克百威標(biāo)準(zhǔn)溶液（100 μg·mL-1）：農(nóng)業(yè)農(nóng)村部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所；乙腈、甲醇、甲酸，色譜純；醋酸、PSA、C18、GCB，分析純；QuEChERS AOAC萃取鹽提取包（組分：6 g無(wú)水MgSO4、1.5 g醋酸鈉）。

1.2 儀器與設(shè)備

高效液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀（型號(hào)：4500QTRAP/LC/MS/MS，配ESI離子源）；電子天平（型號(hào)：AL104）；振蕩器（型號(hào)：Multi Reax）；高性能通用臺(tái)式離心機(jī)（型號(hào)：ST16）。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 樣品處理

稱取2 g茶試樣（粉碎均勻）于50 mL塑料離心管中，加入10 mL水，旋渦振蕩，靜置30 min。加入20 mL乙腈-醋酸溶液（體積比99∶1）和一個(gè)陶瓷均質(zhì)子，渦旋振蕩1 min，在具塞離心管冰浴條件下加入QuEChERS AOAC萃取鹽提取包并劇烈振蕩。待溫度降低后，渦旋振蕩2 min，再以4 200 r·min-1的轉(zhuǎn)速離心5 min，鹽析分層待凈化。

移取上清液8 mL加到內(nèi)含PSA 400 mg、C18 400 mg、GCB 200 mg、MgSO4 1 200 mg的塑料離心管中，渦旋振蕩1 min，4 200 r·min-1離心5 min，靜置待分層，移取1 mL上清液過(guò)0.22 μm微孔濾膜，待測(cè)。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)系列溶液配制

分別移取茚蟲威、內(nèi)吸磷標(biāo)準(zhǔn)溶液（100 μg·mL-1）0.5 mL至5 mL容量瓶中，乙腈定容，制成10 μg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)中間溶液。移取克百威標(biāo)準(zhǔn)溶液（100 μg·mL-1）0.05 mL至5 mL容量瓶中，乙腈定容，制成1 μg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)中間溶液。用乙腈稀釋標(biāo)準(zhǔn)中間溶液，分別制得茚蟲威、內(nèi)吸磷濃度為10 ng·mL-1、50 ng·mL-1、100 ng·mL-1、200 ng·mL-1、300 ng·mL-1、400 ng·mL-1、500 ng·mL-1及克百威濃度為0.5 ng·mL-1、1.0 ng·mL-1、2.0 ng·mL-1、4.0 ng·mL-1、8.0 ng·mL-1、10.0 ng·mL-1、50.0 ng·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液。

1.3.3 液相色譜條件

色譜柱：ACQUITY UPLC? HCC T3（100 mm×2.1 mm，1.8 μm）；流動(dòng)相A為甲醇，流動(dòng)相B為0.1%甲酸水；柱溫：40 ℃；流速：0.2 mL·min-1；進(jìn)樣體積：3 μL。梯度洗脫程序見(jiàn)表1。

1.3.4 質(zhì)譜條件

采用AB SCIEX公司的4500QTRAP質(zhì)譜系統(tǒng)，在電噴霧離子源正離子模式下，使用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式檢測(cè)目標(biāo)物。離子源溫度為550.0 ℃，離子源電壓為5.5 kV，氣簾氣30 psi，噴霧氣（Gas1）50 psi，噴霧氣（Gas2）50 psi。優(yōu)化得到各目標(biāo)物質(zhì)譜條件見(jiàn)表2。

2 結(jié)果與分析

2.1 提取和凈化條件的選擇

乙腈與水部分互溶，加入萃取鹽包后，鹽析、分層和除雜效果明顯，因此采用乙腈-醋酸作為提取溶劑。茶葉中含有的脂肪酸、生物堿、色素及酚類化合物使得凈化過(guò)程具有一定的難度，易對(duì)色譜柱產(chǎn)生污染，采用PSA 400 mg+C18 400 mg+GCB

200 mg+MgSO4 1 200 mg進(jìn)行凈化[5]。該凈化劑結(jié)合了常用凈化劑的成分，疏水性較強(qiáng)，C18能有效去除脂肪酸和色素；GCB能有效去除色素，排除干擾；PSA能有效去除脂肪酸，對(duì)色素也有一定的去除能力，同時(shí)對(duì)農(nóng)藥殘留吸附作用較小，且運(yùn)用分散固相萃取，操作簡(jiǎn)便快速。

2.2 線性關(guān)系、檢出限、定量限

對(duì)標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液進(jìn)行測(cè)定，以各標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行回歸，得到相關(guān)系數(shù)和回歸方程。檢測(cè)限以離子對(duì)信噪比≥3考察，定量限以離子對(duì)信噪比≥10考察，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。茚蟲威、內(nèi)吸磷在10～500 ng·mL-1，克百威在0.5～50 ng·mL-1線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.999，檢出限為0.010 9～0.019 2 μg·kg-1，定量限為0.036 4～0.063 9 μg·kg-1，可以滿足定性、定量分析的需要。

2.3 回收率與精密度

稱取2 g陰性茶試樣進(jìn)行加標(biāo)試驗(yàn)，在茶試樣中分別添加5 ng·mL-1、10 ng·mL-1、50 ng·mL-1 3個(gè)濃度水平的茚蟲威、內(nèi)吸磷、克百威標(biāo)準(zhǔn)溶液，每個(gè)水平進(jìn)行6次平行試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4。茚蟲威、內(nèi)吸磷、克百威在3個(gè)加標(biāo)水平下的平均回收率為91.26%～105.66%，RSD為0.67%～2.58%。符合《實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范 食品理化檢測(cè)》（GB/T 27404—2008）的規(guī)定，提示本方法加標(biāo)回收率和精密度好，能準(zhǔn)確測(cè)定茶葉中茚蟲威、內(nèi)吸磷、克百威含量。

2.4 樣品測(cè)定

對(duì)50批市售普洱茶中茚蟲威、內(nèi)吸磷、克百威的含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果顯示在50個(gè)樣品中，茚蟲威、內(nèi)吸磷均未檢出，有2批次樣品檢出克百威，檢出率為4%，其含量分別為0.014 mg·kg-1、0.013 mg·kg-1。《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》（GB 2763—2021）規(guī)定茶葉中茚蟲威、內(nèi)吸磷、克百威的限量值分別為5 mg·kg-1、0.05 mg·kg-1、0.02 mg·kg-1，本次檢測(cè)的50批普洱茶樣品中3種殺蟲劑含量均符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)要求。

3 結(jié)論

本文建立了一種基于QuEChERS的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法用于同時(shí)檢測(cè)普洱茶中3種殺蟲劑，該方法簡(jiǎn)便、高效、靈敏，適合普洱茶中茚蟲威、內(nèi)吸磷、克百威農(nóng)藥殘留的快速檢測(cè)及定量分析。此外，該方法也可為茶葉制品及其他茶葉農(nóng)藥殘留檢測(cè)提供一定的參考。檢測(cè)的50批普洱茶樣品中3種殺蟲劑含量均符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)要求，提示普洱茶中3種殺蟲劑殘留情況較為樂(lè)觀。這與近年來(lái)云南建立生態(tài)茶園息息相關(guān)，為了提高普洱茶原料的品質(zhì)，近年來(lái)云南省政府及企業(yè)投入大量資金改造有機(jī)生態(tài)茶園，茶園病蟲害防控趨向于更安全、可靠、綠色。

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