保建民

（武威市食品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，甘肅武威 733000）

轉(zhuǎn)基因食品是一種利用基因技術(shù)創(chuàng)造的新型食品，主要是將外來(lái)基因移植入生物體中，可改善其品質(zhì)、營(yíng)養(yǎng)成分，增加植物的抗蟲害能力和動(dòng)植物的產(chǎn)量等。轉(zhuǎn)基因食品的安全性存在爭(zhēng)議，為了進(jìn)一步驗(yàn)證轉(zhuǎn)基因食品的安全性，需要采用先進(jìn)的食品檢測(cè)技術(shù)，本文對(duì)常見的檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行了探討，以供參考。

1 轉(zhuǎn)基因食品的檢測(cè)

轉(zhuǎn)基因食品得到了快速的發(fā)展，全球也更加關(guān)注轉(zhuǎn)基因食品的安全問(wèn)題。轉(zhuǎn)基因食品是一種新食品類型，因此尚未有充足的證據(jù)對(duì)其生態(tài)平衡性和對(duì)人體健康影響進(jìn)行驗(yàn)證。目前人們對(duì)轉(zhuǎn)基因食品安全性仍然存在質(zhì)疑，包括是否對(duì)人體健康有不良影響，其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值是否降低，是否增加食物的過(guò)敏性等。轉(zhuǎn)基因食品的安全性是全球的爭(zhēng)議話題，因此對(duì)于這一新型食品必須做好安全性檢測(cè)和評(píng)價(jià)[1]。當(dāng)前食品檢測(cè)技術(shù)有了顯著進(jìn)步，具有較多的檢測(cè)方法，在檢測(cè)食品安全方面發(fā)揮了重要的作用。目前對(duì)轉(zhuǎn)基因食品進(jìn)行檢測(cè)主要包括兩個(gè)方面，即核酸水平檢測(cè)與蛋白質(zhì)水平檢測(cè)。這兩種檢測(cè)方式在實(shí)際中都得到了廣泛的應(yīng)用，并且對(duì)驗(yàn)證轉(zhuǎn)基因食品安全性起到了重要的作用。

2 轉(zhuǎn)基因食品的常見檢測(cè)技術(shù)

2.1 組學(xué)分析技術(shù)

組學(xué)分析方法包括多種具體的分析方式。例如，常見的蛋白組學(xué)和轉(zhuǎn)錄學(xué)等，都屬于組學(xué)分析技術(shù)的范疇，其中蛋白組學(xué)是實(shí)用性較強(qiáng)的一種檢驗(yàn)方式，設(shè)置特定的時(shí)間以及環(huán)境的條件要求，能夠檢測(cè)出細(xì)胞內(nèi)含有的蛋白質(zhì)表達(dá)水平，其主要監(jiān)測(cè)的是蛋白質(zhì)的數(shù)量以及功能特點(diǎn)等[2]。轉(zhuǎn)錄組學(xué)也是一種較為多見的檢測(cè)方式，主要檢測(cè)的是細(xì)胞表達(dá)的基因總和，能夠研究外插入的基因表達(dá)情況。

2.2 光譜學(xué)分析技術(shù)

光譜學(xué)分析技術(shù)主要采取紅外光譜技術(shù)進(jìn)行精準(zhǔn)提取或者預(yù)處理，由于紅外光譜的穿透力強(qiáng)，所以通常用于基因光譜學(xué)的鑒定，具有一定的應(yīng)用價(jià)值，雖然當(dāng)前無(wú)法確定其準(zhǔn)確性，但是該技術(shù)應(yīng)用簡(jiǎn)單，操作簡(jiǎn)便、檢測(cè)效率高，不會(huì)造成損失，也可以用于評(píng)價(jià)轉(zhuǎn)基因食品的非期望效應(yīng)。

2.3 蛋白質(zhì)印跡法

蛋白質(zhì)印跡法的原理是使靶蛋白特異性的非標(biāo)記性抗體與靶蛋白中的相關(guān)抗原決定簇結(jié)合，對(duì)已結(jié)合的抗體進(jìn)行檢測(cè)。該檢測(cè)方法具有較高的準(zhǔn)確率，但是檢測(cè)效率較低，所以通常不推薦使用。該技術(shù)主要用于檢測(cè)少量的轉(zhuǎn)基因食品，因?yàn)殡y度系數(shù)較高，而且受到較多的制約條件，特別是對(duì)環(huán)境條件的要求較高，所以該檢測(cè)方法的成本較高，一般情況下不能用于大批量的樣品檢測(cè)，只能用于少量樣品的檢測(cè)。

2.4 ELISA 檢測(cè)法

ELISA 檢測(cè)法是轉(zhuǎn)基因食品中的目標(biāo)蛋白和固相載體表面抗體發(fā)生結(jié)合反應(yīng)，然后加入相應(yīng)的酶反應(yīng)底物，底物會(huì)反應(yīng)生成有色物質(zhì)，再通過(guò)顯色反應(yīng)對(duì)轉(zhuǎn)基因的成分進(jìn)行檢測(cè)。該方法的優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)便，檢測(cè)效率高，通常可以用于轉(zhuǎn)基因食品的現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)，但是該檢測(cè)方法無(wú)法定量檢測(cè)，所以檢測(cè)準(zhǔn)確度不高，而且復(fù)雜基質(zhì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度造成一定的影響，另外該檢測(cè)方法只用于沒(méi)有加工過(guò)的轉(zhuǎn)基因食品原料，如果轉(zhuǎn)基因食品進(jìn)行了加工，則不適用于該方法[3]。

2.5 免疫試紙條法

免疫試紙條法和蛋白質(zhì)印跡法有相同的原理，但不同之處是其固相載體與蛋白質(zhì)印跡法不同。蛋白質(zhì)印跡法采用的固相載體是聚乙烯反應(yīng)板，免疫試紙條法采用的是硝化纖維免疫試紙條法，優(yōu)勢(shì)是能夠快速得出檢測(cè)結(jié)果，一般只需10 min 左右，但是該檢測(cè)方法的精準(zhǔn)度和靈敏度不高，所以只適用于緊急情況下的快速檢驗(yàn)，可以對(duì)蛋白質(zhì)整體進(jìn)行分析，對(duì)其成分和質(zhì)量的檢測(cè)準(zhǔn)確度不高，所以一般情況下不推薦采用該方法對(duì)轉(zhuǎn)基因食品進(jìn)行檢測(cè)。

2.6 基因水平的檢測(cè)

2.6.1 定性PCR 法

定性PCR 對(duì)啟動(dòng)子、終止子和基因片斷進(jìn)行檢測(cè)。通常構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，需要將啟動(dòng)子和終止子加到目的基因的5’和3’端，而目前大部分轉(zhuǎn)基因食品采用的啟動(dòng)子是CaMV35S 啟動(dòng)子、NOS 啟動(dòng)子和Ocs 啟動(dòng)子，終止子包括NOS 終止子等，因此利用pcr 檢測(cè)時(shí)主要是檢測(cè)CaMV35S 啟動(dòng)子和NOS終止子，也要根據(jù)實(shí)際情況配合使用其他檢測(cè)[4]。由于定性PCR 法通常受到DNA 純度的影響，如果發(fā)生DNA 的污染或者降解反應(yīng)，在檢測(cè)時(shí)就會(huì)導(dǎo)致結(jié)果出現(xiàn)假陽(yáng)性，所以該方法只能用于初步鑒定轉(zhuǎn)基因食品。

2.6.2 定量PCR 法

定性PCR 的方法只能夠檢測(cè)食品是否為轉(zhuǎn)基因食品，但是不能夠?qū)ζ渲型庠椿虻暮窟M(jìn)行檢測(cè)，所以可以采用定量PCR 的方法對(duì)插入的外源性基因片段占轉(zhuǎn)基因片段的百分含量進(jìn)行定性檢測(cè)。在進(jìn)行普通的定性PCR 過(guò)程中，可以采用不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性物，繪制出吸光值和轉(zhuǎn)基因含量的曲線，進(jìn)而對(duì)轉(zhuǎn)基因的含量進(jìn)行確定[5]。

2.6.3 實(shí)時(shí)定量熒光PCR 法

實(shí)時(shí)熒光PCR 相比普通的PCR 檢測(cè)技術(shù)具有諸多的優(yōu)勢(shì)，普通PCR 檢測(cè)技術(shù)是一種終點(diǎn)測(cè)定方式，需要打開反應(yīng)管，產(chǎn)物很容易發(fā)生污染，這也是導(dǎo)致假陽(yáng)性發(fā)生率的原因。實(shí)時(shí)PCR 在檢測(cè)的過(guò)程中是動(dòng)態(tài)檢測(cè)，所以不需要打開反應(yīng)管，操作簡(jiǎn)便的同時(shí)也降低了感染的發(fā)生率，能夠計(jì)算每個(gè)樣品的循環(huán)閾值，獲得準(zhǔn)確的工作曲線，減少其他因素的影響，提高檢測(cè)的自動(dòng)化水平。

2.6.4 PCR-ELISA 法

PCR-ELISA 法是一種綜合了兩種檢測(cè)方式優(yōu)勢(shì)的新型檢測(cè)方法，具備PCR 以及ELISA 的檢測(cè)優(yōu)點(diǎn)。共價(jià)交聯(lián)在PCR 管壁上的寡核苷酸為固相引物，Taq酶擴(kuò)增模板目標(biāo)核酸，生成的產(chǎn)物為固相產(chǎn)物，其余部分為液相產(chǎn)物[6]。固相產(chǎn)物通過(guò)標(biāo)記探針雜交后，進(jìn)行堿性磷酸酯酶標(biāo)記的鏈親和素進(jìn)行ELISA檢測(cè)。該新型檢測(cè)方法的效率和準(zhǔn)確度較高，是一種綜合性與實(shí)用性較強(qiáng)的檢測(cè)方式。

2.6.5 Southern 雜交

定位基因組DNA 特定序列，利用放射性或熒光標(biāo)記對(duì)外源目的基因的同源序列進(jìn)行標(biāo)記，對(duì)外源及內(nèi)源基因中高度同源性的DNA 片斷進(jìn)行檢測(cè)。這種檢測(cè)方式也是一種常用的檢測(cè)方式，但是一般情況下檢測(cè)成本較高，需要非常嚴(yán)苛的檢測(cè)要求，對(duì)于樣品的純度要求極高，所以不適用于大批量的樣品檢測(cè)。小批量的樣品通過(guò)該方法進(jìn)行檢測(cè)，能夠得到較高的準(zhǔn)確度[7]。

2.6.6 基因芯片

利用大量的DNA 探針與待檢的轉(zhuǎn)基因樣品中提取到的DNA 擴(kuò)增標(biāo)記后和芯片產(chǎn)生雜交，利用芯片掃描儀檢測(cè)雜交信號(hào)并分析[8]。這種檢測(cè)方式的檢測(cè)效率較高而且成本較低，所以對(duì)于大量樣品的檢測(cè)較為適用，能夠快速提供檢測(cè)結(jié)果。

2.7 快速檢測(cè)技術(shù)

快速檢測(cè)技術(shù)在轉(zhuǎn)基因食品的安全檢測(cè)中發(fā)揮著重要的作用，特別是在監(jiān)督管理、質(zhì)量控制方面的作用更加突出?？焖贆z測(cè)技術(shù)主要可以分為生物傳感器及試紙條兩種檢測(cè)方式。其中試紙條檢測(cè)方法是一種根據(jù)薄層層析膜基礎(chǔ)采用的新型檢測(cè)方法，該檢測(cè)方法成本較低，檢測(cè)快速，檢測(cè)方法便捷，具有較廣的適用性。該檢測(cè)方法能夠?qū)⒖乖贵w進(jìn)行特異性結(jié)合，可以對(duì)單一靶蛋白進(jìn)行靶向檢測(cè)，但是這種方法不適用于大規(guī)模的食品檢測(cè)。生物傳感器也是一種新型的快速檢測(cè)方式，可以根據(jù)分子識(shí)別元件的類型，分為免疫傳感器、微生物傳感器以及細(xì)胞傳感器等。該檢測(cè)方法的靈敏度較高，檢測(cè)成本低，而且檢測(cè)方法簡(jiǎn)便，在對(duì)轉(zhuǎn)基因食品進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，需要綜合分析檢測(cè)的需求以及轉(zhuǎn)基因食品的類型特點(diǎn)，合理確定檢測(cè)對(duì)象和檢測(cè)范圍，采用最佳的檢測(cè)方法組合。

3 結(jié)語(yǔ)

轉(zhuǎn)基因食品是當(dāng)前的熱點(diǎn)話題，隨著人們對(duì)食品安全的關(guān)注度越來(lái)越高，轉(zhuǎn)基因食品的安全性也成為當(dāng)前的研究熱點(diǎn)之一。對(duì)轉(zhuǎn)基因食品安全性進(jìn)行評(píng)估，需要借助先進(jìn)的檢測(cè)技術(shù)，目前對(duì)轉(zhuǎn)基因食品進(jìn)行核酸水平檢測(cè)以及蛋白質(zhì)水平檢測(cè)等，對(duì)驗(yàn)證轉(zhuǎn)基因食品安全性起到了重要的作用。當(dāng)前轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)的研究更加深入，對(duì)轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)要求也在顯著提高，需要更準(zhǔn)確、快速、高效的檢測(cè)技術(shù)。目前近紅外波譜技術(shù)、毛細(xì)管電泳技術(shù)、超分支滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)等技術(shù)不斷涌現(xiàn)，每種檢測(cè)技術(shù)的優(yōu)勢(shì)以及缺點(diǎn)各不相同，需要結(jié)合實(shí)際情況有針對(duì)性地采用科學(xué)合理的檢測(cè)技術(shù)，進(jìn)而進(jìn)一步降低檢測(cè)成本，提高檢測(cè)的準(zhǔn)確度和效率。