劉悅越，英志芳，趙榮榮，范行良，王劍鋒，李長(zhǎng)貴

中國(guó)食品藥品檢定研究院，北京 102629

脊髓灰質(zhì)炎（簡(jiǎn)稱(chēng)脊灰）是由脊灰病毒感染引起的急性傳染病，嚴(yán)重者可癱瘓甚至死亡，全球免疫接種疫苗是消滅脊灰的唯一解決方案［1］。幾十年來(lái)，口服脊灰減毒活疫苗（oral polio vaccine，OPV）一直是免疫接種的支柱，是根除野生型脊灰病毒工作的重要組成部分。OPV能夠在胃腸道中復(fù)制，誘導(dǎo)腸道黏膜免疫，并在個(gè)體隨后接觸活病毒時(shí)減少病毒脫落，有效建立免疫屏障，且具有產(chǎn)能高、價(jià)格便宜、使用方便等優(yōu)點(diǎn)［2］。我國(guó)自上世紀(jì)60年代開(kāi)始使用OPV，其在消滅脊灰的進(jìn)程中發(fā)揮了重要作用。我國(guó)已于2000年7月證實(shí)自1994年10月起無(wú)本土野病毒引起的脊灰病例［3］。世界衛(wèi)生組織（World Health Organization，WHO）基于全球消滅Ⅱ型脊灰野毒株，且Ⅱ型OPV可能回復(fù)突變引起傳染性循環(huán)疫苗衍生脊灰病毒（circulating vaccine-derived poliovirus，cVDPV）的問(wèn)題，建議全球停止使用三價(jià)OPV（trivalent OPV，tOPV），轉(zhuǎn)換為含Ⅰ型和Ⅲ型減毒株的二價(jià)OPV（bivalent OPV，bOPV）及滅活脊灰疫苗（inactivated poliomyelitis vaccine，IPV）聯(lián)合使用［4］。我國(guó)已于2016年5月完成轉(zhuǎn)換工作。

目前獲得批準(zhǔn)上市的bOPV為口服液體疫苗和糖丸兩種劑型，市場(chǎng)上使用的主要為口服液體疫苗。依據(jù)《中國(guó)藥典》三部（2015版）及企業(yè)注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)，中國(guó)食品藥品檢定研究院（簡(jiǎn)稱(chēng)中檢院）對(duì)企業(yè)質(zhì)檢記錄摘要進(jìn)行審核，并對(duì)每批疫苗進(jìn)行部分關(guān)鍵項(xiàng)目的檢定。本文對(duì)2016—2020年用于國(guó)內(nèi)計(jì)劃免疫的bOPV的批簽發(fā)及質(zhì)量情況進(jìn)行分析，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 2016—2020年bOPV批簽發(fā)概況

2016—2020年中檢院共簽發(fā)538批，4.46億劑bOPV用于我國(guó)計(jì)劃免疫接種，見(jiàn)表1。

表1 2016—2020年bOPV的批簽發(fā)量

在批簽發(fā)過(guò)程中，所有批次bOPV均進(jìn)行資料審核及無(wú)菌檢查，另隨機(jī)抽取一定比例的樣品進(jìn)行鑒別試驗(yàn)、總病毒滴度、Ⅰ型和Ⅲ型病毒滴度等項(xiàng)目檢測(cè)。2016—2020簽發(fā)的538批bOPV檢定結(jié)果均符合規(guī)定。

2 2016—2020年bOPV質(zhì)量分析

2.1 鑒別試驗(yàn)bOPV的鑒別試驗(yàn)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為病毒型別應(yīng)準(zhǔn)確無(wú)誤，即疫苗經(jīng)Ⅰ型和Ⅲ型混合脊灰病毒特異性免疫血清中和后，接種至敏感細(xì)胞培養(yǎng)，細(xì)胞應(yīng)無(wú)病變出現(xiàn)。2016—2020年簽發(fā)的538批bOPV檢定結(jié)果均符合規(guī)定。

2.2 病毒滴度 病毒滴度是顯示疫苗中活病毒含量的有效性指標(biāo)。質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定每劑疫苗總病毒滴度應(yīng)不低于6.12 lgCCID50，其中Ⅰ型應(yīng)不低于6.0 lgCCID50，Ⅲ型應(yīng)不低于5.5 lgCCID50。2016—2020年538批bOPV企業(yè)自檢結(jié)果與中檢院檢測(cè)結(jié)果的一致性較好，除2020年Ⅲ型病毒滴度均值相差4.15%外，其他型均值差異均＜2%。同一型別不同年度的病毒滴度較為穩(wěn)定，其中總病毒滴度中檢院檢測(cè)結(jié)果均值為6.68～6.77 lgCCID50／劑，Ⅰ型和Ⅲ型病毒滴度中檢院檢測(cè)結(jié)果均值分別為6.54～6.64和5.96～6.26 lgCCID50／劑。見(jiàn)圖1。

圖1 bOPV各年度總病毒滴度以及Ⅰ型和Ⅲ型病毒滴度均值

以2018和2020年的疫苗成品病毒滴度為例進(jìn)行趨勢(shì)分析，結(jié)果表明，不同批次間疫苗均一性較好。病毒總滴度中檢院檢測(cè)結(jié)果為6.42～6.92 lgCCID50／劑，均在±3倍標(biāo)準(zhǔn)差（standard de-viation，SD）范圍內(nèi)，除3批低于均值-2SD0.01外，其他均在±2SD范圍。Ⅰ型和Ⅲ型病毒滴度中檢院檢測(cè)結(jié)果分別為6.30～6.80和5.80～6.42 lgCCID50／劑，均在±2SD范圍內(nèi)。

2.3 抗生素殘留 采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)疫苗成品中慶大霉素殘留量，結(jié)果顯示，2016—2020年538批bOPV均≤12 ng／劑，低于質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)50 ng／劑。其中10～12 ng／劑占2.4%，1～9 ng／劑占59.9%，＜1 ng／劑占37.7%。

圖2 2018—2020年bOPV病毒滴度趨勢(shì)分析

續(xù)圖2 2018—2020年bOPV病毒滴度趨勢(shì)分析

3 討論

自1988年世界衛(wèi)生大會(huì)通過(guò)根除脊灰的決議以來(lái)，除阿富汗和巴基斯坦外，所有國(guó)家均中斷了野生脊灰病毒的傳播［5］，尤其是Ⅱ型野病毒，自1999年以來(lái)未發(fā)現(xiàn)其引起的脊灰病例。OPV是推進(jìn)脊灰消除進(jìn)程的關(guān)鍵工具，但可能引起cVDPV，監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)表明，超過(guò)90%的cVDPV病例由cVDPV2引起［6］。為消除cVDPV2帶來(lái)的風(fēng)險(xiǎn)，WHO建議將僅包含Ⅰ型和Ⅲ型脊灰減毒株的bOPV全球同步替代所有tOPV。全球155個(gè)使用tOPV的國(guó)家／地區(qū)均已完成從tOPV至bOPV的轉(zhuǎn)換［7］。

我國(guó)生產(chǎn)的bOPV基本延續(xù)tOPV的生產(chǎn)工藝，臨床研究表明，bOPV具有良好的安全性和免疫原性［8］。2016—2018年bOPV每年的簽發(fā)量均在1億劑次以上，保障了我國(guó)轉(zhuǎn)換后的計(jì)劃免疫用苗。2019年隨著國(guó)產(chǎn)IPV供應(yīng)日趨充足，且我國(guó)逐漸將“1劑IPV+3劑bOPV”的免疫策略替代為“2劑IPV+2劑bOPV”，因此，對(duì)bOPV的需求有所下降，從而批簽發(fā)量自2019年相應(yīng)減少。

根據(jù)《中國(guó)藥典》三部（2015版）及企業(yè)注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)要求，病毒滴度檢測(cè)采用微量細(xì)胞病變法。由于脊灰病毒在敏感細(xì)胞系培養(yǎng)可出現(xiàn)細(xì)胞病變，引起致細(xì)胞病變效應(yīng)，以不同稀釋度病毒接種細(xì)胞，出現(xiàn)50%細(xì)胞病變的最高病毒稀釋度即為病毒滴度［9］。本文分析結(jié)果表明，企業(yè)自檢結(jié)果與中檢院檢測(cè)結(jié)果均符合規(guī)定，各年度波動(dòng)較小，保證了疫苗的有效性和生產(chǎn)穩(wěn)定性。

疫苗生產(chǎn)過(guò)程中，由于菌毒種引入和生產(chǎn)工藝要求，可能會(huì)帶入一定的抗生素，且后續(xù)工藝很難將其全部清除。為防止抗生素在易敏人群中引起過(guò)敏反應(yīng)，《中國(guó)藥典》三部（2015版）對(duì)疫苗中抗生物殘留有嚴(yán)格規(guī)定，脊灰疫苗的標(biāo)準(zhǔn)為不高于50 ng／劑。批簽發(fā)檢測(cè)結(jié)果顯示，bOPV抗生素含量明顯低于該標(biāo)準(zhǔn)限值，符合要求。

綜上所述，將2016—2018年bOPV的批簽發(fā)情況結(jié)合企業(yè)和中檢院的數(shù)據(jù)分析，表明通過(guò)實(shí)施批簽發(fā)，可較好地控制疫苗產(chǎn)品質(zhì)量，保障上市疫苗的安全性和有效性。