李 鑫，余 玲，劉 葭，梅 凱，李婷婷，郝逗逗，王昕怡，王靈敏，吳 清*

·藥劑與工藝·

黃連-干姜有效組分自微乳給藥系統(tǒng)的制備與評價

李 鑫1，余 玲2，劉 葭1，梅 凱1，李婷婷1，郝逗逗1，王昕怡1，王靈敏1，吳 清1*

1. 北京中醫(yī)藥大學中藥學院，北京 102488 2. 江西醫(yī)學高等?？茖W校，江西 上饒 334000

研究黃連-干姜有效組分自微乳給藥系統(tǒng)（-effective component self-microemulsion drug deliverysystem，Cop-Gin-SMEDDS）的處方與制備工藝，并且進行體外質量評價。通過溶解度實驗、偽三元相圖的繪制和D-最優(yōu)混料設計確定Cop-Gin-SMEDDS的最佳處方組成；通過單因素考察，確定最佳制備工藝，并對Cop-Gin-SMEDDS理化性質、穩(wěn)定性、體外釋放等進行評價。最終確定Cop-Gin-SMEDDS的最優(yōu)處方（不含黃連總生物堿）為油酸5%，1,2-丙二醇41%，聚氧乙烯（40）氫化蓖麻油49%，干姜油5%；黃連總生物堿的投藥量為5%；最佳制備工藝為在37 ℃、轉速300 r/min條件下磁力攪拌10 min。得到的Cop-Gin-SMEDDS為深紅色澄清透明液體，稀釋后為黃色、均一透明的微乳溶液；透射電鏡下為圓球形，大小均勻，形態(tài)規(guī)則；平均粒徑大小為（22.21±0.45）nm、多分散指數(shù)（polydispersity index，PDI）為0.195±0.019、ζ電位為（?2.67±0.11）mV。Cop-Gin-SMEDDS中鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸黃連堿、表小檗堿及6-姜辣素的載藥量分別為（13.51±0.71）、（1.37±0.06）、（2.36±0.27）、（0.83±0.14）、（6.34±0.04）mg/g，包封率分別為（96.36±0.34）%、（95.49±0.59）%、（92.56±0.81）%、（95.17±0.39）%、（94.39±1.63）%。Cop-Gin-SMEDDS中鹽酸小檗堿在pH 7.4 PBS緩沖液、蒸餾水和pH 1.2鹽酸溶液中的24 h累積釋放率分別為（70.80±0.04）%、（96.17±0.10）%、（85.77±0.10）%；6-姜辣素在相應釋放介質中的24 h累積釋放率分別為（27.70±0.14）%、 （32.48±0.14）%、（32.96±0.07）%。穩(wěn)定性實驗顯示，將Cop-Gin-SMEDDS在不同溫度下放置30 d后其指標成分及外觀性狀均無明顯變化。制備的Cop-Gin-SMEDDS外觀良好，載藥量和包封率高，能提高藥物的穩(wěn)定性和釋放量，有望進一步開發(fā)制備成口服給藥制劑。

干姜油；黃連總生物堿；自微乳給藥系統(tǒng)；偽三元相圖；D-最優(yōu)混料設計；黃連；干姜；鹽酸小檗堿；鹽酸巴馬??；鹽酸黃連堿；表小檗堿；6-姜辣素

黃連-干姜藥對最早出自于張仲景《傷寒論》，黃連苦寒清熱、厚腸止利，干姜辛溫散寒、溫中止瀉，二藥合用，一寒一熱，辛開苦降，多用于治療痢疾、泄瀉等病[1]?，F(xiàn)代研究表明，黃連中的黃連總生物堿[2-3]和干姜中的姜辣素與揮發(fā)油[4]均具有抗炎、抗氧化等作用[5-12]，這些成分聯(lián)合使用時能明顯增強潰瘍性結腸炎等疾病的治療效果[13]。然而黃連總生物堿和干姜油均具有水溶性差的特點，并且干姜中姜酚類、揮發(fā)油類成分性質不穩(wěn)定，會導致局部藥物濃度低，影響其藥效作用發(fā)揮[14-17]。因此，改善黃連總生物堿和干姜油的溶解度，提高姜辣素類、揮發(fā)油類成分的穩(wěn)定性，對于這兩種有效組分聯(lián)合使用具有重要意義。但查閱文獻發(fā)現(xiàn)，目前關于這2種有效成分的增溶增穩(wěn)方面的研究較少。

自微乳給藥系統(tǒng)（self-microemulsion drug delivery system，SMEDDS）[18-19]是由表面活性劑、助表面活性劑和油組成的均勻混合體系。有研究報道，用中藥揮發(fā)油作為油相制備的自微乳包裹難溶性藥物，不僅能提高藥物的溶解度和揮發(fā)油的穩(wěn)定性，而且還能提升藥物的生物利用度[20]。因此，本研究根據(jù)自微乳給藥系統(tǒng)的性質特點，結合“藥輔合一”的原則，首次將干姜油作為油相，與黃連總生物堿共載于同一體系中，制備黃連-干姜有效組分自微乳給藥系統(tǒng)（-effective component self-microemulsion drug deliverysystem，Cop-Gin-SMEDDS），以期實現(xiàn)提高黃連總生物堿和干姜油的溶解度和穩(wěn)定性的目的，為未來二者的聯(lián)合用藥提供參考。

1 材料

LC-10AD型高效液相色譜儀、SPD1020A檢測器，日本島津國際貿易有限公司；756PC型紫外可見分光光度計，上海舜宇恒平科學儀器有限公司；BT125D型電子天平，北京賽多利斯科學儀器有限公司；ZNCL-S-5D多點智能磁力攪拌器，河南愛博特科技發(fā)展有限公司；G16型醫(yī)用高速離心機，河北安新白洋離心機廠；Zetasize Nano ZS納米粒徑儀，英國馬爾文公司；JEM-1400 plus型透射式電子顯微鏡（TEM），日本JEOL公司。

黃連總生物堿提取物，批號20200915，鹽酸小檗堿質量分數(shù)22.39%，鹽酸巴馬汀質量分數(shù)5.69%，鹽酸黃連堿質量分數(shù)6.32%，表小檗堿質量分數(shù)3.64%，實驗室自制；干姜油提取物，6-姜辣素質量分數(shù)13.52%，批號GON1010L20-2020041701，湖南和廣生物科技有限公司；對照品鹽酸小檗堿，質量分數(shù)≥98%，批號S13M9D55861，上海源葉生物科技有限公司；6-姜辣素，批號MUST-16122205，質量分數(shù)99.65%，成都曼斯特生物科技有限公司；蓖麻油，批號Z24O11Y128870，上海源葉生物科技有限公司；油酸，批號C10005653，上海麥克林生化科技有限公司；聚氧乙烯（40）氫化蓖麻油（Cremophor RH40，RH40），批號2822716860，北京鳳禮精求商貿有限公司；辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯（Labrasol，批號175459）、二乙二醇單乙基醚（Transcutol P，批號159651），法國Gattefosse公司；1,2-丙二醇（1,2-propanediol，PG），批號20200427，天津福晨化學試劑有限公司；異丙醇，批號20180614，北京化工廠；其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 黃連總生物堿飽和溶解度的測定

2.1.1 測定波長的確定 稱取適量鹽酸小檗堿、黃連總生物堿提取物、干姜油及其他輔料分別用甲醇溶解，以甲醇為空白對照溶液，采用紫外可見分光光度計設定波長200～800 nm，掃描間隔為1 nm，對鹽酸小檗堿溶液、黃連總生物堿溶液及各輔料溶液進行吸收波長掃描。結果（圖1）顯示，對照品和供試品峰形基本一致，雖然在350 nm和425 nm處都有較大吸收，但部分輔料在350 nm處有干擾，因此確定測定波長為425 nm。

2.1.2 線性關系考察 精密稱定適量鹽酸小檗堿對照品，置于10 mL量瓶中，用甲醇溶解并定容，搖勻后濾過，得492.9 μg/mL鹽酸小檗堿對照品溶液。精密吸取鹽酸小檗堿對照品溶液各0.05、0.10、0.30、0.50、1.00、1.50、2.00 mL，分別置于10 mL量瓶中，加甲醇定容，搖勻，以甲醇為空白對照，測定吸光度（）。以鹽酸小檗堿對照品質量濃度為橫坐標（），值為縱坐標（），進行線性回歸，得鹽酸小檗堿的回歸方程為＝0.013 8＋0.001 4，＝1.000 0。結果表明，鹽酸小檗堿在2.47～98.98 μg/mL線性關系良好。

圖1 紫外-可見吸收光譜圖

2.1.3 黃連總生物堿在各項中飽和溶解度的測定 依次精密移取各油相、表面活性劑、助表面活性劑2 mL至離心管中，分別向其中加入黃連總生物堿提取物，渦旋5 min，超聲20 min，并在37 ℃水浴中振蕩48 h，平衡后的樣品在離心半徑5.7 cm的離心機中以10 000 r/min離心30 min，取適量上層輔料用甲醇稀釋，測量其值，并按照“2.1.2”項下建立的方法計算黃連總生物堿飽和溶解度。由表1可知，油酸對黃連總生物堿溶解性最好；表面活性劑中Labrasol、RH40對黃連總生物堿溶解度較高；助表面活性劑中PG對黃連總生物堿的溶解度遠遠大于其他助表面活性劑。

2.2 偽三元相圖篩選各相用量范圍

通過考察各輔料之間的相容性確定表面活性劑為RH40、助表面活性劑為PG，結合課題組前期均勻設計實驗結果和投藥量預實驗，確定油相為干姜油-油酸（1∶1）。取篩選后確定的油相、表面活性劑和助表面活性劑配成系列不同比例（1∶1∶8、1∶2∶7、1∶3∶6、…、8∶1∶1）的混合輔料，共36組，處方總量固定為1 g。磁力攪拌混勻后加入37 ℃、100 mL蒸餾水中，設定轉速為200 r/min繼續(xù)磁力攪拌，觀察能否形成澄清透明并帶有少許藍色乳光的溶液，記錄能形成該溶液的比例。使用Origin 8.0軟件繪制偽三元相圖，用于確定各相輔料用量范圍。將能形成符合要求的溶液的比例記錄并繪制偽三元相圖，結果如圖2所示。其中，灰色區(qū)域代表可形成自微乳的區(qū)域，在此范圍內自微乳乳化迅速，沒有分層現(xiàn)象，乳化時間小于1 min，且能產生丁達爾效應。初步確定自微乳處方輔料用量范圍（以質量計）為10%～20%的干姜油-油酸（1∶1）、20%～70% RH40和20%～70% PG。

表1 黃連總生物堿在不同輔料中飽和溶解時的溶解度(, n = 3)

圖2 自微乳處方的偽三元相圖

2.3 D-最優(yōu)混料設計優(yōu)化自微乳處方

2.3.1 D-最優(yōu)混料設計 參考偽三元相圖的結果，

將油相、表面活性劑、助表面活性劑的總量定為100%，用Design Expert 11.1軟件設計D-最優(yōu)混料設計的比例，根據(jù)該設計比例制備自微乳。固定黃連總生物堿提取物投藥量為5%，制備溫度為37 ℃，攪拌轉速為200 r/min，攪拌5 min后于37 ℃條件下用50倍量蒸餾水稀釋自微乳，溫和攪拌乳化后考察微乳的粒徑、PDI及乳化時間，確定最優(yōu)處方比例。設計的比例及考察結果見表2。

2.3.2 數(shù)據(jù)模型擬合及響應面分析 運用Design Expert 11.1軟件，以油相用量（1）、表面活性劑RH40用量（2）、助表面活性劑PG用量（3）為影響因素，分別以粒徑（1）、PDI（2）、乳化時間（3）為評價指標，對實驗結果進行模型擬合，回歸分析結果見表3。模型＜0.05，表明該模型對于所有響應參數(shù)都是顯著的。

結果表明自變量對粒徑、PDI、乳化時間都有顯著影響，粒徑最優(yōu)擬合符合特殊四次模型（special quartic model），PDI、乳化時間的最優(yōu)擬合符合立方模型（cubic model）。方程中的各變量系數(shù)為正值，表示因子與響應值呈正相關，而負值表示負相關。其中擬合方程分別為1＝?753.201＋28.882＋90.143＋950.5112＋1 205.9013－140.5523＋694.841223－571.411223＋1 060.311232，2＝0.974 1；2＝78.751＋0.316 92＋0.298 63－136.7812－132.3013－0.369 723＋128.66123－62.6312(1－2)－55.5313(1－3)＋0.011 523(2－3)，2＝0.965 4；3＝?667.971＋9.162＋0.388 23＋1 146.8112＋1 100.9313－14.0723－962.95123＋516.0712(1－2)＋443.7013(1－3)－18.2623(2－3)，2＝0.988 1。

表2 D-最優(yōu)混料設計及結果

根據(jù)回歸分析結果，分別得到各自變量與粒徑、PDI及乳化時間作為因變量的二維等高線和三維響應圖，結果如圖3所示。由結果可知，表面活性劑和助表面活性劑的用量對自微乳成型的影響較大，乳化效率隨著表面活性劑含量增大而下降，適量的助表面活性劑有助于調節(jié)自微乳自乳化效率。因此，適宜的用量是保證乳化效率和粒徑大小的關鍵。

表3 粒徑、PDI及乳化時間模型擬合匯總

圖3 粒徑(A)、PDI (B) 和乳化時間(C)的二維等高線圖及三維響應面

2.3.3 最優(yōu)處方及驗證試驗 運用Design Expert 11.1軟件預測得到的最優(yōu)處方為油相10.0%、表面活性劑49.0%、助表面活性劑41.0%，預測所得微乳粒徑為23.080 nm，PDI為0.229，乳化時間為1.215 min。按照預測所得優(yōu)化處方進行驗證，重復3次，并計算偏差。結果如表4所示，指標的預測值與實際值之間的偏差均小于5%，說明方程預測準確性良好。因此，得到最優(yōu)自微乳處方：油相為干姜油-油酸（1∶1）10.0%、表面活性劑為RH40 49.0%、助表面活性劑為PG 41.0%。

表4 D-最優(yōu)混料試驗設計的驗證(, n = 3)

2.4 自微乳投藥量的考察

選擇投藥量分別為1%、3%、5%、6%、9%、10%、12%、15%的自微乳進行投藥量的考察。根據(jù)D-最優(yōu)混料設計得到的最優(yōu)處方精密稱取各輔料，共計3 g，將黃連總生物堿提取物加入助表面活性劑中，經(jīng)磁力攪拌、超聲助溶溶解后攪拌均勻，加入表面活性劑和油相，制備得不同投藥量自微乳。分別取不同投藥量自微乳1 g，以37 ℃蒸餾水稀釋50倍后得到不同載藥量的微乳，使用粒度儀測其粒徑、PDI，以10 000 r/min離心（離心半徑5.7 cm）30 min測量其離心穩(wěn)定性。

不同投藥量的粒徑和PDI結果如表5所示，隨著載藥的增加，自微乳乳化后其微乳粒徑、PDI逐漸增大；當投藥量≥10%時，PDI大于0.3，提示投藥量≥10%的自微乳放置后可能出現(xiàn)不穩(wěn)定、粒徑增大的現(xiàn)象。離心穩(wěn)定性實驗結果顯示，不同投藥量的微乳溶液離心后均未出現(xiàn)相分離，外觀仍呈現(xiàn)澄清、透明，但投藥量≥6%的微乳溶液出現(xiàn)少許沉淀物，并且隨著投藥量增加沉淀物逐漸增多。因此，選擇黃連總生物堿的投藥量為5%。

表5 不同投藥量自微乳乳化后的粒徑及PDI (, n = 3)

2.5 自微乳的最優(yōu)制備工藝考察

根據(jù)D-最優(yōu)混料設計得到的最優(yōu)處方精密稱取各輔料共3 g，確定黃連總生物堿的投藥量為5%，進行單因素實驗，保持其他工藝不變，分別考察在不同溫度（15、25、37、50、60 ℃）、不同磁力攪拌轉速（100、200、300、400、500 r/min）和不同攪拌時間（1、5、10、20、40 min）的條件下制備得到的自微乳，測量乳化時間、觀察乳化外觀的均勻性并測定乳液粒徑大小。結果顯示，當制備溫度為37 ℃時，乳化時間最短，且粒徑與PDI最?。ū?）；當攪拌轉速達到300 r/min以上時，自乳化時間幾乎達到穩(wěn)定，PDI＜0.3（表7）；當攪拌時間超過10 min時，微乳的粒徑及PDI均較小，且趨于穩(wěn)定（表8）。因此，Cop-Gin-SMEDDS的最佳工藝為在37 ℃、攪拌轉速300 r/min條件下磁力攪拌10 min。

2.6 含量測定方法的建立

2.6.1 黃連總生物堿的含量測定方法 由于干姜油在425 nm處的吸收會對黃連總生物堿的含量測定產生干擾，因此，選擇用HPLC法測量鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸黃連堿和表小檗堿的含量來評價Cop-Gin-SMEDDS的載藥量和穩(wěn)定性。色譜條件：色譜柱為Inertsil?ODS-3 C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為乙腈-0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液（50∶50）（每100毫升中加十二烷基硫酸鈉0.4 g，再以磷酸調節(jié)pH值為4.0）；體積流量1 mL/min；洗脫方式：等度洗脫；紫外檢測波長350 nm；柱溫30 ℃；進樣量10 μL；理論塔板數(shù)按照鹽酸小檗堿計算不低于5000。該方法專屬性、線性、精密度、重復性、穩(wěn)定性均良好，加樣回收率為101.05%，RSD為0.48%，符合要求，表明方法準確度良好。色譜圖見圖4。以鹽酸小檗堿對照品的峰面積為對照，分別計算鹽酸小檗堿、表小檗堿、鹽酸黃連堿和鹽酸巴馬汀的含量。

表6 制備溫度對自微乳的影響(, n = 3)

表7 攪拌轉速對自微乳的影響(, n = 3)

表8 攪拌時間對自微乳的影響(, n = 3)

2.6.2 6-姜辣素的含量測定方法 色譜條件：色譜柱為Inertsil?ODS-3 C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為乙腈-甲醇-水（40∶5∶55）；體積流量1 mL/min；等度洗脫；紫外檢測波長280 nm；柱溫30 ℃；進樣量10 μL；理論塔板數(shù)按照6-姜辣素計算不低于5000。該方法專屬性、線性、精密度、重復性、穩(wěn)定性均良好，平均加樣回收率為99.67%，RSD為0.76%，符合要求，表明方法準確度良好。色譜圖見圖5。

1-表小檗堿 2-鹽酸黃連堿 3-鹽酸巴馬汀 4-鹽酸小檗堿

圖5 6-姜辣素對照品(a)、Cop-Gin-SMEDDS供試品(b)和陰性對照(c)的HPLC圖

2.7 黃連總生物堿和干姜油自微乳給藥系統(tǒng)質量評價

2.7.1 形態(tài)觀察 制備的Cop-Gin-SMEDDS為澄清透明、流動性較好的深紅色濃縮液，稀釋后得到的微乳溶液為澄清透明、流動性好的黃色溶液（圖6）。在TEM下，呈圓球形，形態(tài)規(guī)則，大小較均勻，粒徑大小普遍在10～30 nm，乳滴之間無黏連（圖7）。

2.7.2 粒徑分布及ζ電位測定 將Cop-Gin- SMEDDS加水乳化后，測得其微乳溶液平均粒徑大小為（22.21±0.45）nm、PDI為0.195±0.019、ζ電位為（?2.67±0.11）mV，說明其粒徑較小且分布均勻，穩(wěn)定性良好。Cop-Gin-SMEDDS溶液粒徑分布及ζ電位分布結果如圖8所示。

圖6 Cop-Gin-SMEDDS (A) 和乳化后微乳溶液(B)的外觀形態(tài)

圖7 Cop-Gin-SMEDDS乳化后TEM圖

圖8 Cop-Gin-SMEDDS的粒徑分布(a)和ζ電位分布(b)

2.7.3 載藥量和包封率的測定 精密稱取Cop-Gin- SMEDDS 50 mg（），置于10 mL棕色量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，超聲10 min，微孔濾膜過濾后，按照“2.6”項項建立的方法測定鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸黃連堿、表小檗堿和6-姜辣素含量，測定結果記作1。精密稱取微乳溶液0.25 g，置5 mL棕色量瓶中，加37 ℃的蒸餾水溶解并稀釋至刻度，搖勻，置于離心管中，5000 r/min轉速離心20 min，精密量取上清液1 mL，置于10 mL棕色量瓶中，加甲醇適量，超聲助溶10 min，冷卻至室溫，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，進樣檢測，檢測結果記作2。按照下列公式計算載藥量和包封率[21]。

載藥量＝1/

包封率＝2/1

鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸黃連堿、表小檗堿和6-姜辣素的載藥量和包封率結果見表9，從結果可知各指標成分均具有較高的載藥量和包封率，說明自微乳處方及制備工藝達到目標要求。

2.7.4 穩(wěn)定性考察 將Cop-Gin-SMEDDS于4、25、40 ℃條件下，放置30 d。在實驗的第0、10、20、30天分別取樣適量，觀察其外觀性狀并測定指標成分的含量以及微乳溶液的平均粒徑大小、PDI。結果表明，Cop-Gin-SMEDDS的外觀仍無明顯變化，含量測定結果也顯示該自微乳給藥系統(tǒng)具有良好的穩(wěn)定性（表10、11）。

表9 載藥量、包封率檢測結果(, n = 3)

表10 Cop-Gin-SMEDDS粒徑、PDI和形狀外觀的變化(, n = 3)

2.8 體外釋放

分別精密稱取黃連總生物堿提取物、干姜油提取物及含有相同藥量的Cop-Gin-SMEDDS，裝于透析袋中，分別以蒸餾水、pH 7.4 PBS沖液和pH 1.2鹽酸溶液做釋放介質并加入1%聚山梨酯-80作為漏槽條件，置于（37±5）℃恒溫水浴中，100 r/min轉速磁力攪拌。于放樣后0.5、1、2、3、4、6、8、10、12、24、36、48、60、72 h時分別從錐形瓶中取出1 mL接收溶液并加入等量的釋放介質，以鹽酸小檗堿和6-姜辣素作為指標成分，根據(jù)“2.6”項建立的含量測定方法分別測定其含量，指標成分的累積釋放率計算公式[22]如下所示。

Q為第個時間點的累積釋放率，為接收液的體積，V為每次取樣體積，C和C分別為第次和第次取樣時接收液中藥物濃度，為制劑中所含藥物質量

結果如圖9所示，Cop-Gin-SMEDDS中鹽酸小檗堿在蒸餾水、pH 7.4 PBS沖液和pH 1.2鹽酸溶液中的24 h最終累積釋放率分別為（96.17±0.10）%、（70.80±0.04）%、（85.77±0.10）%，Cop-Gin- SMEDDS中6-姜辣素在3種釋放介質中的24 h最終累積釋放率分別為（32.48±0.14）%、（27.7±0.14）%、（32.96±0.07）%，而黃連總生物堿提取物中鹽酸小檗堿在相應釋放介質中的累釋放率分別為（86.79±0.21）%、（48.67±0.36）%、（49.77±0.10）%，干姜油提取物中6-姜辣素在相應釋放介質中的累積釋放率分別為（26.78±0.64）%、（22.21±0.05）%、（28.41±0.12）%。自微乳給藥系統(tǒng)中各指標成分24 h累積釋放率均高于提取物，說明自微乳給藥系統(tǒng)可改善藥物的溶出度和釋放速率。

表11 Cop-Gin-SMEDDS中各指標成分含量的變化(, n = 3)

圖9 黃連和干姜有效組分提取物和Cop-Gin-SMEDDS指標成分鹽酸小檗堿(a)和6-姜辣素(b)的體外釋放曲線(, n = 3)

3 討論

黃連-干姜作為中藥方劑中的常用藥對[23]，研究其藥效組分黃連總生物堿和干姜油的連用對其治療痢疾、泄瀉具有重大意義。然而由于黃連總生物堿和干姜油溶解度低、姜酚類成分性質不穩(wěn)定等限制了其聯(lián)合應用。自微乳給藥系統(tǒng)是一種由油相、表面活性劑和助表面活性劑組成的給藥系統(tǒng)。研究顯示[20]，中藥的芳香油如丁香油等，可以用來作為油相來制備自微乳，包裹其他藥物進行聯(lián)合用藥。因此本研究結合“藥輔合一”的思想，考慮將干姜油作為油相，與黃連總生物堿共載制備自微乳，以期提高黃連總生物堿和干姜油的溶解度以及姜酚類成分的穩(wěn)定性。

油相是影響自微乳成型的處方的重要因素。篩選油相的預實驗結果顯示相對于油相的種類，油相的用量對自微乳的成型影響較大，并且所有油相的最佳用量都在10%左右。投藥量的預實驗顯示黃連總生物堿的最大投藥量為5%，當投藥量大于5%時，自微乳給藥系統(tǒng)會產生沉淀。課題組在均勻設計的預實驗中發(fā)現(xiàn)，當干姜油與黃連總生物堿比例為1∶1時，對潰瘍性結腸炎的治療效果最好，因此在本研究中按該比例來制備自微乳。因此綜合考慮下，選擇對黃連總生物堿溶解度最大的油酸與干姜油以1∶1比例的混合油作為油相。

篩選表面活性劑時，除了考慮其對藥物的溶解能力外，還應考察表面活性劑與油相形成微乳的能力[24]。實驗中發(fā)現(xiàn)RH40的乳化性能最好，質量占比為70%時就能形成符合要求的微乳溶液，而其他表面活性劑則需要占比80%以上才能形成。雖然所有的助表面活性劑與RH40均相容，但考慮到PG對黃連總生物堿溶解度最大，因此選擇PG作為自微乳的助表面活性劑。

自微乳乳化后的粒徑與藥物釋放密切相關，一般認為粒徑越小藥物的跨膜運輸效果可能越好[25]。本研究制備的自微乳用水稀釋后自乳化形成的微乳液滴粒徑為（22.21±0.45）nm，PDI為0.195±0.019，提示乳化后的粒徑很小且粒徑分布均勻性好。體外釋放實驗結果顯示，Cop-Gin-SMEDDS中鹽酸小檗堿和6-姜辣素在3種釋放介質中的24 h內的累計釋放率和釋放速率均高于提取物，表明自微乳給藥系統(tǒng)能夠提升藥物的溶出度和釋放速率。

由于干姜油在425 nm處有吸收，會對黃連總生物堿的測量有影響，所以載藥量和包封率的考察沒有選用紫外分光光度法測定黃連總生物堿含量，而是用HPLC在350 nm處檢測表小檗堿、鹽酸黃連堿、鹽酸巴馬汀和鹽酸小檗堿4種生物堿含量，以此代表黃連總生物堿含量；姜辣素是干姜的主要成分，其中姜酚類是姜辣素的主要成分，而6-姜辣素是在姜酚中含量最高[26]，因此，選擇6-姜辣素代表干姜油的含量。結果顯示，Cop-Gin-SMEDDS中各指標成分的載藥量均良好，各成分的包封率也都在92%以上，表明Cop-Gin-SMEDDS具有良好的載藥量和包封率。在穩(wěn)定性實驗中Cop-Gin-SMEDDS中各指標成分含量與外觀性狀均無明顯變化，表明自微乳給藥系統(tǒng)能提升藥物的穩(wěn)定性。

綜上所述，本研究制備的Cop-Gin-SMEDDS具有較小的粒徑和較高的載藥量與釋藥速率，能夠提高黃連總生物堿和干姜油的溶解度、增強姜酚類成分的穩(wěn)定性。未來將以Cop-Gin-SMEDDS為基礎，制備口服結腸靶向制劑，進一步其提高穩(wěn)定性和使用方便性，以期更好地應用于潰瘍性結腸炎等疾病的治療。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Preparation and evaluation of self-microemulsion drug delivery system for effective components of-

LI Xin1, YU Ling2, LIU Jia1, MEI Kai1,LI Ting-ting1, HAO Dou-dou1, WANG Xin-yi1, WANG Ling-min1, WU Qing1

1. School of Chinese Materia Medica, Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 102488, China 2.Jiangxi Medical College, Shangrao 334000, China

To study the formulation and preparation technology of self-microemulsion drug delivery system of effective components of Huanglian ()-Ganjiang () (Cop-Gin-SMEDDS), and evaluate it.The best prescription composition of Cop-Gin-SMEDDS was determined by solubility experiment, pseudo ternary phase diagram drawing and D-optimal mixture design. Through single factor investigation, the optimal preparation process was determined, and the physicochemical properties, stability andrelease of Cop-Gin-SMEDDS were evaluated.The optimal prescription of Cop-Gin-SMEDDS (excluding total alkaloids of) was oleic acid 5%, 1,2-propanediol 41%, polyoxyethylene (40) hydrogenated castor oil 49%, dried ginger oil 5%. The dosage of coptis alkaloids was 5%. The optimum preparation process was magnetic stirring at 37 ℃ and 300 r/min for 10 min. The obtained Cop-Gin-SMEDDS was a dark red clear and transparent concentrate, and after dilution, it was a yellow, homogeneous and transparent microemulsion solution. Under transmission electron microscope, it was round and spherical, with uniform size and regular shape. The average particle size was (22.21 ± 0.45) nm, PDI was 0.195 ± 0.019, and ζ potential was (?2.67 ± 0.11) mV. The drug loading of berberine hydrochloride, palmatine hydrochloride, coptisine hydrochloride, epiberberine and 6-gingerol in Cop-Gin-SMEDDS were (13.51 ± 0.71), (1.37 ± 0.06), (2.36 ± 0.27), (0.83 ± 0.14) and (6.34 ± 0.04) mg/g, respectively. The encapsulation efficiency were (96.36 ± 0.34)%, (95.49 ± 0.59)%, (92.56 ± 0.81)%, (95.17 ± 0.39)% and (94.39 ± 1.63)%, respectively. The 24 h cumulative release rates of berberine hydrochloride in Cop-Gin- SMEDDS in pH7.4 PBS buffer, water and pH 1.2 hydrochloric acid solution were (70.80 ± 0.04)%, (96.17 ± 0.10)%, and (85.77 ± 0.10)%, respectively; the 6-gingerol in corresponding release media were (27.7 ± 0.14)%, (32.48 ± 0.14)% and (32.96 ± 0.07)%, respectively. The stability experiment showed that there was no significant change in the index components and appearance properties of cop-gin-SMEDDS after it was placed at different temperatures for 30 d.The prepared Cop-Gin-SMEDDS has good appearance, high drug loading and encapsulation efficiency. It can improve the stability and release of drugs. It is expected to be further developed into oral drug delivery preparations.

dried ginger oil; total alkaloids of; self-microemulsion drug delivery system; pseudo ternary phase diagram; D-optimal mixture design;;; berberine hydrochloride; palmatine hydrochloride; coptisine hydrochloride; epiberberine; 6-gingerol

R283.6

A

0253 - 2670(2023)01 - 0051 - 11

10.7501/j.issn.0253-2670.2023.01.008

2022-06-05

國家自然科學基金項目（81773915）

李 鑫（1997—），男，碩士研究生，從事中藥新劑型的研究。Tel: 17354008830 E-mail: xinzhizhu54946@163.com

通信作者：吳 清（1965—），女，博士生導師，教授，從事中藥新劑型與新技術的研究。Tel: (010)84738603 E-mail: qwu@vip.sina.com

[責任編輯 鄭禮勝]