劉海哲，鄒青飛，郭馨昕，陳壁，黃勇樺，張建平，初雅潔，李淳，劉先皓，楊士花，李永強(qiáng)*

（1.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)技術(shù)學(xué)院，云南 昆明 650201；2.云南云測(cè)質(zhì)量檢測(cè)有限公司，云南 昆明 650201；3.德宏州食品藥品檢驗(yàn)所，云南 德宏 678400；4.凱里學(xué)院大健康學(xué)院，貴州 凱里 556011；5.滇西應(yīng)用技術(shù)大學(xué)普洱茶學(xué)院，云南 普洱 665099；6.云南昆明國(guó)家糧食儲(chǔ)備中轉(zhuǎn)庫(kù)，云南 昆明 650201；7.大理農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院，云南 大理 671003；8.永平縣綜合檢驗(yàn)檢測(cè)院，云南 大理 671003；9.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)圖書(shū)館，云南 昆明 650201）

槲寄生[Viscum coloratum（Kom.）Nakai]屬于檀香目（Santalales）的一種半寄生植物，主要寄生在?？?、茶科、薔薇科和豆科等植物上[1]。在傳統(tǒng)中醫(yī)中被廣泛用于治療炎癥、痛風(fēng)、心臟病和高血壓等疾病[2]。研究發(fā)現(xiàn)，槲寄生不僅含有蛋白質(zhì)和碳水化合物等營(yíng)養(yǎng)成分，還含有豐富的酚類(lèi)化合物、萜類(lèi)化合物、凝集素和生物堿等活性成分，對(duì)人體健康具有較好的促進(jìn)作用[3]。酚類(lèi)和萜類(lèi)化合物具有抗氧化、抗炎、抗菌、抗癌和抗病毒等作用[4]，受到人們的廣泛關(guān)注。

茶樹(shù)、梨樹(shù)槲寄生在云南省主要分布于普洱、德宏和西雙版納等地區(qū)[5]。目前對(duì)茶樹(shù)槲寄生多酚開(kāi)展了一定的研究，但對(duì)梨樹(shù)槲寄生的研究較少。倪婷婷等[6]測(cè)定了茶樹(shù)槲寄生中多酚和黃酮的含量，并利用高效液相色譜（high performance liquid chromatography，HPLC）法鑒定出12種酚類(lèi)化合物，主要為黃酮醇和黃烷醇。研究發(fā)現(xiàn)茶樹(shù)槲寄生的水提物對(duì)常見(jiàn)的食源性微生物和致病菌具有較好的抑菌作用[5]。同時(shí)，Li等[7]研究發(fā)現(xiàn)茶樹(shù)槲寄生為扁枝槲寄生（Viscum articulatum Burm.f.），梨樹(shù)槲寄生為楓香槲寄生（Viscum liquidambaricolum Hayata），這兩種槲寄生中均含有豐富的多酚和黃酮，且均具有較好的抗氧化活性，并在兩種槲寄生中鑒定出18種酚類(lèi)化合物，主要包括羥基苯甲酸、羥基肉桂酸和類(lèi)黃酮。

目前對(duì)茶樹(shù)槲寄生中的酚類(lèi)化合物進(jìn)行了一定的研究，但梨樹(shù)槲寄生中的活性成分研究較少，同時(shí)關(guān)于兩種槲寄生中萜類(lèi)化合物的研究鮮見(jiàn)。本文在前期研究的基礎(chǔ)上，采用超高壓液相色譜-四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜（ultra-performance liquid chromatography quadrupole time-of-flight mass spectrometry，UPLC-QTOF-MS）法，對(duì)茶樹(shù)、梨樹(shù)槲寄生中的酚類(lèi)和萜類(lèi)化合物進(jìn)行系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)鑒定，可為茶樹(shù)、梨樹(shù)槲寄生的開(kāi)發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

茶樹(shù)與梨樹(shù)槲寄生：采自云南省普洱市景邁山；甲醇（色譜級(jí)）：德國(guó)Merck公司；乙酸（色譜級(jí)）：美國(guó)Sigma公司；乙腈（色譜級(jí)）：美國(guó)Honeywell公司。

1.2 儀器與設(shè)備

電子分析天平（FA2004）：沈陽(yáng)龍騰電子有限公司；超聲波清洗器（KQ-500B）：昆山市超聲儀器有限公司；離心機(jī)（TGL20M）：湖南湘立科學(xué)儀器有限公司；超高效液相色譜-四極桿-飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀（1290 UPLC-6545Q-TOF）：安捷倫科技（中國(guó)）有限公司。

1.3 方法

1.3.1 樣品處理

將粉碎干燥的槲寄生過(guò)40目篩，準(zhǔn)確稱(chēng)取2.0 g槲寄生粉置于50 mL具塞錐形瓶中，加入20 mL甲醇并混勻，室溫下超聲輔助提取15 min，4℃下8 000×g離心10 min，重復(fù)提取3次，合并上清液用N2吹至近干，加入2 mL甲醇復(fù)溶，過(guò)0.2 μm有機(jī)濾膜，濾液用于UPLC-Q-TOF-MS分析。

1.3.2 UPLC-Q-TOF-MS分析條件

色譜條件：ZORBAX Eclipse Plus C18色譜柱（2.1 mm×100 mm，1.8 μm）；柱溫 40 ℃；進(jìn)樣量 2 L；流速0.3 mL/min；流動(dòng)相：A為0.05%乙酸水溶液，B為乙腈；梯度程序：0 min，5%B；2 min，5%B；10 min，30%B；20 min，100%B。25 min處停止并繼續(xù)運(yùn)行4 min。

質(zhì)譜條件：電噴霧離子源采用正/負(fù)離子源模式；干燥氣溫度300℃；干燥氣流速6L/min；鞘氣溫度350℃；鞘氣流速11 L/min；霧化器壓力35 psi（1 psi=6.895 kPa）；毛細(xì)管電壓3.5 kV；噴嘴電壓1 kV；質(zhì)量掃描范圍m/z 100～1 000；采集模式 Full scan，Auto MS/MS。

1.4 結(jié)構(gòu)鑒定

應(yīng)用Masshunter工作站中的Agilent Masshunter Qualitative Analysis B.07.00、Masshunter PCDL Manager B.07.00和Agilent Masshunter Molecular Structure Correlator軟件處理樣品的原始質(zhì)譜數(shù)據(jù)，確定每個(gè)峰的保留時(shí)間、m/z、MS/MS碎片離子，并計(jì)算對(duì)應(yīng)的分子式和偏差。根據(jù)化合物的保留時(shí)間、分子式、m/z、MS/MS碎片離子等信息，并結(jié)合參考文獻(xiàn)和數(shù)據(jù)庫(kù)TCM Database@Taiwa（http：//tcm.cmu.edu.tw/）、Metlin（https：//metlin.scripps.edu）、Chemspider（https：//www.chemspider.com/）和 PubChem（https：//pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/）對(duì)化合物的結(jié)構(gòu)進(jìn)行初步鑒定。采用ChemDraw軟件繪制化合物的結(jié)構(gòu)圖和裂解規(guī)律圖，采用Origin繪制樣品的總離子流圖。

2 結(jié)果與分析

樣品經(jīng)UPLC-Q-TOF-MS分析，正/負(fù)離子模式下的總離子流圖見(jiàn)圖1～圖2。

圖1 茶樹(shù)槲寄生總離子流圖Fig.1 Total ion chromatogram of Viscum coloratum（Kom.）Nakai hosted by Camellia assamica（Mast.）Chang in ion modes

圖2 梨樹(shù)槲寄生總離子流圖Fig.2 Total ion chromatogram of Viscum coloratum（Kom.）Nakai hosted by Pyrus，i，f.in ion modes

鑒定出的酚類(lèi)和萜類(lèi)化合物的保留時(shí)間、m/z、MS/MS碎片離子等信息見(jiàn)表1。

表1 UPLC-Q-TOF-MS在正/負(fù)離子模式下鑒定茶樹(shù)、梨樹(shù)槲寄生中的酚類(lèi)和萜類(lèi)化合物Table 1 Phenolic and terpenoid compounds identifified in Viscum coloratum（Kom.）Nakai hosted by Camellia assamica（Mast.）Chang and Pyrus，i，f. by UPLC-Q-TOF-MS in both negative and

根據(jù)化合物保留時(shí)間、分子式、m/z、MS/MS碎片離子等信息，并結(jié)合數(shù)據(jù)庫(kù)和參考文獻(xiàn)從槲寄生中共鑒定出36種化合物。其中酚類(lèi)化合物有17種，包括2種酚酸（甲基β-間苯二酚和間香豆酸），11種類(lèi)黃酮化合物（薔薇苷B、新圣草苷、橙皮素7-O-葡萄糖苷、山奈酚、山姜素、對(duì)香豆?；宜醿?nèi)酯、高良姜素、山奈酚-3-甲醚、6-5-羥基-7，3'，4'-三甲氧基-8-甲基異黃酮-5-新橙皮苷、喬松素和橘皮素），2種木脂素（鬼臼內(nèi)酯苷和云南擬單性木蘭素A）和2種香豆素（Libanorin和Heliettin）；萜類(lèi)化合物有 19種，包括1種半萜（青蒿酸甲酯），3種單萜（黑麥草內(nèi)酯、吐葉醇和氧化芳樟酯），3種倍半萜（青蒿甲素I、4-hydroxy-3-methoxy-2，10-bisaboladien-9-one和蜜環(huán)菌辛素），2種二萜（丹參新酮II和羅漢松內(nèi)酯E），6種三萜（靈芝醇F、漫五酸、靈芝醇B、靈芝醇D、野鴉椿酸甲酯和松葉菊萜酸）和4種環(huán)烯醚萜（乙?；鞔肌ⅹM葉獐牙菜甙、杜仲醇和繡球茜草辛苷）。其中，兩種槲寄生中含有9種相同的化合物。本試驗(yàn)在茶樹(shù)、梨樹(shù)槲寄生中新鑒定的化合物包括茶樹(shù)槲寄生中甲基β-間苯二酚、薔薇苷B和乙?；鞔?種酚類(lèi)化合物，青蒿酸甲酯和松葉菊萜酸2種萜類(lèi)化合物；梨樹(shù)槲寄生中甲基β-間苯二酚、山姜素、云南擬單性木蘭素A和鬼臼內(nèi)酯苷4種酚類(lèi)化合物，狹葉獐牙菜甙、青蒿甲素I和青蒿酸甲酯3種萜類(lèi)化合物。

茶樹(shù)、梨樹(shù)槲寄生中含有豐富的酚類(lèi)和萜類(lèi)化合物，其中喬松素因其具有較好的抗炎和抗氧化活性，能夠?qū)δc缺血再灌注小鼠的腸黏膜和對(duì)乙酰氨基酚誘發(fā)的小鼠肝損傷發(fā)揮保護(hù)作用[8-9]；能夠增加神經(jīng)元的活性和谷胱甘肽的水平、降低乳酸脫氫酶的活性、抑制一氧化氮和活性氧的產(chǎn)生，具有一定的神經(jīng)保護(hù)作用[10]；同時(shí)喬松素可保護(hù)體外培養(yǎng)的大鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞免受氧-葡萄糖剝奪/再氧化的損傷，并能夠增加線(xiàn)粒體膜電位，表明喬松素對(duì)體外血腦脊液屏障具有一定的保護(hù)作用[11]。

山姜素可通過(guò)減少炎癥和氧化應(yīng)激反應(yīng)，改善膿毒癥大鼠的急性肺損傷以及冠心病大鼠的心臟功能、血脂和血管內(nèi)皮功能[12-13]；可以通過(guò)減輕子宮的組織學(xué)病變和降低髓過(guò)氧化物酶的活性，保護(hù)小鼠免受子宮內(nèi)膜炎侵害[14]；能夠抑制腎組織中腫瘤壞死因子和白細(xì)胞介素等炎癥因子的產(chǎn)生以及核轉(zhuǎn)錄因子的活化，減輕腎臟損傷[15]；可通過(guò)抑制軟骨細(xì)胞中炎癥因子的表達(dá)保護(hù)脂多糖誘導(dǎo)的軟骨細(xì)胞，促進(jìn)軟骨細(xì)胞增殖，能有效預(yù)防骨關(guān)節(jié)炎[16]。除此之外，山姜素具有一定的抑制腫瘤細(xì)胞增殖作用，是抗癌抗腫瘤研究的熱點(diǎn)藥物之一，可抑制膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的增殖和侵襲[17]；在SKOV3卵巢癌細(xì)胞系中以劑量和時(shí)間依賴(lài)方式抑制SKOV3細(xì)胞的集落和球體形成，并誘導(dǎo)其凋亡[18]；同時(shí)還可通過(guò)調(diào)節(jié)PI3/KAKT信號(hào)通路抑制肺癌的發(fā)展，并通過(guò)線(xiàn)粒體途徑抑制胃癌細(xì)胞增長(zhǎng)[19]。

橘皮素能有效緩解高強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)誘發(fā)的人體皮質(zhì)醇應(yīng)激反應(yīng)，抑制皮質(zhì)醇過(guò)度分泌，提升人體抗氧化能力，加速體內(nèi)炎癥消除，促進(jìn)身體機(jī)能的恢復(fù)[20]；可通過(guò)增強(qiáng)胰島素的分泌調(diào)節(jié)肝酶活性，并能夠降低血糖，從而達(dá)到預(yù)防糖尿病的作用[21]；同時(shí)橘皮素能夠通過(guò)抑制神經(jīng)系統(tǒng)、消化系統(tǒng)和泌尿系統(tǒng)相關(guān)細(xì)胞中的NF-κB通路發(fā)揮其抗炎功能，以及通過(guò)部分調(diào)節(jié)Nrf2信號(hào)通路降低肝臟中的氧化應(yīng)激，進(jìn)而緩解非酒精性脂肪性肝病[22]；除此之外橘皮素對(duì)雙酚A誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激具有極好的改善作用，可降低雙酚A誘導(dǎo)引起的肝臟損傷[23]。

山奈酚具有促進(jìn)人體健康，預(yù)防多種疾病的功能。山奈酚可通過(guò)誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，抑制腫瘤細(xì)胞黏附、遷移和侵襲等方式發(fā)揮其抗癌功效[24]；能夠通過(guò)線(xiàn)粒體途徑和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞凋亡，具有潛在的抗肝癌活性，對(duì)癌癥及心血管疾病具有一定的預(yù)防作用[25-26]。山奈酚能夠通過(guò)調(diào)節(jié)炎癥相關(guān)蛋白的表達(dá)以及抑制轉(zhuǎn)錄因子激活等方式，抑制炎癥的發(fā)生和發(fā)展[24]；可抑制TLR4-NF-κB-NLRP3炎癥信號(hào)通路，減少機(jī)體中炎癥因子的合成與釋放，增加抗炎因子的轉(zhuǎn)錄活性，能夠保護(hù)腸黏膜機(jī)械屏障的完整，降低結(jié)腸的病理性損傷，減輕由葡聚糖硫酸鈉誘導(dǎo)的小鼠潰瘍性結(jié)腸炎[27]。此外，山奈酚可以通過(guò)改善胰島素敏感指數(shù)，增加胰島素敏感性，發(fā)揮對(duì)糖尿病的防治功效[24]。

高良姜素能夠清除氧自由基、減輕心肌細(xì)胞氧化脂質(zhì)化，并通過(guò)抑制轉(zhuǎn)錄因子、腫瘤壞死因子、白細(xì)胞介素等炎癥因子的表達(dá)，可抑制心肌細(xì)胞的肥大和死亡[28]；同時(shí)高良姜素可調(diào)節(jié)磷酸肌醇激酶和糖原合成酶激酶信號(hào)通路，降低心肌細(xì)胞凋亡，上調(diào)抗凋亡蛋白、降低凋亡蛋白基因表達(dá)，延緩心肌細(xì)胞過(guò)度損傷導(dǎo)致的纖維化[29]；此外高良姜素能下調(diào)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子、纖維連接蛋白、α-平滑肌肌動(dòng)蛋白、基質(zhì)金屬蛋白酶的活性，進(jìn)而抑制心肌纖維化發(fā)生，同時(shí)調(diào)節(jié)絲裂原活化蛋白激酶，能夠顯著改善心臟收縮及舒張功能[30]。

綜上所述，茶樹(shù)、梨樹(shù)槲寄生中的酚類(lèi)和萜類(lèi)化合物具有較好的生物活性，能夠預(yù)防多種疾病和促進(jìn)人體健康，可為茶樹(shù)、梨樹(shù)槲寄生在功能食品中的應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

3 結(jié)論

本試驗(yàn)采用UPLC-Q-TOFMS法從茶樹(shù)、梨樹(shù)槲寄生中共鑒定出36種化合物，包括17種酚類(lèi)化合物和19種萜類(lèi)化合物。茶樹(shù)槲寄生中鑒定出8種酚類(lèi)化合物和11種萜類(lèi)化合物，梨樹(shù)槲寄生中鑒定出13種酚類(lèi)化合物和13種萜類(lèi)化合物，兩種槲寄生含有9種相同的化合物。其中，新鑒定的化合物包括茶樹(shù)槲寄生中甲基β-間苯二酚、薔薇苷B和乙?；鞔?種酚類(lèi)化合物，茶樹(shù)槲寄生中青蒿酸甲酯和松葉菊萜酸2種萜類(lèi)化合物；化合物甲基β-間苯二酚、鬼臼內(nèi)酯苷、山姜素和云南擬單性木蘭素A為梨樹(shù)槲寄生中鑒定出的4種酚類(lèi)化合物，化合物狹葉獐牙菜甙、青蒿甲素I和青蒿酸甲酯為梨樹(shù)槲寄生中鑒定出的3種萜類(lèi)化合物。說(shuō)明茶樹(shù)、梨樹(shù)槲寄生中含有豐富的酚類(lèi)和萜類(lèi)化合物，可為茶樹(shù)、梨樹(shù)槲寄生的開(kāi)發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。