杜建華 徐海燕 羅德祥

528000廣東省佛山市中醫(yī)院，廣東佛山

山楂消脂膠囊是廣東省佛山市中醫(yī)院常用的經(jīng)驗(yàn)方，由山楂與大黃兩味中藥組成，有降脂、清熱涼血、除積滯等作用，效果好、不良反應(yīng)少、服用方便，能有效改善高脂飲食引起的肥胖和脂代謝紊亂，受到廣大患者及醫(yī)師的青睞[1]。既往中藥膠囊以全粉藥材為主，但空心膠囊囊號固定，全粉藥材裝入量少，加之內(nèi)容物為細(xì)粉，粒徑小、流動性差，導(dǎo)致載入量存在差異[2]。超微粉碎技術(shù)是近年迅速發(fā)展起來的一項(xiàng)高新技術(shù)，也是粉體工程中的一項(xiàng)重要內(nèi)容，包括對粉體原料的超微粉碎、高精度分級和表面活性改變等，隨著超微粉碎技術(shù)的發(fā)展，對藥材原料進(jìn)行細(xì)胞級粉碎技術(shù)，可提高藥材細(xì)胞內(nèi)容物的溶出率，節(jié)省藥材，提高藥物生物利用度及中藥制劑質(zhì)量[3]。目前，對山楂消脂膠囊進(jìn)行超微粉碎工藝制備是否會影響膠囊藥代動力學(xué)參數(shù)成為研究重點(diǎn)，本研究對超微粉山楂消脂膠囊和細(xì)粉山楂消脂膠囊的生物利用度進(jìn)行比較，為超微粉碎技術(shù)的應(yīng)用提供參考。

資料與方法

實(shí)驗(yàn)動物：16 只健康雄性SD 大鼠，無特定病原體SPF級，體重210～280 g(廣東醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供)；基礎(chǔ)飼料，正常飲食、飲水，單籠飼養(yǎng)，飼養(yǎng)1周。

試劑與儀器：山楂消脂膠囊(佛山市中醫(yī)院院內(nèi)制劑，批準(zhǔn)文號：0432002)；大黃酸(中國藥品生物制品檢定所提供)、色譜純、蒸餾水；Waters empower 1525/2996 高效液相色譜儀、TGL-15M 臺式微量高速冷凍離心機(jī)(湖南平凡科技有限公司)、電子天平(上海玉研科學(xué)儀器有限公司)、粉碎機(jī)(FC160F型，上海坤麟制藥機(jī)械有限公司)、貝利微粉機(jī)(BFM-6BI 型，濟(jì)南倍力粉技術(shù)工程有限公司)。

方法：①山楂消脂混懸液制備：取山楂、大黃各10 g，打成粗粒，然后分成2 份，一份經(jīng)粉碎機(jī)粉碎后形成100目粒徑的細(xì)粉，另一份經(jīng)貝利微粉機(jī)粉碎后得到200目粒徑細(xì)粉。用電子天平秤獲取超微粉2.5 g、細(xì)粉2.5 g，分別置入容量瓶內(nèi)，添加超純水超聲溶解、定容，獲取山楂消脂混懸液溶液，濃度0.05 g/mL。②對照品溶液制備：大黃素1.6 g，用甲醇溶解、定容，濃度160 μg/mL。經(jīng)倍數(shù)稀釋，配制0.24 μg/mL、0.48 μg/mL、0.96 μg/mL、24.0 μg/mL、36.0 μg/mL、48.0 μg/mL、60.0 μg/mL的對照品溶液。③動物給藥：16 只大鼠隨機(jī)分為超微粉組和細(xì)粉組，各8只。進(jìn)行研究前12 h禁食。超微粉組給予超微粉混懸液0.5 g/kg；細(xì)粉組給予細(xì)粉混懸液0.5 g/kg。在給藥5 min、15 min、30 min、45 min、1 h、2 h、4 h、6 h、9 h、12 h、24 h后分別提取眼眶血0.5 mL，加入肝素管內(nèi)，用微量高速冷凍離心機(jī)離心8 min，4 000 r/min，留取上層血清0.2 mL，測定大黃素濃度。

觀察指標(biāo)及檢測方法：①血漿樣品：上層血清樣本加入0.1 mol/mL 鹽酸0.05 mL 酸化，添加乙酸乙酯1.5 mL，混合振蕩10 min，再離心8 min，8 000 r/min，沉淀蛋白，吸取乙酸乙酯層液體1.0 mL 吹干。于離心后殘?jiān)刑砑蛹状?.1 mL，渦旋振蕩，離心10 min，12 000 r/min，留取上清液0.07 mL，采用高效液相色譜分析法檢測。②色譜條件：檢測波長為254 nm，流速為1.0 mL/min，柱溫為室溫，大黃酸出峰時間約為7 min。將大黃酸對照品溶液置入離心管內(nèi)，添加大鼠空白血漿0.1 mL，分別配制濃度為0.16 μg/mL、0.32 μg/mL、0.64 μg/mL、16.0 μg/mL、24.0 μg/mL、32.0 μg/mL、40.0 μg/mL 的大黃酸血漿樣本，采用高效液相色譜分析法檢測大黃酸峰面積，儀器為高效液相色譜儀，計(jì)算血藥濃度。將不同時間點(diǎn)的采樣經(jīng)PKSolver 2.0 程序藥代動力學(xué)模擬處理，計(jì)算藥代動力學(xué)參數(shù)，包括末端消除半衰期(t1/2)、達(dá)峰時間(Tmax)、清除率(CL)、藥峰濃度(Cmax)、藥時曲線下面積(AUC)。

統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS 22.0 軟件分析；計(jì)量資料以()表示，采用t檢驗(yàn)；P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

大黃酸對照品溶液血漿樣品精密度：將大黃酸對照品溶液按0.16 μg/mL、16.0 μg/mL、40.0 μg/mL 的血漿濃度，每個濃度平行測6 份，在1 d 內(nèi)測定6 次，測得3 種不同濃度血漿樣品的精密度分別為2.18%、6.35%、6.40%。見表1。

表1 大黃酸對照品溶液血漿樣品精密度

血漿樣品回收率：于空白血漿0.1 mL 加入大黃酸對照品溶液0.2 mL，取0.16 μg/mL、16.0 μg/mL、40.0 μg/mL 的大黃酸濃度溶液0.2 mL，每個濃度平行測5 份，測定的大黃酸峰面積為S，另取濃度為0.24 g/mL、24.00 g/mL、40.00 g/mL 的大黃酸對照品溶液0.2 mL，加入0.1 mL 甲醇，測定的大黃酸峰面積為A，回收率=S/A×100%，計(jì)算得到其平均提取回收率為86.80%，＞85%符合藥物動力學(xué)研究要求。見表2。

表2 血漿樣品回收率

兩組藥動學(xué)參數(shù)比較：超微粉組t1/2短于對照組，Tmax、Cmax、AUC 高于細(xì)粉組，CL 低于細(xì)粉組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表3。

表3 兩組藥代動學(xué)參數(shù)比較()

表3 兩組藥代動學(xué)參數(shù)比較()

討論

近年來，超微粉碎技術(shù)在中藥領(lǐng)域中的應(yīng)用日益廣泛，以超微粉替代普通細(xì)粉，可提高中藥膠囊的藥效，節(jié)省藥材；同時制備成超微粉顆粒，可提高超微粉流動性，增加膠囊內(nèi)的藥量，從而提高中藥制劑的質(zhì)量[4]。山楂消脂膠囊常用于肥胖、高血脂、腦卒中等疾病的治療，治效顯著，得到醫(yī)師及患者的認(rèn)可[5-6]。醫(yī)院在制備山楂消脂膠囊時，通常將中藥材粉碎成細(xì)粉，過篩，混勻后裝入膠囊。但基于細(xì)粉狀的缺陷，比如藥物裝載量有限、粒徑小、流動性差，容易導(dǎo)致膠囊裝載量存在差異。因此對山楂消脂膠囊應(yīng)用超微粉碎技術(shù)，以期提高藥物細(xì)胞內(nèi)容物溶出率，但是否會影響山楂消脂膠囊的生物利用度，需進(jìn)行進(jìn)一步研究。

本組研究對山楂消脂膠囊采用超微粉碎技術(shù)，將超微粉替代原來的普通細(xì)粉，同時采用高效液相色譜分析法檢測超微粉的藥物動力學(xué)參數(shù)，以大黃酸為對照，對大黃酸對照品試驗(yàn)溶液進(jìn)行精密度與回收率實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示血漿樣品精密度較高，提取回收率＞83.0%，藥物濃度符合藥物代謝動力學(xué)研究要求，表明經(jīng)超微粉碎技術(shù)制備的山楂消脂膠囊，并不會影響藥物濃度。本研究大鼠經(jīng)超微粉與細(xì)粉山楂消脂膠囊混懸液灌服后，超微粉組t1/2短于對照組，Tmax、Cmax、AUC 均高于細(xì)粉組，CL 低于細(xì)粉組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。說明與細(xì)粉山楂消脂膠囊比較，超微粉山楂消脂膠囊的藥物動力學(xué)參數(shù)均明顯提高，體內(nèi)有效成分大黃酸的利用度明顯提高，而且吸收速度快，藥效持久，間接肯定了超微粉碎工藝制備的優(yōu)勢。分析原因可能是山楂消脂膠囊進(jìn)行超微粉碎技術(shù)工藝處理后，藥粉細(xì)密，藥物細(xì)胞破壁率升高，能擴(kuò)大藥物表面積，提高藥物吸收量及吸收速度。超微粉技術(shù)既涵蓋了現(xiàn)代物理技術(shù)，也包括了化學(xué)技術(shù)，未來發(fā)展?jié)摿薮?。近年來，超微粉技術(shù)逐漸應(yīng)用于中藥的生產(chǎn)中，不僅能保持中藥的藥效，還能提高中藥的生物利用度，節(jié)約資源。本次實(shí)驗(yàn)中，超微粉碎使大黃酸在大鼠體內(nèi)的吸收更加完全[7]；經(jīng)超微粉碎技術(shù)工藝處理后，大黃內(nèi)的有效成分大黃酸溶出度明顯增加，藥物消除t1/2短，再次證實(shí)體內(nèi)山楂消脂膠囊的吸收迅速，消除速度加快。此外，采用用超微粉替代普通細(xì)粉，可增強(qiáng)膠囊藥效，增加膠囊內(nèi)藥物裝載量，提高藥物品質(zhì)，改善藥物動力學(xué)，制備效果好。利用超微粉碎技術(shù)可以提高山楂的溶解性、穩(wěn)定性及山楂消脂膠囊的消化吸收性[8-9]。

綜上所述，通過超微粉碎工藝制備山楂消脂膠囊，可促使大鼠體內(nèi)大黃素吸收，藥物吸收迅速、吸收量提高，生物利用度高，在節(jié)省藥物資源的同時不會影響藥物濃度及作用，制備效果好，可為超微粉碎工藝改革提供理論支持，為臨床有效、安全用藥提供參考。