劉 笑， 王志萍， 李林杰， 王昱涵， 韋松基

( 1. 廣西中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院, 南寧 530200； 2. 廣西高校中藥制劑共性技術(shù)研發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 南寧 530200； 3. 廣西衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院 藥學(xué)院, 南寧 530023 )

壯藥火索藤，又名紅絨毛羊蹄甲、金葉羊蹄甲、合掌風(fēng)、紅毛藤、牛蹄藤、九龍?zhí)?、黃麻藤，為豆科羊蹄甲屬植物火索藤(Bauhiniaaurea)的根或莖，《滇東南紅河地區(qū)種子植物》《廣西植物志：第2卷種子植物》中亦有全株入藥的記載(李樹剛等，2005)?！吨袊?guó)樹木志第2卷》《中華本草4》中記載其主要分布在廣西、云南、貴州、四川等地(鄭萬(wàn)鈞和中國(guó)樹木志編輯委員會(huì)，1985；國(guó)家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會(huì)，1999)，是廣西特色壯藥材(壯藥名為“huhau”，是“愈合”之意)。《中華本草4》《全國(guó)中草藥名鑒上》中記載其性溫，味微苦、澀，具有祛風(fēng)除濕，活絡(luò)止痛的功效，常用于治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、鶴膝風(fēng)、跌打損傷、胃痛、腎炎、黃疸型肝炎等(國(guó)家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會(huì)，1999；謝宗萬(wàn)和余友芩，1996)。目前對(duì)火索藤(Bauhiniaaurea)的研究報(bào)道較少，國(guó)內(nèi)外的研究主要集中在該藥材的化學(xué)成分方面，僅尚小雅(2006)從其中分離鑒定了40個(gè)化合物，包括黃酮類、甾體類、萜類、多環(huán)酚類、腈基化合物及水解產(chǎn)物、苯丙素類、生物堿類、芳香酸類、氨基酸類、脂肪酸及其酯類等，未見有明確的用藥品種和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的相關(guān)研究。由于火索藤在民間存在同名異物的情況，又缺乏統(tǒng)一的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，不同地區(qū)極易出現(xiàn)用藥混亂的現(xiàn)象，使得各地用藥質(zhì)量不一，導(dǎo)致臨床藥效存在較大差異。因此，為了較好地控制火索藤的質(zhì)量，確保該藥材的質(zhì)量穩(wěn)定，本文對(duì)火索藤開展生藥學(xué)研究，包括基原鑒別、性狀鑒別、顯微鑒別、薄層鑒別及含量測(cè)定，旨在為其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥材 火索藤樣品分別采自廣西來(lái)賓市、岑溪市、梧州市、玉林市、河池市及南寧市等7個(gè)不同市縣或鄉(xiāng)鎮(zhèn)，其中采自廣西來(lái)賓市興賓區(qū)天堂鄉(xiāng)的火索藤，經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學(xué)生藥學(xué)專家韋松基教授鑒定為豆科植物火索藤(Bauhiniaaurea)的帶葉藤莖，編號(hào)HST-1，作為對(duì)照藥材，并將其莖、葉、果莢制成臘葉標(biāo)本。2～10批按采收日期分別編號(hào)HST-2～HST-10。10批藥材的采集時(shí)間地點(diǎn)如下：HST-1(20190726來(lái)賓興賓)、HST-2(20190901岑溪安平)、HST-3(20190914梧州龍圩)、HST-4(20200120河池東蘭)、HST-5(20200616玉林北流)、HST-6(20201015南寧隆安)、HST-7(20201015岑溪安平)、HST-8(20210113南寧隆安)、HST-9(20210225梧州龍圩)、HST-10(20210227玉林北流)。10批藥材均存放于廣西高校中藥制劑共性技術(shù)研發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室。

1.1.2 儀器、試劑和試藥 儀器：Ni-U型熒光生物顯微鏡(帶DS-Ri2型成像系統(tǒng)，日本Nikon公司)；SQP型電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器北京有限公司)；FLBP-200型萬(wàn)能高速粉碎機(jī)(上海菲力博食品機(jī)械有限公司)；HWS-26型電熱恒溫水浴鍋(上海齊欣科學(xué)儀器有限公司)；PL-FS40T型超聲波清洗機(jī)(東莞康士潔超聲波科技有限公司)；LC-2030 Plus型高效液相色譜儀，包括 UV 型紫外檢測(cè)器、LabSolution工作站(日本島津公司)。

試劑：無(wú)水乙醇、乙醇、甲醇、甲酸、丙三醇，試劑均為分析純。

試藥：三氯化鋁、水合氯醛、落新婦苷(純度：98.14%，批號(hào)：MUST-20032410)、槲皮苷(純度：98.87% ，批號(hào)：MUST-20121401)、金絲桃苷(純度：98.49%，批號(hào)：MUST-20052210)，對(duì)照品均購(gòu)自成都曼思特生物科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1基原鑒別 根據(jù)火索藤的植物學(xué)形態(tài)特征，結(jié)合對(duì)照藥材、臘葉標(biāo)本及文獻(xiàn)描述進(jìn)行鑒別。觀察內(nèi)容包括原植物莖(本質(zhì)或草質(zhì)，圓或方莖，表面有無(wú)附屬物)、葉(葉序、單葉或復(fù)葉、有無(wú)托葉、有無(wú)葉柄、葉形、葉基、葉端、葉緣、葉脈、顏色，表面有無(wú)附屬物)、花(花序、花萼、花冠、雌蕊、雄蕊、子房上下位)、果實(shí)(類型、顏色)、種子(顏色、形狀)。

1.2.2 性狀鑒別 對(duì)藥材的形狀、大小、表面(色澤、有無(wú)附屬物)、質(zhì)地、斷面(色澤、皮部、木部、射線、髓部)、氣味等進(jìn)行觀察描述。

1.2.3 顯微鑒別 石蠟組織切片法：取材→固定→水沖洗→脫水→透明→浸蠟→包埋→切片→粘片→脫蠟→染色→烤片→封藏→貼標(biāo)簽(朱利霞等，2017)。

粉末制片法：照《中國(guó)藥典(2020年版)》四部(通則2001)顯微鑒別法的粉末制片法進(jìn)行(國(guó)家藥典委員會(huì)，2020)。

1.2.4 薄層鑒別 取火索藤藥材粉末1 g(過(guò)2號(hào)篩)，置于150 mL具塞錐形瓶中，加甲醇20 mL，超聲(150 W，40 kHz)30 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL溶解，即得供試品溶液。另取金絲桃苷、槲皮苷、落新婦苷對(duì)照品，加甲醇分別制成每l mL含0.2 mg的溶液，即得對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(通則0502)試驗(yàn)(國(guó)家藥典委員會(huì)，2020)，吸取上述溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以甲醇-甲酸-水(18∶1∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁乙醇試液，加熱揮干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。

1.2.5 含量測(cè)定

1.2.5.1 色譜條件 色譜柱：Inertsil ODS-3 C18色譜柱(4.6 mm × 250 mm，5 μm)；流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸水(20∶80)；柱溫：30 ℃；流速：1.0 mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)：291 nm；進(jìn)樣量：10 μL。

1.2.5.2 混合對(duì)照品溶液的制備 分別取落新婦苷、槲皮苷對(duì)照品適量，精密稱定， 置25 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，即得上述2種成分質(zhì)量濃度分別為0.588 8、0.395 5 mg·mL-1的混合對(duì)照品母液。取1 mL混合對(duì)照品母液置于10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.22 μm微孔濾膜濾過(guò)，即得上述2種成分質(zhì)量濃度分別為0.058 88、0.039 55 mg·mL-1的混合對(duì)照品溶液。

1.2.5.3 供試品溶液的制備 取火索藤粗粉(過(guò)2號(hào)篩)1 g，精密稱定，置帶塞錐形瓶中，精密量取25 mL甲醇加入，稱重，超聲處理1 h，放涼后甲醇補(bǔ)足失重，搖勻，濾過(guò)。取濾液過(guò)0.22 μm微孔濾膜即得。

1.2.5.4 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 分別取“1.2.5.2”“1.2.5.3”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液、供試品溶液(批號(hào)：20190726)適量，按“1.2.5.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。

1.2.5.5 線性關(guān)系考察 取“1.2.5.2”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液0.1、1 mL置于100 mL容量瓶中，另取1.0、2.0、3.0、4.0 mL置于10 mL容量瓶中，分別加甲醇稀釋至刻度，得到 6 個(gè)不同質(zhì)量濃度的混合對(duì)照品溶液，分別取適量上述對(duì)照品混合溶液，經(jīng)0.22 μm微孔濾膜濾過(guò)，取濾液按“1.2.5.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以對(duì)照品峰面積為縱坐標(biāo)，對(duì)照品進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.5.6 精密度試驗(yàn) 取“1.2.5.2”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液，經(jīng)0.22 μm微孔濾膜濾過(guò)，按“1.2.5.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，記錄峰面積，計(jì)算被測(cè)組分峰面積RSD值。

1.2.5.7 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取火索藤粗粉(過(guò)2號(hào)篩，批號(hào)：20190726)，平行6份，每份1 g，按“1.2.5.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“1.2.5.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，計(jì)算被測(cè)組分含量及RSD值。

1.2.5.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取“1.2.5.3”項(xiàng)下供試品溶液(批號(hào)：20190726)適量，分別于室溫下放置0、2、4、8、12、24 h時(shí)，按“1.2.5.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，計(jì)算被測(cè)組分含量及RSD值。

1.2.5.9 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取火索藤粗粉(過(guò)2號(hào)篩，批號(hào)：20190726)，平行6份，每份0.5 g，按照相當(dāng)于樣品中含量100%的比例分別精密加入對(duì)照品適量，按“1.2.5.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“1.2.5.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄被測(cè)組分峰面積，計(jì)算平均回收率。

1.2.5.10 樣品含量測(cè)定 按“1.2.5.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“1.2.5.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，以外標(biāo)法計(jì)算各批次落新婦苷、槲皮苷的含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 基原鑒別

火索藤為多年生粗壯木質(zhì)藤本，莖圓柱形，直徑0.5～2.0 cm(可更大)，表面棕黃色或黃綠色，具點(diǎn)狀皮孔，密被紅棕色茸毛；單葉互生，葉柄長(zhǎng)3～9 cm，密被紅棕色茸毛，托葉卷須常對(duì)生于葉柄基部，初時(shí)被毛，漸變禿凈，葉近圓形，長(zhǎng)6～14 cm，寬6～13 cm，葉基心形，先端分裂達(dá)葉長(zhǎng)的1/3～1/2，裂片頂端急尖，少為鈍圓，全緣，葉緣具紅棕色茸毛，基出脈11或13，葉上表面鮮綠色或黃綠色，除脈上有毛外其余無(wú)毛，下表面淺綠色或黃綠色，密被紅棕色茸毛，脈上毛更密，葉厚紙質(zhì)；傘房花序頂生或腋生，具花梗，長(zhǎng)2～5 cm，密被茸毛，萼片5枚，披針形，外部被毛，花冠5枚，白色，匙形，外部被毛，可育雄蕊3枚，花絲無(wú)毛，雌蕊1枚，花柱上半部無(wú)毛，子房密被紅棕色柔毛，子房上位；莢果條帶狀，長(zhǎng)15～30 cm，寬4～6 cm，果皮密被紅棕色茸毛，果瓣木質(zhì)，硬；種子6～11枚，橢圓形，扁平，長(zhǎng)約2 cm(圖1，圖2)。

圖 1 火索藤原植物Fig. 1 Original plant of Bauhinia aurea

圖 2 火索藤臘葉標(biāo)本Fig. 2 Exsiccata of Bauhinia aurea

2.2 性狀鑒別

本品為干燥藤莖，圓柱形，表面褐色或淡黃色，直徑0.5～2.0 cm(可更大)，具點(diǎn)狀皮孔，密被紅棕色茸毛，斷面黃白色，中心具白色“十”字型海綿狀髓部，質(zhì)堅(jiān)實(shí)，難折斷，斷面不平坦，纖維性強(qiáng)。葉互生，有長(zhǎng)柄，密被紅棕色茸毛，托葉卷須常對(duì)生于葉柄基部，初時(shí)被毛，漸變禿凈，展平后葉片近圓形，葉基心形，先端分裂達(dá)葉長(zhǎng)的1/3～1/2，全緣，葉上表面綠色或綠褐色，除脈上有毛外其余無(wú)毛，下表面黃綠色或綠褐色，密被紅棕色茸毛，脈上毛更密，葉厚紙質(zhì)。氣微，味微苦、澀(圖3)。

圖 3 火索藤原藥材Fig. 3 Crude drug of Bauhinia aurea

2.3 顯微鑒別

2.3.1 莖橫切面 類圓形。直徑0.5～0.8 cm，外表殘存非腺毛，基部略膨大。木栓層由6～10列木栓細(xì)胞組成，木栓細(xì)胞紅棕色，類長(zhǎng)方形，切向排列整齊緊密，外層木栓細(xì)胞多破碎。皮層由5～10列薄壁細(xì)胞組成，類橢圓形或類長(zhǎng)方形，大小不一。皮層內(nèi)側(cè)可見大量晶纖維及石細(xì)胞，木化程度高。韌皮部細(xì)胞較小，多不規(guī)則，排列緊密。形成層明顯，呈環(huán)狀。木質(zhì)部發(fā)達(dá)，由導(dǎo)管、木纖維及木薄壁細(xì)胞組成，導(dǎo)管與纖維木化程度高，導(dǎo)管沿徑向緊密排列，木射線明顯，由一列薄壁細(xì)胞組成，徑向延長(zhǎng)。髓部較小，由類圓形薄壁細(xì)胞組成，排列疏松(圖4)。

1. 木栓層; 2. 皮層; 3. 纖維束; 4. 石細(xì)胞群; 5. 韌皮部; 6. 形成層; 7. 木質(zhì)部; 8. 髓部。1. Phellem layer; 2. Cortex; 3. Fiber bundles; 4. Stone cells; 5. Phloem; 6. Cambium; 7. Xylem; 8. Pith.圖 4 火索藤莖橫切面組織構(gòu)造 (20×) Fig. 4 Tissue structure of transverse section of stem (20×) from Bauhinia aurea

2.3.2 葉橫切面 上下表皮各1列細(xì)胞，角質(zhì)化，上表皮細(xì)胞類長(zhǎng)方形，排列整齊緊密；下表皮細(xì)胞較小，類圓形。非腺毛為多細(xì)胞非腺毛，頂端細(xì)胞細(xì)長(zhǎng)，基部1～2枚細(xì)胞短縮，于上、下表皮均有分布，其中上表皮僅在主脈處可見，下表皮主脈處毛更密。有的非腺毛2根著生于同一根部。氣孔存在于下表皮。葉為異面葉，上表皮下方為柵欄組織，由2列排列緊密的類長(zhǎng)方形薄壁細(xì)胞組成，下表皮內(nèi)為海綿組織，排列較疏松，可見細(xì)胞間隙。主脈于下表面凸起。主脈下表皮內(nèi)為皮層薄壁細(xì)胞，細(xì)胞較大，常含草酸鈣方晶和簇晶。葉主脈由上下兩個(gè)大小不同的外韌型維管束組成，木質(zhì)部在內(nèi)，導(dǎo)管孔徑較大，韌皮部在外，細(xì)胞小且多不規(guī)則，排列緊密，韌皮部?jī)?nèi)可見多個(gè)分泌腔斷續(xù)排列成環(huán)。維管束外方圍繞著由纖維束形成的維管束鞘，纖維束周圍的薄壁細(xì)胞內(nèi)常含草酸鈣方晶，形成晶纖維(圖5，圖6)。

1. 上表皮; 2. 柵欄組織; 3. 海綿組織; 4. 木質(zhì)部; 5. 韌皮束; 6. 纖維束; 7. 皮層; 8. 非腺毛; 9. 下表皮。1. Upper epidermis; 2. Palisade tissue; 3. Spongy tissue; 4. Xylem; 5. Phloem; 6. Fiber bundles; 7. Cortex; 8. Non-glandular hair; 9. Lower epidermis.圖 5 火索藤葉橫切面組織構(gòu)造 (20×)Fig. 5 Tissue structure of transverse section of leaf (20×) from Bauhinia aurea

1. 晶纖維; 2. 草酸鈣簇晶; 3. 草酸鈣方晶。1. Crystal fiber; 2. Calcium oxalate cluster crystal; 3. Calcium oxalate square crystal.圖 6 火索藤葉橫切面特征結(jié)構(gòu) (20×)Fig. 6 Characteristic structure of transverse section of leaf (20×) from Bauhinia aurea

2.3.3 葉表面片 上、下表皮細(xì)胞垂周壁波狀彎曲，上表皮氣孔較少，下表皮分布大量氣孔，氣孔類型為平軸式，副衛(wèi)細(xì)胞2枚，大小相近。氣孔指數(shù)約25%(圖7)。

A. 上表皮; B. 下表皮。A. Upper epidermis; B. Lower epidermis.圖 7 火索藤葉表面圖 (40×)Fig. 7 Leaf surface of Bauhinia aurea (40×)

2.3.4 粉末片 灰綠色。(1)淀粉粒較少，單粒、復(fù)粒均可見，臍點(diǎn)為點(diǎn)狀，單粒類圓形，可見層紋，直徑2.22～4.94 μm，復(fù)粒由2～4個(gè)小分粒組成，直徑10.57～15.97 μm。(2)草酸鈣簇晶散在或見于葉肉細(xì)胞內(nèi)，晶體輪廓較鈍，直徑10.7～40.02 μm。(3)草酸鈣方晶散在或見于纖維束旁的薄壁細(xì)胞內(nèi)，晶體棱角分明，直徑2.39～18.61 μm。(4)纖維束多見，聚集成束，纖維細(xì)胞紡錘形，胞腔小，直徑8～12 μm，有的纖維束旁薄壁細(xì)胞內(nèi)含有草酸鈣方晶，形成晶纖維。(5)石細(xì)胞多見，或散在或成群，細(xì)胞壁全面增厚，紋孔明顯，直徑18.16～122.27 μm。(6)具緣紋孔導(dǎo)管直徑18.76～39.23 μm。(7)非腺毛眾多，為多細(xì)胞非腺毛，頂端細(xì)胞細(xì)長(zhǎng)，基部1～2枚細(xì)胞短縮。直徑12～18 μm，長(zhǎng)151.29～603.91 μm。(8)氣孔為平軸式，副衛(wèi)細(xì)胞2枚，大小相近，表皮細(xì)胞垂周壁波狀彎曲，氣孔直徑9.38～23.5 μm(圖8)。

1. 淀粉粒; 2. 草酸鈣簇晶; 3. 草酸鈣方晶; 4. 晶纖維; 5. 石細(xì)胞; 6. 具緣紋孔導(dǎo)管; 7. 非腺毛; 8. 氣孔(平軸式)。1. Starch grain; 2. Calcium oxalate cluster crystal; 3. Calcium oxalate square crystal; 4. Crystal fiber; 5. Stone cell; 6. Bordered pit vessel; 7. Non-glandular hair; 8. Stomata.圖 8 火索藤粉末特征圖Fig. 8 Characteristic micrographs of Bauhinia aurea powder

2.4 薄層鑒別

在10批火索藤藥材的薄層色譜中，均出現(xiàn)3個(gè)清晰斑點(diǎn)，由下至上分別與對(duì)照品金絲桃苷、槲皮苷、落新婦苷斑點(diǎn)一一對(duì)應(yīng)，且比移值與對(duì)照品一致(Rf分別為0.35、0.47和0.63)，比移值均在0.3～0.7范圍內(nèi)，斑點(diǎn)清晰、分離度均較好(圖9)。提示火索藤中含有金絲桃苷、槲皮苷與落新婦苷。

1. 金絲桃苷; 2. 槲皮苷; 3. 落新婦苷; 4. 對(duì)照藥材(HST-1); 5-13. HST-2～HST-10。1. Hyperoside; 2. Quercitin; 3. Astilbin; 4. Reference crude drug (HST-1); 5-13. HST-2-HST-10.圖 9 10批火索藤薄層色譜圖Fig. 9 Thin layer chromatograms of 10 batches of Bauhinia aurea

2.5 含量測(cè)定

2.5.1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 混合對(duì)照品溶液與供試品溶液在相同保留時(shí)間處均有相應(yīng)的色譜峰出現(xiàn)，各色譜峰分離較好；理論板數(shù)以槲皮苷峰計(jì)應(yīng)不低于5 000(圖10)。

1. 落新婦苷; 2. 槲皮苷。1. Astilbin; 2. Quercitin.圖 10 混合對(duì)照品溶液(A)和火索藤供試品溶液(B)高效液相色譜圖Fig. 10 High performance liquid chromatograms of mixed-reference solution (A) and Bauhinia aurea sample solution (B)

2.5.2 線性關(guān)系考察 以峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)(X)，分別得到落新婦苷與槲皮苷的線性方程，即Y落新婦苷=2 503 158.3X-7 305.179 2(r=0.999 6)，Y槲皮苷=1 110 611.4X-5 385.417 4(r=0.999 8)，結(jié)果表明落新婦苷、槲皮苷進(jìn)樣量分別為0.005 888～2.355 μg、0.039 55～1.582 μg，并且與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.5.3 精密度試驗(yàn) 落新婦苷、槲皮苷峰面積的RSD值分別為 0.26%、0.34%(n=6)，表明儀器精密度良好。

2.5.4 重復(fù)性試驗(yàn) 落新婦苷、槲皮苷的平均含量分別為0.346 4、1.533 mg·g-1，RSD值分別為0.97%、0.74%(n=6)，表明試驗(yàn)所建立的方法重復(fù)性良好。

2.5.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 落新婦苷、槲皮苷的平均含量分別為0.379 9、1.623 mg·g-1，RSD值分別為0.52%、1.96%(n=6)，表明供試品溶液于室溫下放置24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.5.6 加樣回收率試驗(yàn) 由表1可知，火索藤中落新婦苷平均回收率為96.42%，RSD值為2.55%；槲皮苷平均回收率為104.20%，RSD值為1.79%。表明試驗(yàn)所建立的方法準(zhǔn)確可靠。

表 1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果 (n=6)Table 1 Results of recovery tests (n=6)

2.5.7 樣品含量測(cè)定 由表2可知，10批火索藤藥材中均含落新婦苷、槲皮苷。槲皮苷含量比較均勻，在1.324～2.431 mg·g-1之間；而落新婦苷含量相差較大，在0.025 72～2.912 mg·g-1之間。如結(jié)果所示，HST-6、HST-8的落新婦苷、槲皮苷含量均較高，HST-2兩苷含量均較低。不同批次之間落新婦苷含量相差了100多倍，說(shuō)明火索藤的質(zhì)量波動(dòng)較大，應(yīng)嚴(yán)格控制其質(zhì)量。

表 2 10批火索藤中落新婦苷、槲皮苷的含量Table 2 Contents of astilbin and quercitin in 10 batches of Bauhinia aurea

3 討論與結(jié)論

本研究所用火索藤粉末均為莖葉質(zhì)量比為2∶1(m莖∶m葉=2∶1)的混合粉末。前人對(duì)火索藤的研究主要為對(duì)其藤莖的研究(尚小雅，2006)，未見有對(duì)葉的記載。筆者確定研究對(duì)象前，分別對(duì)莖、 葉粗粉進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)葉兩苷含量明顯高于莖，從有效成分含量高的角度出發(fā)，故將葉納入一并研究，確定莖葉混合粉末為研究對(duì)象；混合比例選擇莖葉質(zhì)量比2∶1，此比例較符合火索藤的自然生長(zhǎng)狀況。藥材加工處理時(shí)，筆者曾對(duì)每批藥材的莖、葉分別稱重，發(fā)現(xiàn)多數(shù)批次莖、葉質(zhì)量比大約為2∶1，固定取材比例，可確保實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性、科學(xué)性，減少誤差。

薄層鑒別選擇金絲桃苷、槲皮苷、落新婦苷作為定性指標(biāo)，是因?yàn)?種成分均為火索藤的藥效相關(guān)成分(尚小雅，2006)。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，金絲桃苷具有抗肝損傷、抗炎、抗菌、鎮(zhèn)痛作用(張成偉等，2007；李錦松等，2015)，槲皮苷有抗炎鎮(zhèn)痛作用(楊琳，2015)，落新婦苷有鎮(zhèn)痛、抗炎、保肝、護(hù)腎作用(李玉琪等，2017)。其中，羊蹄甲屬植物含有落新婦苷的報(bào)道極少，目前只發(fā)現(xiàn)2種，一種是分布在中國(guó)的火索藤，另一種是在中國(guó)無(wú)分布的羊蹄甲屬植物Bauhiniamegalandra(Estrada et al., 2005；李玉琪等，2017)。綜上表明，落新婦苷為中國(guó)境內(nèi)羊蹄甲屬植物火索藤的特有成分，以該成分作為定性指標(biāo)具有專屬性。

含量測(cè)定中不同批次火索藤落新婦苷含量差異較大，推測(cè)與產(chǎn)地、采收季節(jié)及藥材生長(zhǎng)年份有關(guān)。由采集信息可知，HST-2、HST-7為同一產(chǎn)地，HST-3、HST-9為同一產(chǎn)地，HST-5、HST-10為同一產(chǎn)地，但落新婦苷含量仍相差較大，推測(cè)落新婦苷作為次生代謝產(chǎn)物在火索藤中的積累需要時(shí)間，植物生長(zhǎng)年份越長(zhǎng)，落新婦苷含量越高。下一步筆者將對(duì)此推測(cè)開展研究驗(yàn)證。

本文分別從基原、性狀、顯微、薄層及含量測(cè)定5個(gè)方面對(duì)火索藤進(jìn)行生藥學(xué)研究，詳細(xì)描述了火索藤的原植物形態(tài)、原藥材的性狀特征?？偨Y(jié)了鑒別要點(diǎn)，即火索藤以其莖、葉上密被紅棕色茸毛為顯著鑒別特征；確定了火索藤石蠟切片、粉末片的顯微鑒別特征，即草酸鈣簇晶、晶纖維、石細(xì)胞、具緣紋孔導(dǎo)管、非腺毛、氣孔可作為火索藤粉末鑒別的重要依據(jù)；以金絲桃苷、槲皮苷、落新婦苷為指標(biāo)，建立了適用的薄層鑒別方法；又以落新婦苷、槲皮苷為指標(biāo)，建立了含量測(cè)定方法。對(duì)于火索藤的同名異物情況，鑒別藥材來(lái)源準(zhǔn)確與否至關(guān)重要，本研究的性狀鑒別、顯微鑒別、薄層鑒別明確了該藥材的主要鑒別特征，解決了藥材真?zhèn)伪鎰e的問(wèn)題；而含量測(cè)定則分析了該藥材不同地區(qū)臨床藥效不一的原因(研究中不同產(chǎn)地、批次有效成分含量相去甚遠(yuǎn))。綜上所述，本研究建立的含量測(cè)定方法準(zhǔn)確、可靠，可在一定程度上評(píng)價(jià)各地火索藤的品質(zhì)，為其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供科學(xué)依據(jù)。