賈 安，王玲玲，靳建杰，黃春躍，胡 曉, *

維藥黑桑中1個(gè)新的桑根酮型二氫黃酮化合物及其胰島素增敏活性

賈 安1，王玲玲2，靳建杰2，黃春躍2，胡 曉1, 2*

1. 黃河科技學(xué)院醫(yī)學(xué)院，河南 鄭州 450063 2. 中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)研究總院上海醫(yī)藥工業(yè)研究院有限公司，創(chuàng)新藥物與制藥工藝國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海 201203

研究黑桑莖枝中桑根酮型二氫黃酮化合物及其胰島素增敏活性。應(yīng)用多種色譜技術(shù)并結(jié)合桑根酮型化合物的紫外吸收特征，對(duì)桑根酮型化合物進(jìn)行分離純化，結(jié)合波譜技術(shù)及理化性質(zhì)進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定；采用地塞米松誘導(dǎo)胰島素抵抗3T3-L1脂肪細(xì)胞模型，采用GOD-POD法和ELISA法來(lái)檢測(cè)細(xì)胞上清液中葡萄糖和脂聯(lián)素的含量，考察化合物的體外胰島素增敏活性；通過(guò)LanthaScreen? TR-FRET 過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ（peroxisome proliferator-activated receptor γ，PPARγ）競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合檢測(cè)試劑盒檢測(cè)分離得到的化合物與PPARγ的結(jié)合能力。從黑桑莖枝90%乙醇提取部位中分離得到1個(gè)新的桑根酮型化合物，并鑒定其結(jié)構(gòu)為(5a,10a)-1,3,8,10a-四羥基-4-(2-羥基-3-甲基- 3-丁烯-1-基)-5a-(3-甲基-2-丁烯-1-基)-5a,10a-二氫-11-苯并呋喃[3,2-b]色原酮-11-酮，命名為黑桑根酮O（nigragenon O），該化合物在10、30 μmol/L能促進(jìn)胰島素抵抗模型細(xì)胞對(duì)葡萄糖的攝取和對(duì)脂聯(lián)素的分泌；對(duì)PPARγ受體具有較強(qiáng)的結(jié)合活性，半數(shù)抑制濃度（half maximal inhibitory concentration，IC50）為5.1 μmol/L。黑桑根酮O為新化合物，具有明顯的體外胰島素增敏活性，是PPARγ潛在配體。

桑科；黑桑；桑根酮型二氫黃酮；黑桑根酮O；胰島素增敏；過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ

黑桑Linn.為桑科（Moraceae）桑屬Linn.落葉喬木植物。桑屬為桑科中重要的屬，該屬植物有16種，我國(guó)主產(chǎn)11種，資源豐富，在全國(guó)各地均有分布。常見(jiàn)的桑屬植物有桑Linn.、黑桑、雞桑Poir.和蒙桑(Bur.) Schneid等。具有重要的藥用價(jià)值，如桑的根皮、枝、葉和果實(shí)均作為傳統(tǒng)中藥用于臨床[1]。黑桑俗稱(chēng)藥桑，為維吾爾族傳統(tǒng)民間用藥，具有生干生寒、燥濕清熱的作用[2]?，F(xiàn)代研究表明，黑桑中化學(xué)成分豐富多樣，富含黃酮類(lèi)、二苯乙烯、生物堿類(lèi)和多酚類(lèi)成分[2-3]；具有調(diào)血脂、降血糖、抗衰老、美白和抗炎鎮(zhèn)痛等多種藥理作用[4-6]]。

桑根酮型黃酮（sanggenon-type flavanones，STFs）是桑屬植物特有的二氫黃酮醇類(lèi)化合物，具2-異戊烯基-3-羥基取代、C環(huán)3位和B環(huán)2′位通過(guò)醚鍵形成呋喃環(huán)，3位的羥基和醚鍵構(gòu)成一個(gè)獨(dú)特的半縮酮結(jié)構(gòu)[7]。本課題組前期從黑桑中得到多個(gè)結(jié)構(gòu)新穎的STFs，該類(lèi)化合物具有明顯的α-葡萄糖苷酶抑制活性[8-9]和過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ（peroxisome proliferator-activated receptor γ，PPARγ）激動(dòng)活性[10]，具有潛在的降糖功效。本研究旨在對(duì)黑桑中的STFs進(jìn)行定向分離富集和結(jié)構(gòu)鑒定，并進(jìn)行體外胰島素增敏活性研究。得到1個(gè)新的桑根酮型二氫黃酮醇，命名為黑桑根酮O（nigragenon O），見(jiàn)圖1。體外胰島素增敏活性考察結(jié)果顯示，該化合物10、30 μmol/L能促進(jìn)胰島素抵抗模型細(xì)胞對(duì)葡萄糖的攝取，增加模型細(xì)胞對(duì)脂聯(lián)素的分泌，表現(xiàn)出明顯的體外胰島素增敏活性；對(duì)PPARγ受體顯示出較好的親和力，半數(shù)抑制濃度（half maximal inhibitory concentration，IC50）為5.10 μmol/L，結(jié)合常數(shù)（i）為2.46 μmol/L。

1 材料與儀器

1.1 儀器設(shè)備

Rudolph AUTOPOL VI型旋光儀（美國(guó)魯?shù)婪蚬荆?；UV-2500PC型紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)（日本島津）；JASCO J-810型圓二色光譜儀、JASCO-810旋光分光計(jì)（日本JASCO公司）；Nicolet iS5型FT-IR紅外光譜儀、Waters Xevo G2-XS Q-TOF質(zhì)譜儀、3111型CO2培養(yǎng)箱（美國(guó)賽默飛公司）；Bruker AV III 400 MHz型核磁共振儀（德國(guó)Bruker公司）；LC3050N型制備液相（北京創(chuàng)新通恒公司）；BioTek Epoch酶標(biāo)儀（美國(guó)伯騰公司）；Envision酶標(biāo)儀（美國(guó)PerkinElmer公司）；CX23型顯微鏡（日本奧林巴斯公司）；YJ-840/YJ-1340型超凈工作臺(tái)（蘇州蘇信環(huán)境科技有限公司）；Echo 555液體處理系統(tǒng)（。

圖1 黑桑根酮O的化學(xué)結(jié)構(gòu)

1.2 試劑與材料

柱色譜正相硅膠（200～300目，青島海洋化工有限公司）；柱色譜正相硅膠（100～200目，上海上邦實(shí)業(yè)有限公司）；柱色譜反相硅膠ODS-C18（s-50 μm，日本YMC公司）；大孔樹(shù)脂AB-8（上海摩速科學(xué)器材有限公司）；Sephadex LH-20（50～80 μm，瑞典GE Healthcare Bio-Science AB）；小鼠前脂肪3T3-L1細(xì)胞，來(lái)源于中科院細(xì)胞庫(kù)；DMEM（批號(hào)C11995500CP）、胎牛血清（批號(hào)2110875CP）、PBS（pH 7.4，批號(hào)10010-500BT）、Trypsin-EDTA（0.25%，批號(hào)25200-056）購(gòu)自Gibco公司；10% FBS（批號(hào)10099）、胰島素（批號(hào)12585-014）、1X 抗生素-抗真菌素（批號(hào)15240-112）購(gòu)自Lifetechnologies公司；IBMX（批號(hào)I7018）、地塞米松（批號(hào)D4902）購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；Cell Titer Glo試劑（CTG，批號(hào)G7572）購(gòu)自美國(guó)Promega公司；葡萄糖測(cè)試盒（批號(hào)F006-1-1）購(gòu)自南京建成生物工程研究所；小鼠脂聯(lián)素測(cè)定試劑盒（批號(hào)PA002）、BCA檢測(cè)試劑盒（批號(hào)P0012S）購(gòu)自上海碧云天生物技術(shù)有限公司；LanthaScreen? TR-FRET PPARγ競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合檢測(cè)試劑盒（批號(hào)PV4894）、DTT（批號(hào)P2325）購(gòu)自美國(guó)Invitrogen公司；羅格列酮（批號(hào)100673-201902，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%）購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院。

黑桑莖枝于2019年8月采自新疆維吾爾自治區(qū)和田縣，經(jīng)中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)研究總院中藥研究部吳彤研究員鑒定為?？粕僦参锖谏inn.的莖枝，標(biāo)本（HS190930001）存放于中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)研究總院中藥研究部標(biāo)本室。

2 提取與分離

取干燥黑桑莖枝22 kg，粉碎后采用90%乙醇加熱回流提取2次，每次1 h，合并提取液濃縮得到浸膏1.7 kg。量取AB-8大孔吸附樹(shù)脂約1.2 kg裝柱，將部分提取物浸膏（1.2 kg）用水混懸上柱，依次用2倍柱體積的水、5倍柱體積40%乙醇和5倍柱體積95%乙醇洗脫，減壓濃縮干燥分別得到水部位（113.0 g）、40%乙醇部位（560.7 g）和95%乙醇部位（378.0 g）。取95%乙醇部位（250.0 g）經(jīng)正相硅膠（100～200目）柱色譜，石油醚-醋酸乙酯（10∶1→7∶1→5∶1→2∶1→1∶1）梯度洗脫，得到6個(gè)組分Fr. A～F。根據(jù)桑根酮黃酮的紫外特征吸收（約300 nm處有最大吸收），對(duì)各部位進(jìn)行HPLC-DAD跟蹤分析，其中Fr. B～E富含桑根酮類(lèi)成分。進(jìn)一步與課題組已分離得到的桑根酮型化合物進(jìn)行比對(duì)，發(fā)現(xiàn)Fr. D部位有未知的桑根酮型化合物。

組分Fr. D（3.3 g）經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱色譜，二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脫分離后得到組分Fr. D-1～D-7。Fr. D-6（2.6 g）進(jìn)一步經(jīng)ODS柱色譜，甲醇-水（40∶60→90∶10）洗脫分離后得到Fr. D-6-1～D-6-15。Fr. D-6-9（101.6 mg）經(jīng)過(guò)半制備HPLC（體積流量3 mL/min，乙腈-水63∶37）分離純化得到化合物1（R＝21.2 min，23.7 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

1H-NMR譜給出以下的信號(hào)：黃酮類(lèi)成分特征的C-5位成氫鍵羥基信號(hào)H11.70 (1H, brs, 5-OH)；1組ABX體系芳香質(zhì)子信號(hào)H7.35 (1H, d,= 8.0 Hz, H-6), 6.50 (1H, dd,= 8.0, 2.0 Hz, H-5), 6.37 (1H, d,= 2.0 Hz, H-3)；1個(gè)單峰芳香質(zhì)子信號(hào)H5.92 (1H, s, H-6)；1組3-甲基-2-丁烯基信號(hào)H5.35 (1H, brt,= 6.4 Hz, H-10), 3.10 (1H, dd,= 14.4, 8.0 Hz, H-9a), 2.76 (1H, dd,= 14.4, 7.6 Hz, H-9b), 1.60 (3H, brs, H-13), 1.59 (3H, brs, H-12)；1組2-羥基-3-甲基-3-丁烯基信號(hào)H4.84 (1H, brs, H-17a), 4.64 (1H, brs, H-17b), 4.30 (1H, dd,= 7.6, 3.6 Hz, H-15), 2.90 (1H, dd,= 14.4, 3.6 Hz, H-14a), 2.80 (1H, dd,= 14.4, 7.6 Hz, H-14b), 1.64 (3H, brs, H-18)。

表1 化合物1的氫譜和碳譜數(shù)據(jù)

13C-NMR譜顯示25個(gè)碳信號(hào)，包括15個(gè)二氫黃酮骨架碳信號(hào)，其中C91.5 (C-2) 和C102.8 (C-3) 進(jìn)一步證實(shí)化合物為桑根酮二氫黃酮類(lèi)成分；3-甲基-2-丁烯基的5個(gè)碳信號(hào)C136.5 (C-11), 118.6 (C-10), 32.1 (C-9), 25.9 (C-12), 18.1 (C-13)；以及2-羥基-3-甲基-3-丁烯基的5個(gè)碳信號(hào)C148.3 (C-16), 110.3 (C-17), 76.1 (C-15), 29.3 (C-14), 18.2 (C-18)。

利用HSQC譜確定連接氫的碳信號(hào)，H2-17（H4.84,H4.64）與C-17 (C110.3) 相關(guān)，進(jìn)一步表明具有末端雙鍵基團(tuán)；H2-9 (H3.10, 2.76) 與C-9 (C32.1) 相關(guān)，H2-14 (H2.90, 2.80) 與C-14 (C29.3)相關(guān)，確定了2個(gè)不同異戊烯基上亞甲基的碳?xì)湫盘?hào)。在HMBC譜中（圖2），H2-9與C-2、C-10和C-11相關(guān)，H-9a與C-3有相關(guān)，確定3-甲基-2-丁烯基連接在C-2位；H2-17與C-15、C-16和C-18相關(guān)，H2-14與C-15和C-16相關(guān)，證實(shí)了2-羥基- 3-甲基-3-丁烯基基團(tuán)的連接方式，H2-14與C-8、C-8a和C-7相關(guān)，確定該基團(tuán)連接在C-8位。進(jìn)一步通過(guò)HMBC譜中H-6與C-7，C-5和C-4a相關(guān)，H-6與C-2和C-4相關(guān)，H-3與C-1相關(guān)，確定所有碳、氫原子的化學(xué)位移歸屬。該化合物的平面結(jié)構(gòu)被確定。

圖2 化合物1的關(guān)鍵HMBC相關(guān)

化合物的圓二色譜圖譜中，在217、250、292、333 nm附近呈現(xiàn)正Cotton效應(yīng)，在238和274 nm附近呈現(xiàn)負(fù)Cotton效應(yīng)，見(jiàn)圖3。根據(jù)桑根酮型二氫黃酮的圓二色譜規(guī)律[12]，并通過(guò)文獻(xiàn)對(duì)比[11]，確定該化合物C-2位和C-3位的絕對(duì)構(gòu)型分別是2,3。C-15位的絕對(duì)構(gòu)型嘗試用Mosher法確定未果，絕對(duì)構(gòu)型待定。因此，化合物1確定為 (5a,10a)-1,3,8,10a-四羥基-4-(2-羥基-3-甲基-3-丁烯-1-基)-5a-(3-甲基-2-丁烯-1-基)-5a,10a-二氫-11-苯并呋喃[3,2-b]色原酮-11-酮，經(jīng)文獻(xiàn)及數(shù)據(jù)庫(kù)檢索確定為新化合物，命名為黑桑根酮O。

圖3 化合物1的圓二色譜圖

4 體外胰島素增敏活性考察

以地塞米松誘導(dǎo)分化成熟的3T3-L1脂肪細(xì)胞，建立胰島素抵抗模型；采用試劑盒檢測(cè)培養(yǎng)細(xì)胞上清液中葡萄糖和脂聯(lián)素含量，具體方法參考文獻(xiàn)報(bào)道[13]，并做了微調(diào)。

4.1 細(xì)胞培養(yǎng)

3T3-L1細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)于含10% FBS的DMEM培養(yǎng)液（含1X抗生素）。

4.2 誘導(dǎo)分化

取3T3-L1細(xì)胞，加入誘導(dǎo)培養(yǎng)液（含DEME、0.5 mmol/L IBMX、1 μmol/L地塞米松、2 μg/mL胰島素和10% FBS），誘導(dǎo)48 h后，換成含胰島素的培養(yǎng)液（含10 μg/mL的胰島素和10% FBS的DMEM），繼續(xù)培養(yǎng)48 h；隨后換含10% FBS的DMEM培養(yǎng)液，每48小時(shí)換液1次。超過(guò)90%的細(xì)胞可在8～10 d內(nèi)分化成熟。

4.3 化合物1的細(xì)胞毒性初步考察

誘導(dǎo)分化成熟的3T3-L1細(xì)胞，經(jīng)計(jì)數(shù)后以1×104個(gè)細(xì)胞/100 μL的規(guī)格接種于96孔培養(yǎng)板，每孔加入90 μL培養(yǎng)液（含血清）培養(yǎng)過(guò)夜，再加入10 μL化合物1溶液。培養(yǎng)48 h后，每孔加入CTG 100 μL，室溫靜置10 min，在酶標(biāo)儀上測(cè)定各孔吸光度（）值，從而計(jì)算化合物1不同濃度下的細(xì)胞活力。

4.4 胰島素抵抗3T3-L1細(xì)胞的構(gòu)建與實(shí)驗(yàn)分組

將誘導(dǎo)分化成熟的3T3-L1細(xì)胞隨機(jī)分為對(duì)照組、胰島素抵抗組、羅格列酮組（陽(yáng)性對(duì)照）和給藥組，對(duì)照組培養(yǎng)于含10% FBS的高糖DMEM培養(yǎng)液（含1%抗生素）；胰島素抵抗組、羅格列酮組和給藥組培養(yǎng)于含1 μmol/L地塞米松的高糖DMEM培養(yǎng)液（含10% FBS及1%抗生素），培養(yǎng)96 h；然后，胰島素抵抗組加入不同濃度藥物，繼續(xù)培養(yǎng)48 h，得到給藥組；以上所有組別在給藥的同時(shí)再分為不加胰島素和加胰島素（1 nmol/L）處理。48 h后檢測(cè)葡萄糖和脂聯(lián)素含量。按照試劑盒說(shuō)明書(shū)，采用葡萄糖氧化酶-過(guò)氧化物酶法檢測(cè)上清液中葡萄糖含量；ELISA法測(cè)定細(xì)胞中脂聯(lián)素含量。

4.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

4.6 活性結(jié)果

前期研究表明，化合物1在30 μmol/L以下對(duì)細(xì)胞無(wú)明顯毒性，細(xì)胞活力約為85%，因此本研究選擇10、30 μmol/L對(duì)其細(xì)胞活力進(jìn)行考察。如表2所示，當(dāng)3T3-L1細(xì)胞發(fā)生胰島素抵抗，無(wú)論基礎(chǔ)狀態(tài)還是胰島素刺激狀態(tài)，胰島素抵抗組細(xì)胞液中葡萄糖含量均顯著增加（＜0.01），脂聯(lián)素含量顯著降低（＜0.01）。陽(yáng)性藥羅格列酮各濃度均能顯著促進(jìn)胰島素抵抗模型細(xì)胞對(duì)葡萄糖的攝?。ǎ?.01），并促進(jìn)脂聯(lián)素的分泌（＜0.05、0.01）?；衔?能顯著降低細(xì)胞液中葡萄糖含量（＜0.05、0.01）；且30 μmol/L可顯著提高細(xì)胞液中脂聯(lián)素含量（＜0.05、0.01）。

表2 化合物1對(duì)胰島素抵抗3T3-L1細(xì)胞中葡萄糖吸收和脂聯(lián)素含量的影響(, n = 3)

與對(duì)照組比較：##＜0.01；與模型組比較：*＜0.05**＜0.01

##< 0.001control group;*< 0.05**< 0.01model group

5 PPARγ配體親和力檢測(cè)

5.1 實(shí)驗(yàn)方法

根據(jù)LanthaScreen? TR-FRET PPARγ競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。0.6 nmol/L PPARγ配體結(jié)合區(qū)（PPARγ-LBD）、0.21 nmol/L 鋱標(biāo)記的抗GST抗體（Tb-anti-GST Ab）、4 nmol/L 熒光小分子Pan-PPAR配體（Fluormone? Pan-PPAR Green）與200 nL不同濃度的檢測(cè)化合物溶液（1和羅格列酮）充分混合后，加入384孔熒光酶標(biāo)板，總反應(yīng)體系40 μL，孵育1 h。設(shè)相同體積DMSO作為高對(duì)照；含1000 nmol/L GW1929作為低對(duì)照。

使用EnVision平板閱讀器檢測(cè)TR-FRET信號(hào)，檢測(cè)各孔值（供體熒光495 nm，受體熒光520 nm），計(jì)算TR-FRET比值（Value，520/495）。按公式計(jì)算不同濃度化合物1的抑制率，并利用Graphpad Prism 5.0軟件繪制劑量反應(yīng)曲線(xiàn)計(jì)算IC50值。

抑制率＝1－(Value化合物－Value低對(duì)照)/(Value高對(duì)照－Value低對(duì)照)

按以下公式計(jì)算結(jié)合常數(shù)（i）值。

i＝IC50/(1＋[tracer]/D)

[tracer] 為檢測(cè)反應(yīng)中最大TR-FRET值對(duì)應(yīng)的供體濃度，本實(shí)驗(yàn)中設(shè)定為3 nmol/L，D為供體熒光的結(jié)合常數(shù)，本實(shí)驗(yàn)的D值為（2.8±0.8）nmol/L

5.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

由圖4所示，化合物1對(duì)PPARγ受體顯示出較好的親和力，IC50值為5.10 μmol/L，i為2.46 μmol/L；陽(yáng)性對(duì)照羅格列酮的IC50值和i分別為104.8 nmol/L和50.6 nmol/L。

圖4 化合物1 (100 nmol·L?1～100 μmol·L?1) 和羅格列酮(12 nmol·L?1～10 μmol·L?1) 劑量反應(yīng)曲線(xiàn)(n＝3)

6 討論

桑屬植物具有重要藥用價(jià)值，中醫(yī)很早就用桑來(lái)治療糖尿病，日本古書(shū)《吃茶養(yǎng)生記》也記載桑有改善“飲水病”（糖尿?。┑淖饔?。桑屬植物富含生物堿糖類(lèi)和酚類(lèi)化合物，以1-脫氧野尻霉素為代表的生物堿糖類(lèi)，作為強(qiáng)效α-葡萄糖苷酶抑制劑已被開(kāi)發(fā)為抗糖尿病新藥。酚性成分因其異戊烯基的取代和衍生化而具有結(jié)構(gòu)新穎性和多樣性，生物活性也活潑多樣，近年來(lái)備受關(guān)注。黑桑是桑屬藥用植物的特色種，是國(guó)內(nèi)唯一的22倍體品種，在維醫(yī)用藥中具有較長(zhǎng)的歷史。大量研究表明[14-16]，黑桑提取物具有明確的降血糖活性和胰島素增敏作用，但其活性物質(zhì)基礎(chǔ)相關(guān)研究不夠充分。

PPARγ作為是一種配體激活的核受體轉(zhuǎn)錄因子，主要在脂肪組織表達(dá)，在脂肪細(xì)胞分化和糖脂代謝平衡環(huán)節(jié)發(fā)揮關(guān)鍵作用[17]。PPARγ與配體結(jié)合，激活PPARγ受體基因轉(zhuǎn)錄，進(jìn)一步提高脂肪合成相關(guān)因子（C/EBPa、aP2、FAS等）的表達(dá)，從而促進(jìn)脂肪細(xì)胞分化；通過(guò)上調(diào)胰島素增敏因子脂聯(lián)素的表達(dá)，增加外周組織對(duì)葡萄糖的轉(zhuǎn)運(yùn)，從而改善胰島素抵抗，進(jìn)而發(fā)揮降糖作用。PPARγ是當(dāng)前發(fā)現(xiàn)胰島素增敏劑的重要靶標(biāo)。

在課題組前期研究基礎(chǔ)上，本研究從黑桑莖枝中分離鑒定了1個(gè)新的桑根酮型二氫黃酮醇，并通過(guò)地塞米松誘導(dǎo)胰島素抵抗3T3-L1細(xì)胞模型，考察化合物1的胰島素增敏活性。結(jié)果提示，該化合物表現(xiàn)出明顯的體外胰島素增敏活性，可促進(jìn)胰島素抵抗模型細(xì)胞對(duì)葡萄糖的攝取和對(duì)脂聯(lián)素的分泌。同時(shí)，化合物1對(duì)PPARγ受體具有較強(qiáng)的結(jié)合活性，是PPARγ的潛在配體，其胰島素增敏作用可能與其PPARγ結(jié)合活性有關(guān)。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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A new sanggenon-type flavanone fromand its insulin-sensitizing activity

JIA An1, WANG Ling-ling2, JIN Jian-jie2, HUANG Chun-yue2, HU Xiao1, 2

1. Medical School, Huanghe Science & Technology College, Zhengzhou 450063, China 2. State Key Laboratory of New Drug and Pharmaceutical Process, Shanghai Institute of Pharmaceutical Industry, China State Institute of Pharmaceutical Industry, Shanghai 201203, China

To investigate sanggenon-type flavanones (STFs) from the stems ofand the insulin sensitizing activity.Guided by the UV absorbtion characteristics of STFs, the compound was isolated and purified by a combination of various column chromatographic methods. The structure was elucidated through extensive analysis of HRMS, NMR, UV, IR, CD data and so on. The insulin-sensitizing activities of the compounds were investigated using insulin-resistant 3T3-L1 adipocytes model induced by dexamethasone. The concentration of glucose and adiponectin in the culture supernatant was determined by GOD-POD assay and ELSA method, respectively. The competitive binding affinity toward PPARγ was evaluated using the LanthaScreenTMTR-FRET assay.A new STF (1) was obtained and identified, named as nigragenon O. Compound 1 decreased the glucose level and promoted adiponectin secretion in the model cells at the concentrations of 30 μmol/L and 10 μmol/L. It also exhibited potent binding affinity for PPARγ with an IC50value of 5.1 μmol/L.Compound 1 showed obviousinsulin-sensitizing effect and displayed potent binding affinity for PPARγ, indicating its potential as a natural insulin-sensitizing agent.

Moraceae;L.; sanggenon-type flavanones; nigragenon O; insulin-sensitizing activity; peroxisome proliferator-activated receptor γ

R284.1

A

0253 - 2670(2023)01 - 0045 - 06

10.7501/j.issn.0253-2670.2023.01.007

2022-08-02

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（32270421）；國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（81402824）；上海市自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（19ZR1454400）；上海市自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（21ZR1461800）

賈 安，副教授，從事中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及其作用機(jī)制研究。E-mail: 869955076@qq.com

通信作者：胡 曉，研究員，博士生導(dǎo)師，從事天然先導(dǎo)化合物發(fā)現(xiàn)與中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究。E-mail: xjtuyxhx@126.com

[責(zé)任編輯 王文倩]