杜 江，馮 俊，周亞平，劉 琴，張任華，和 瀟，謝麗韞，張泉鵬，彭洪新

1 嵩明縣畜牧漁業(yè)發(fā)展中心，云南嵩明 651700 2 昆明市官渡區(qū)小板橋街道城市管理綜合服務(wù)中心，云南昆明 650299 3 昆明市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，云南昆明 650041

0 引言

奶牛飼料中霉菌毒素污染情況較為普遍，是影響牛奶質(zhì)量安全的重要風(fēng)險(xiǎn)因子。奶牛攝入含有霉菌毒素的飼料超過一定數(shù)量后會(huì)導(dǎo)致機(jī)能障礙，嚴(yán)重者甚至死亡，還可能產(chǎn)生致畸、致癌和致突變的影響[1]。自然界中霉菌毒素有300 多種，在奶牛飼草飼料中較常見的是黃曲霉毒素B1（AFB1）、赭曲霉毒素A（OTA），玉米赤霉烯酮（ZEN）、伏馬毒素（FB1+FB2+FB3）、單端孢霉烯族毒素（T-2毒素）、嘔吐毒素（DON）等，各地均有不同程度的霉菌毒素污染[1～4]。為掌握奶牛飼料原料（玉米面、全株玉米青貯）和全混合日糧（TMR）中霉菌毒素污染狀況，為奶牛養(yǎng)殖企業(yè)在飼料采購、儲(chǔ)存、使用時(shí)提供參考，本試驗(yàn)對(duì)昆明市部分奶牛場的飼料開展了調(diào)查分析。

1 儀器設(shè)備和材料

（1）飼料樣品

飼料樣品共80 批次，采自昆明市34 家奶牛場（小區(qū)），其中玉米面34 批，全株玉米青貯34 批，TMR12 批次。全株玉米青貯均為2021年下半年收儲(chǔ)。

（2）檢測(cè)試劑盒

AFB1、OTA、ZEN、FB1+FB2+FB3、T-2毒素、DON酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒，北京維德維康生物技術(shù)有限公司。

（3）主要儀器

冷凍離心機(jī)（SIGMA 3K15），德國SIGMA希格瑪公司；酶標(biāo)儀（THERMO FISHER Mμltiskan FC），美國賽默飛世爾科技公司；洗板機(jī)，美國賽默飛世爾科技公司。

2 試驗(yàn)方法

（1）樣品粉碎

取全株玉米青貯和TMR樣品500 g左右，60 ℃烘干下48 h，粉碎后裝袋備測(cè)。玉米面直接檢測(cè)。（2）霉菌毒素提取

按照試劑盒說明書提供的方法進(jìn)行提取。稱取5 g樣品于50 mL聚乙烯離心管中，加入70%甲醇-水溶液25 mL，振蕩5 min，5000 r/min離心5 min。取上清液用對(duì)應(yīng)檢測(cè)項(xiàng)目試劑盒提供的樣品稀釋液稀釋。稀釋倍數(shù)見表1。

表1 霉菌毒素試劑盒稀釋倍數(shù)

（3）檢測(cè)

按照說明書提供的試劑檢測(cè)，自動(dòng)洗板機(jī)洗板，室溫檢測(cè)。

（4）結(jié)果計(jì)算

采用試劑盒專用分析軟件進(jìn)行分析。樣品中霉菌毒素濃度（μg/kg）=軟件計(jì)算結(jié)果（μg/ L）×稀釋倍數(shù)。結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。（5）結(jié)果判定參照《GB 13078—2017 飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》判定，限量標(biāo)準(zhǔn)見表2，超過限量值則判為超標(biāo)。

表2 玉米加工產(chǎn)品中幾種霉菌毒素殘留限量

3 結(jié)果與討論

玉米面、全株玉米青貯、TMR中AFB1、DON、T-2毒素、ZEA、OTA、FB1+FB2+FB3的含量及檢出情況見表3、表4。幾種霉菌毒素中DON檢出率最高，達(dá)到55.0%，其次為ZEN，檢出率為52.5%，第三為AFB1，檢出率為17.5%，第四為FB1+FB2+FB3，檢出率為15.0%。三類飼料中，玉米面污染率最高，平均檢出率40.2%，其次是全株玉米青貯，平均檢出率為12.8%，其次是TMR，平均檢出率為3.4%。

表3 樣品中霉菌毒素含量

表4 樣品中霉菌毒素檢出情況

（1）AFB1污染情況

玉米面和TMR中AFB1有微量殘留，全株玉米青貯中未檢出。玉米面AFB1檢出率為35.3%，平均值為（8.6±2.9）μg/kg，TMR的AFB1檢出率為16.7%，平均值為（2.3±1.2）μg/kg。玉米面和TMR中AFB1平均值為3.2μg/kg，最大值為15.3 μg/kg，按照玉米及谷物飼料中AFB1的殘留限量50 μg/kg標(biāo)準(zhǔn)判定，本次檢測(cè)的玉米面、全株玉米青貯、TMR的AFB1含量在安全范圍內(nèi)。AFB1是由黃曲霉菌和寄生曲霉菌產(chǎn)生，這兩種霉菌最適宜的生長溫度為26～28 ℃。溫度在28～33 ℃，濕度在80%～90%時(shí)，霉菌可快速分泌毒素。近年來，昆明市加強(qiáng)生鮮乳中AFM1的檢測(cè)和飼料安全使用宣傳指導(dǎo)，奶牛養(yǎng)殖場（戶）非常重視飼料中AFB1的污染問題，嚴(yán)格把關(guān)原料采購、飼料儲(chǔ)存等環(huán)節(jié)，確保不使用霉變玉米。一些養(yǎng)殖場還與飼料廠家約定，如果使用該廠的飼料造成牛奶中AFM1污染的，飼料廠要承擔(dān)全部損失，通過一系列措施確保了飼料安全。

（2）DON污染情況

DON的檢出率較高，玉米面檢出率82.3%，平均值為（1375.2±635.2）μg/kg；全株玉米青貯檢出率為47.1%，平均值為（938.9±523.6）μg/kg，TMR檢出率為25.0%，平均值為（1037.5±566.8）μg/kg。三類飼料的最小值80.9 μg/kg，最大值3229.4 μg/kg，平均值（1181.9±893.6）μg/kg。以5000 μg/kg限量標(biāo)準(zhǔn)判定，所有樣品均未超標(biāo)。

嘔吐毒素由鐮刀菌屬霉菌產(chǎn)生，鐮刀菌屬最適生長溫度為5～25 ℃。昆明全年平均溫度是12～22 ℃，適宜鐮刀菌屬霉菌生長，使得飼料中嘔吐毒素檢出率較高。嘔吐毒素能引起人和動(dòng)物嘔吐、腹瀉、皮膚刺激、拒食、神經(jīng)紊亂、流產(chǎn)、死胎、免疫抑制。雖然本次檢測(cè)的玉米等飼料中檢出的嘔吐毒素未超過飼料限量標(biāo)準(zhǔn)，最大值為3229.4 μg/kg，且檢出率較高，如果長期使用這類飼料，勢(shì)必影響奶牛健康。

（3）ZEN污染情況

三種飼料中均檢出ZEN，玉米面＞全株玉米青貯＞TMR，玉米面檢出率88.2%，平均值為（1047.2±935.5）μg/kg；全株玉米青貯檢出率為29.4%，平均值為（142.5.9±191.1）μg/kg，TMR檢出率為16.7%，平均值為（120.1±112.3）μg/kg。三類飼料的最小值47.3 μg/kg，最大值3557 μg/kg，平均值（635.8±532.2）μg/kg。以500 μg/kg限量標(biāo)準(zhǔn)判定，玉米面的超標(biāo)率達(dá)到76.4%，污染嚴(yán)重。全株玉米青貯和TMR樣品均未超標(biāo)。

ZEN也是由鐮刀菌屬產(chǎn)生，是許多高等植物體內(nèi)的正常激素類物質(zhì)，具有類似雌激素作用，是調(diào)節(jié)植物生長的重要物質(zhì)，玉米等植物在開花期時(shí)ZEN的含量較高，雙重來源使得植物中ZEN的檢出率較高。

ZEN對(duì)母畜的生殖系統(tǒng)毒性最大，會(huì)導(dǎo)致外生殖器腫大、充血，流產(chǎn)、卵巢囊腫，頻發(fā)情和假發(fā)情等，受胎率下降。奶牛的采食量較大，易造成ZEN攝入過量，危害健康。在生產(chǎn)實(shí)踐中，干奶期奶牛飼喂全株玉米青貯量較大，如果青貯質(zhì)量不高，ZEN污染嚴(yán)重，會(huì)造成干奶期奶牛流產(chǎn)、死胎等。

（4）FB1+FB2+FB3污染情況

玉米面中檢出FB1+FB2+FB3，檢出率35.3%，平均值為（277.4±490.9）μg/kg，以60 mg/kg限量作為判定標(biāo)準(zhǔn)，未超標(biāo)。全株玉米青貯、TMR中未檢出。

FB1+FB2+FB3由串珠鐮刀菌產(chǎn)生，具有潛在的致癌毒性。串珠鐮刀菌適宜高溫低濕度的環(huán)境，適宜溫度為28～33 ℃，濕度為27%～33%。玉米面中FB1+FB2+FB3殘留，說明昆明市上半年的干燥天氣有利于伏馬毒素的產(chǎn)生。

（5）T-2毒素和OTA污染情況

三種飼料中均未檢出T-2毒素和OTA。OTA由多種曲霉屬和青霉屬真菌產(chǎn)生，這類霉菌最適生長溫度12～37 ℃。OTA主要侵害腎臟肝臟，具有致畸、致癌、致突變和免疫抑制作用。本次檢測(cè)的奶牛飼料未檢出T-2毒素和OTA，兩類毒素污染風(fēng)險(xiǎn)小，對(duì)奶牛健康和生鮮乳質(zhì)量安全影響不大。

4 結(jié)論

（1）本次抽檢的80 批次飼料中，污染較嚴(yán)重的飼料原料為玉米面，其次是全株玉米青貯，最輕的是TMR0ZEN和DON檢出率較高，其次是FB1+FB2+FB3。針對(duì)不同霉菌毒素的特點(diǎn)和危害性，奶牛場要加強(qiáng)飼料原料采購、儲(chǔ)存和使用管理，保證飼料的安全和奶牛的健康。

（2）鑒于奶牛飼料中霉菌毒素污染的問題，適量使用一些脫霉劑。脫霉劑的作用方式有兩種：吸附劑和生物轉(zhuǎn)化，每一類脫霉劑脫霉原理不同，作用效果不一，生產(chǎn)中可以使用混合型脫霉劑[5]。但是脫霉劑只能脫去部分霉菌毒素，且對(duì)飼料中的營養(yǎng)元素也有部分損失，對(duì)于輕度污染的飼料可以使用適量的脫霉劑，對(duì)污染嚴(yán)重的飼料直接廢棄，盡量不用于飼喂奶牛。

（3）預(yù)防飼料霉變?nèi)匀皇谴_保霉菌毒素污染的首要措施。控制飼料霉變要全過程把關(guān)，從原料選擇和檢測(cè)、運(yùn)輸、儲(chǔ)存、使用各個(gè)環(huán)節(jié)嚴(yán)格管控[6～8]。一旦發(fā)現(xiàn)霉變要及時(shí)處置，避免用于飼喂奶牛，從而引起奶牛健康問題和牛奶質(zhì)量安全問題[9]。