摘要 目的：探討電針通過調(diào)節(jié)Notch3信號通路改善大腦中動脈閉塞小鼠海馬神經(jīng)元凋亡的作用機制。方法：將45只健康無特定病原體（SPF）級雄性C57BL/6小鼠隨機分為對照組、大腦中動脈閉塞模型（MCAO）組和電針治療組，各15只。通過2，3，5-氯化三苯基四氮唑（TTC）染色和小鼠神經(jīng)行為評分比較小鼠腦梗死神經(jīng)損傷情況。采用免疫組織化學(xué)分析小鼠海馬神經(jīng)元Bax和Caspase-3蛋白表達。通過末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP缺口末端標(biāo)記（TUNEL）熒光染色分析小鼠神經(jīng)元細胞凋亡率；通過實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）分析小鼠海馬組織腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細胞介素（IL）-1β、IL-6、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）mRNA表達；通過免疫組織化學(xué)分析小鼠海馬神經(jīng)元細胞凋亡；通過蛋白印跡分析小鼠海馬組織Bax、Bcl-2、Caspase-3及H19/EZH2/Notch3蛋白表達。通過免疫熒光染色分析小鼠脊髓組織Nestin和神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白（GFAP）表達。結(jié)果：連續(xù)干預(yù)14 d后，MCAO組小鼠神經(jīng)損傷和腦梗死體積較對照組增加（P＜0.05），電針治療組小鼠神經(jīng)損傷和腦梗死體積較MCAO組減?。≒＜0.05）。MCAO組神經(jīng)細胞凋亡率較對照組升高（P＜0.05），電針治療組神經(jīng)元細胞凋亡率較MCAO組減少（P＜0.05）；MCAO組TNF-α、IL-1β、IL-6、iNOS mRNA表達較對照組升高（P＜0.05），電針治療組TNF-α、IL-1β、IL-6、iNOS mRNA表達較MCAO組降低（P＜0.05）。MCAO組Bax和Caspase-3蛋白表達較對照組升高（P＜0.05），電針治療組Bax和Caspase-3蛋白表達較MCAO組降低（P＜0.05），MCAO組Bcl-2蛋白表達較對照組降低（P＜0.05），電針治療組Bcl-2蛋白表達較MCAO組升高（P＜0.05）。MCAO組H19、EZH2和Notch3蛋白表達較對照組升高（P＜0.05），電針治療組H19、EZH2和Notch3蛋白表達較MCAO組降低（P＜0.05）。MCAO組Nestin蛋白表達較對照組降低（P＜0.05），GFAP蛋白表達較對照組升高（P＜0.05）；電針治療組Nestin蛋白表達較MCAO組升高（P＜0.05），GFAP蛋白表達較MCAO組降低（P＜0.05）。結(jié)論：MCAO可誘導(dǎo)海馬神經(jīng)元凋亡，電針通過調(diào)控Notch3激活，調(diào)節(jié)Bax/Bcl-2及Nestin和GFAP蛋白，從而阻斷Caspase-3激活，抑制神經(jīng)元凋亡。

關(guān)鍵詞 大腦中動脈閉塞；Notch3信號通路；電針；海馬神經(jīng)元；實驗研究

doi：10.12102/j.issn.1672-1349.2023.24.010

基金項目 湖北省衛(wèi)生健康委中醫(yī)藥科研項目（No.ZY2021M006）

作者單位 十堰市太和醫(yī)院，湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬醫(yī)院（湖北十堰" 442000）

通訊作者 穆敬平，E-mail：568406173@qq.com

引用信息 楊語晗，許明軍，穆敬平.電針通過調(diào)節(jié)Notch3信號通路改善大腦中動脈閉塞小鼠海馬神經(jīng)元凋亡的作用機制［J］.中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2023，21（24）：4530-4535.

腦卒中是全球第二大死亡原因和第三大殘疾原因［1-2］。據(jù)估計，到2030年，中風(fēng)每年將導(dǎo)致1 200萬例病人死亡，缺血性腦卒中主要由大腦中動脈腦血流阻塞引起，約占所有腦卒中的87.9%，導(dǎo)致嚴(yán)重的中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷甚至死亡［3-4］。缺血性腦卒中是世界范圍內(nèi)死亡和殘疾的主要原因［5-6］。缺血性腦卒中后血腦屏障受損導(dǎo)致?lián)p傷進一步發(fā)展和擴大。由于缺血通過剝奪氧氣和代謝底物擾亂腦組織，因此在缺血條件下細胞分泌有害信號［7-9］。這些有害分子促進小膠質(zhì)細胞活化，通過釋放促炎調(diào)節(jié)劑［包括腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細胞介素（IL）-1β、IL-6］引起促炎反應(yīng)，從而導(dǎo)致炎癥誘導(dǎo)的壞死性神經(jīng)元細胞死亡。神經(jīng)元壞百會穴死和神經(jīng)元與小膠質(zhì)細胞的破壞進一步增強炎癥反應(yīng)。壞死性凋亡是一種受調(diào)節(jié)的細胞死亡形式，對缺血性腦卒中損傷的進展有影響。抑制壞死性凋亡可顯著減小梗死面積，抑制炎癥，減輕運動能力，并最終改善腦缺血性損傷后認(rèn)知功能。Notch信號通路是一種進化上相對保守的信號通路，參與海馬神經(jīng)元細胞遷移、分化和凋亡。Notch信號通路在一些人類疾病中被激活，包括動脈粥樣硬化、結(jié)腸直腸癌和缺血性腦卒中。有研究顯示，抑制Notch信號通路可能通過誘導(dǎo)神經(jīng)元干分化并減少神經(jīng)炎癥和神經(jīng)元凋亡［10］。針灸長期用于疾病預(yù)防，一項研究支持其在動物模型中誘導(dǎo)腦缺血耐受作用的證據(jù)［11］，結(jié)果顯示，在腦缺血前于百會穴（GV20）進行電針可減輕動物模型中缺血后神經(jīng)功能缺損程度。目前，已從抑制炎癥、抑制氧化應(yīng)激、抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、調(diào)節(jié)大麻素系統(tǒng)、自噬、保護血腦屏障、抗凋亡等多方面探討了電針預(yù)處理誘導(dǎo)腦缺血耐受的機制。多項研究表明，電針可抑制神經(jīng)元凋亡，改善神經(jīng)元微環(huán)境，加速水腫減輕和神經(jīng)功能修復(fù)；抑制促炎細胞因子和Notch信號通路相關(guān)因子的表達，表明抑制電針誘導(dǎo)的Notch信號通路有助于緩解缺血性腦卒中［12-13］。本研究旨在探討電針通過調(diào)節(jié)Notch3信號通路改善大腦中動脈閉塞（middle cerebral artery occlusion，MCAO）小鼠海馬神經(jīng)元凋亡的機制，為腦梗死等腦血管疾病類型提供新的治療方向。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

45只健康無特定病原體（SPF）級雄性C57BL/6小鼠，體質(zhì)量20～25 g，購自北京維通利華實驗動物科技有限公司。小鼠生存溫度（23.0±2.0）℃，環(huán)境濕度45%～50%，光照時間每日12 h；適應(yīng)期間可隨意獲取水和適應(yīng)性飼料。

1.1.1 小鼠MCAO模型的建立

MCAO模型采用改良的Zea Longa方法建立。腹腔注射10%水合氯醛300 mg/kg后，將小鼠仰臥固定于37 ℃恒溫電加熱板上經(jīng)頸正中切口分離右側(cè)頸總動脈、頸外動脈和頸內(nèi)動脈，結(jié)扎頸總動脈近端。使用無創(chuàng)血管夾住頸總動脈遠端和頸外動脈。在頸總動脈分叉處做一切口，放置頭部鈍化的尼龍線。將尼龍線緩慢向前推8～10 mm。當(dāng)感覺到阻力時，停止并固定在頸總動脈上。栓塞1 h后，拔出線塞恢復(fù)血流。再灌注2 h后，使用神經(jīng)功能評分驗證模型是否成功。

1.1.2 動物分組

將45只小鼠隨機分為3組，每組15只，對照組除不將細絲推進至大腦中動脈起點處外，其他處理與MCAO組相同；MCAO組建立小鼠MCAO模型；電針治療組：MCAO小鼠模型建立后，百會穴位于矢狀中線與兩耳連線的交點處，使用XYD-IV儀器（翔宇醫(yī)療，型號20152260115），以1 mA的強度和2～15 Hz的頻率刺激，每日20 min，連續(xù)14 d。

1.2 實驗方法

1.2.1 小鼠神經(jīng)損傷評估

神經(jīng)行為評分包括6方面：自發(fā)活動（籠中5 min，0～3分）、運動對稱性（四肢，0～3分）、前肢對稱性（尾握時伸展，0～3分）、鐵絲籠爬墻（1～3分）、軀干兩側(cè)的觸摸反應(yīng)（1～3分）和觸須觸摸的反應(yīng)（1～3分）?？偡?8分，得分越低提示神經(jīng)功能受損程度越小，計算腦梗死體積。

1.2.2 2，3，5-氯化三苯基四氮唑（TTC）染色計算腦梗死體積

將小鼠麻醉并處死后提取腦組織，使用冰鹽水沖洗后，在－20 ℃冰箱中快速冷凍腦組織20 min，使腦組織變硬進行切割。沿冠狀面切片，厚度為2 mm，每個腦切5片或6片。將腦切片放入用錫紙包裹并置于含有2%TTC（北京索萊寶公司）的培養(yǎng)皿中，在37 ℃培養(yǎng)箱中染色30 min。在此期間，輕輕轉(zhuǎn)動大腦切片，使其充分暴露于反應(yīng)液中。取出培養(yǎng)皿，用1 mL針管吸出TTC溶液，將切片置于4%多聚甲醛溶液中固定5 min，取出切片按順序擺放。采用Image-Pro Plus圖像軟件計算每個腦切片的腦梗死體積比。為減少腦缺血性半球水腫引起的誤差，梗死體積為對側(cè)正常腦組織體積－同側(cè)正常組織體積，結(jié)果以梗死體積百分比表示：梗死面積體積百分比＝（對側(cè)正常腦組織體積－同側(cè)正常腦組織體積）/對側(cè)正常組織體積×100%。

1.2.3 末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP缺口末端標(biāo)記（TUNEL）熒光染色檢測細胞凋亡率

小鼠腦組織經(jīng)二甲苯脫蠟、乙醇脫水后，石蠟切片加入20 μg/mL蛋白酶K工作液（北京索萊寶公司），室溫放置15" min。向每個樣品中加入51" μL的TUNEL溶液（45" μL平衡緩沖液∶5" μL核苷酸混合物∶1" μL rTdT酶），避光孵育1" h。加入2×SSC緩沖液在室溫下孵育15 min以終止反應(yīng)。加入含有抗熒光淬滅的4′，6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI），黑暗中孵育 5 min，蓋上蓋玻片。通過熒光顯微鏡（倒置熒光顯微鏡，德國）獲得海馬CA1區(qū)圖像（200倍）。計算不同視野內(nèi)凋亡陽性細胞百分比，取平均值進行統(tǒng)計分析。凋亡率＝陽性細胞/細胞總量×100%。

1.2.4 免疫組織化學(xué)分析小鼠海馬神經(jīng)元細胞Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表達

組織包埋，切片，烘烤，脫蠟，補液和抗原修復(fù)后，在37 ℃條件下，將細胞在2%的低聚甲醛中固定4 h，在封閉緩沖液［含10%山羊血清和0.01% Tween-20的磷酸緩沖鹽溶液（PBS）］中孵育1 h。37 ℃條件下，在封閉緩沖液中將組織與第一抗體［兔鼠抗小鼠Bcl-2多克隆抗體（1∶200）、兔鼠抗小鼠Bax多克隆抗體（1∶200）、兔抗小鼠Caspase-3多克隆抗體（1∶200）］4 ℃過夜。將組織用含0.05%Tween-20的PBS洗滌3次，在室溫下添加1∶200的山羊抗小鼠二抗（Aspen公司），在37 ℃條件下，細胞孵育4 h。使用PBS洗滌切片3次，加入顯色劑（DAB）。最后，將切片沖洗，DAPI復(fù)染密封。在Zeiss LSM710共聚焦顯微鏡下觀察，使用Zen 2.31 SP（黑色版）軟件（Zeiss）處理圖像。

1.2.5 實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測TNF-α、IL-1β、IL-6、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）mRNA表達

收集小鼠的海馬組織，在1 mL TRIzolReagent（15596026，賽默飛世爾科技公司，美國）中研磨成組織勻漿，轉(zhuǎn)移到 1.5 mL離心管中，加入200 μL氯仿，混合并在4 ℃、10 000 r/min下離心5 min以獲得總 mRNA（在上層水相中）。加入500 μL異丙醇，混勻，在相同條件下再次離心，純化mRNA。棄上清，采用75%乙醇洗滌異丙醇，得到離心管底部富集的mRNA沉淀。加入50 μL焦碳酸二乙酯（DEPC）水溶解mRNA，用Nano Drop微管分光光度計（Invitrogen公司，美國）測量mRNA濃度。根據(jù)試劑盒說明，使用Transcriptor First Strand cDNA Synthesis Kit（04897030001，羅氏公司，德國）將mRNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。通過實時PCR系統(tǒng)（LightCycler480，羅氏公司，德國）檢測每個樣品TNF-α、IL-1β、IL-6、iNOS mRNA表達水平。

1.2.6 蛋白免疫印跡法檢測海馬H19、EZH2和Notch3蛋白表達水平

1）提取蛋白：人卵巢癌細胞，加入10 mL/mg蛋白免疫印跡法及IP細胞裂解液，使用勻漿器勻漿，利用超聲組織破碎儀破碎細胞（破碎條件為每管4次/300 W），細胞破碎后冰上放置30 min，將破碎后的細胞進行離心，4 ℃、12 000×g（重力加速度）離心30 min，收集上清液，即為蛋白抽提液。2）蛋白定量：使用二喹啉甲酸（BCA）法測定蛋白濃度，將蛋白濃度調(diào)節(jié)一致。 3）凝膠電泳：取待測標(biāo)本15 μL進行上樣，該過程中選取甘油醛-3-磷酸脫氫酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）單抗（1∶500）作為蛋白質(zhì)上樣量的標(biāo)定物，每泳道上樣30 μg蛋白量。使用十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electroresis，SDS-PAGE）進行電泳分析，至目的分子量出現(xiàn)。4）濕法轉(zhuǎn)膜：采用濕法將蛋白條帶電轉(zhuǎn)至Immun-blot 聚偏乙烯膜（PVDF）上，加入濃度為50 g/L的脫脂奶粉在20 ℃條件下封閉震蕩處理3 h，加入以下抗體［兔鼠抗小鼠H19多克隆抗體（1∶400）、兔抗小鼠EZH2（1∶400）多克隆抗體、兔抗小鼠Notch3多克隆抗體（1∶400）］，4 ℃孵育過夜，用TBS緩沖液（Tris 50 mmol/L，NaCl 100 mmol/L，pH7.5）沖洗3次，每次10 min。使用經(jīng)過辣根酶標(biāo)記的IgG（1∶1 000），在37 ℃條件下孵育2 h，漂洗3次，每次10 min。5）發(fā)光顯影：使用電化學(xué)發(fā)光（ECL）試劑盒進行顯影操作。首先等體積混合ECL試劑盒中的A液和B液，20 ℃保存?zhèn)溆?，將二抗加入于反?yīng)液中進行孵育，使用PBS進行多次洗滌，取出膜后使用潔凈的吸水紙輕輕吸去多余的液體，將膜放置在潔凈的保鮮膜上，整個操作過程需要謹(jǐn)慎小心，避免觸碰蛋白電泳一側(cè)。按照0.125 mL/cm2滴加發(fā)光液，使發(fā)光液均勻覆蓋在膜上靜置5 min，取出膜，去除上面的發(fā)光液。將膜固定在兩片保鮮膜中間，于暗室內(nèi)壓片5 min后完成顯影定影操作。選擇GAPDH單抗（1∶1 000）作為內(nèi)參。6）圖像分析：膠片干燥后，使用Mieroteck掃描儀掃描圖像，利用Quantity-One軟件進行積分光密度分析。

1.2.7 免疫熒光染色法檢測MCAO和電針治療小鼠脊髓組織中Nestin和神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白（GFAP）的表達

取10 μm厚的脊髓組織切片在4 ℃下在4%多聚甲醛中固定。將脊髓組織與封閉溶液（0.2% Triton X-100）和5%牛血清白蛋白（V/V）在室溫下孵育1 h，在4 ℃下與相應(yīng)的溶液孵育過夜。針對膠質(zhì)纖維酸性蛋白（GFAP 1∶1 000，Abcam公司，美國）和巢蛋白（1∶200，Abcam公司，美國）的特異性抗體，沖洗后，將切片與Alexa Fluor 555（1∶500；Abcam公司，美國）抗兔IgG作用1 h。用4′，6-diamidino-2-phenylindole（DAPI）復(fù)染細胞核。采用Nikon Eclipse 80i顯微鏡（Nikon公司，日本）捕獲熒光圖像。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件（美國IBM公司）對數(shù)據(jù)進行分析，符合正態(tài)分布的定量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩組間比較采用最小顯著差異法（LSD-t）。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組小鼠腦神經(jīng)損傷得分和腦梗死體積比較

MCAO組小鼠神經(jīng)損傷和腦梗死體積較對照組增加（P＜0.05），電針治療組小鼠神經(jīng)損傷和腦梗死體積較MCAO組減少（P＜0.05）。詳見表1。

2.2 各組小鼠神經(jīng)細胞凋亡率比較

MCAO組神經(jīng)細胞凋亡率較對照組升高（P＜0.05），電針治療組神經(jīng)細胞凋亡率較MCAO組降低（P＜0.05）。詳見表2。

2.3 各組炎性因子mRNA表達比較

MCAO組TNF-α、IL-1β、IL-6、iNOS mRNA表達較對照組升高（P＜0.05），電針治療組TNF-α、IL-1β、IL-6、iNOS mRNA表達較MCAO組降低（P＜0.05）。詳見表3。

2.4 電針治療抑制MCAO小鼠海馬神經(jīng)元細胞Bax、Bcl-2和Caspase-3蛋白表達

通過免疫組織化學(xué)分析小鼠海馬神經(jīng)元細胞凋亡，MCAO組Bax和Caspase-3蛋白表達較對照組升高（P＜0.05），電針治療組Bax和Caspase-3蛋白表達較MCAO組降低（P＜0.05）；MCAO組Bcl-2蛋白表達較對照組降低（P＜0.05），電針治療組Bcl-2蛋白表達較MCAO組升高（P＜0.05）。詳見圖1、表4。

2.5 電針治療對H19/EZH2/Notch3信號通路的影響

MCAO組H19、EZH2和Notch3蛋白表達較對照組升高（P＜0.05），電針治療組H19、EZH2和Notch3蛋白表達較MCAO組降低（P＜0.05）。詳見表5、圖2。

2.6 電針治療對脊髓組織中神經(jīng)干細胞Nestin和GFAP蛋白表達的影響

MCAO組Nestin蛋白表達較對照組降低（P＜0.05），GFAP蛋白表達較對照組升高（P＜0.05）；電針治療組Nestin蛋白表達較MCAO組升高（P＜0.05），GFAP蛋白表達較MCAO組降低（P＜0.05）。免疫熒光染色檢測MCAO和電針治療小鼠脊髓組織中Nestin和GFAP蛋白表達，紅色代表GFAP陽性，綠色代表Nestin陽性，免疫熒光染色結(jié)果顯示，與MCAO組比較，電針治療組Nestin蛋白水平增加，GFAP蛋白水平降低。表明電針治療顯著增加神經(jīng)元干細胞增殖并抑制向星形膠質(zhì)細胞分化。詳見圖3、表6。

3 討 論

腦血管病是一種臨床的常見疾病，具有高發(fā)病率、高死亡率、高致殘率和高復(fù)發(fā)率的特點［14-15］。腦梗死約占腦血管疾病的70%以上，是一類影響大、預(yù)后差、治療選擇有限的腦血管疾?。?6-17］。針灸治療阿爾茨海默病、中風(fēng)、缺血性腦卒中痙攣性偏癱可發(fā)揮良好的治療作用，但作用機制尚未明確［18-19］。因此，電針治療腦梗死的作用機制是目前的研究熱點。本研究證實電針刺激對腦梗死小鼠具有保護作用，可改善MCAO小鼠神經(jīng)功能損傷，減小腦梗死體積，降低小鼠炎性細胞因子水平等。細胞凋亡是神經(jīng)系統(tǒng)缺氧缺血性神經(jīng)元丟失的重要原因。本研究通過TUNEL熒光染色分析發(fā)現(xiàn)，電針降低了MCAO小鼠海馬神經(jīng)元凋亡率；蛋白印跡分析發(fā)現(xiàn)電針治療降低MCAO小鼠凋亡蛋白Bax和Caspase-3表達，促進Bcl-2升高，并抑制MCAO引起的炎性因子水平升高。

有研究表明，電針可保護或預(yù)防MCAO早期和中期功能性神經(jīng)元死亡，抑制Notch信號通路［20］。MCAO后是急性但持久的炎癥反應(yīng)，特點是活性氧產(chǎn)生增加。載脂蛋白E（ApoE）在MCAO中具有抗炎、抗氧化和抗凋亡特性，電針通過增加ApoE表達，減輕MCAO炎癥和氧化應(yīng)激反應(yīng)。電針刺激在MCAO后發(fā)揮神經(jīng)保護作用，與腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子和神經(jīng)營養(yǎng)因子上調(diào)相關(guān)。電針可抑制疼痛信號的誘導(dǎo)和傳遞，通過重新平衡神經(jīng)-免疫-內(nèi)分泌相互作用，介導(dǎo)抗傷害和抗炎作用。腦梗死可觸發(fā)多種細胞信號通路，導(dǎo)致細胞存活或細胞損傷。電針通過調(diào)節(jié)腦梗死大鼠模型中的p38、細胞外信號調(diào)節(jié)激酶（ERK1/2）和c-Jun N末端激酶（JNK）抑制腦梗死區(qū)域的細胞凋亡。本研究結(jié)果顯示，MCAO組小鼠Notch3信號通路相關(guān)基因表達顯著增加；電針通過Notch3信號通路抑制腦梗死海馬神經(jīng)元凋亡，Notch3通路在電針治療腦梗死中起關(guān)鍵作用。EZH2增強子是一種組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶，在細胞分化、炎癥、肌成纖維細胞轉(zhuǎn)化和組織纖維化中發(fā)揮著重要作用。EZH2在人類膽管癌和系統(tǒng)性硬化癥中充當(dāng)了Notch信號通路的調(diào)節(jié)劑。分子量為2.3 kDa的長鏈非編碼RNA（lncRNA）H19在MCAO、糖尿病和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中高表達，通過調(diào)節(jié)let-7b、Wnt和Notch信號通路促進神經(jīng)元細胞凋亡。H19可調(diào)節(jié)異常細胞和組織中的 EZH2表達，表明其與EZH2參與MCAO的進展。EZH2在細胞增殖和凋亡中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。在毛囊干細胞中，EZH2通過抑制miR-22，促進細胞增殖和分化，激活信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3（STAT3），增加細胞凋亡和促炎細胞因子的釋放。H19與miR-138的相互作用可調(diào)節(jié)EZH2表達。本研究結(jié)果表明，H19通過激活Notch3信號通路在提高因子基因表達方面發(fā)揮作用，EZH2和H19表達與Notch3信號通路的激活有關(guān)。相關(guān)研究顯示，2、50 Hz的電針刺激在運動性能方面表現(xiàn)出持續(xù)且顯著的增強［21］。本研究結(jié)果顯示，2 Hz的電針刺激可促進神經(jīng)干細胞增殖，抑制Notch3信號通路，促進神經(jīng)干細胞增殖，即抑制Notch3信號通路可作為保護MCAO的神經(jīng)元凋亡的靶點。

綜上所述，MCAO可誘導(dǎo)海馬神經(jīng)元凋亡，電針通過調(diào)控Notch3激活，調(diào)節(jié)Bax/Bcl-2及Nestin和GFAP蛋白，從而阻斷Caspase-3激活抑制神經(jīng)元凋亡，該結(jié)果可為腦梗死的治療提供實驗依據(jù)。

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（收稿日期：2022-06-21）

（本文編輯薛妮）