馬 琴，馮 娟，田建文，劉 軍，李冬冬，張園園，劉敦華,,*，李江闊

（1.寧夏大學(xué)食品與葡萄酒學(xué)院，寧夏 銀川 750021；2.寧夏大學(xué)農(nóng)學(xué)院，寧夏 銀川 750021；3.寧夏回族自治區(qū)科技廳，寧夏 銀川 750001；4.國家農(nóng)產(chǎn)品保鮮工程技術(shù)研究中心（天津），天津市農(nóng)產(chǎn)品采后生理與貯藏保鮮重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300384）

火柿（L. Huoshi）是我國主栽柿品種之一，富含多種營養(yǎng)成分，具有降壓、抗脂質(zhì)過氧化、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)等保健作用，深受消費(fèi)者喜愛?；鹗翆俚湫秃粑S變型果實(shí)，產(chǎn)量大且收獲時(shí)節(jié)集中，在收獲后會(huì)發(fā)生明顯的軟化，在其軟化后更容易受到機(jī)械損傷并發(fā)生腐爛，這很大程度上限制了柿果的長途運(yùn)輸及其貨架期，因此探究貯藏技術(shù)對(duì)火柿采后貯藏過程中軟化及貯藏品質(zhì)的影響尤為重要。

1-甲基環(huán)丙烯（1-methylcyclopropene，1-MCP）是一種乙烯受體抑制劑，可強(qiáng)烈競(jìng)爭(zhēng)乙烯受體，與其發(fā)生不可逆結(jié)合，進(jìn)而抑制乙烯釋放，達(dá)到減緩果蔬后熟衰老進(jìn)程、延長貯藏保鮮期的目的。氣調(diào)貯藏（modified atmosphere packaging，MA）通過貯藏環(huán)境內(nèi)外氣體交換和產(chǎn)品自身呼吸作用，形成相對(duì)高CO、低O濃度的貯藏微環(huán)境，調(diào)控產(chǎn)品采后生理代謝，進(jìn)而提高保鮮效果。由于1-MCP具有高效、無毒、低殘留的優(yōu)點(diǎn)，且在延緩果蔬后熟衰老、維持品質(zhì)和延長貯藏期方面呈現(xiàn)出顯著效果，因此在采后果蔬貯藏保鮮上具有重要的應(yīng)用價(jià)值。已有研究表明1-MCP處理對(duì)桃、梨、蘋果等呼吸躍變型水果具有顯著的保鮮效果；相關(guān)研究表明不同濃度1-MCP處理均可保持柿果的感官品質(zhì)、色澤及VC含量，降低乙烯生成速率和丙二醛含量，并有效抑制柿果實(shí)軟化；1-MCP和其他處理聯(lián)合使用的效果更為顯著，如對(duì)比單一處理，1-MCP聯(lián)合聚氯乙烯保鮮膜處理能更有效抑制柿果硬度的下降、褐變程度的加劇、丙二醛含量的升高；聯(lián)合低溫（1 ℃）處理或氣調(diào)包裝可明顯減輕柿果冷害。

果萼是離體幼柿果實(shí)的乙烯生物合成起點(diǎn)和柿果采后蒸騰失水的主要部位，果實(shí)失水脅迫誘導(dǎo)萼片中脫落酸（abscisic acid，ABA）的積累并啟動(dòng)離體幼果軟化生理生化程序，加速柿果軟化，因此柿采后果萼處理對(duì)貯藏效果也有一定影響。目前鮮見有關(guān)去萼片預(yù)處理后再采用1-MCP和MA單獨(dú)及聯(lián)合處理火柿在貯藏期內(nèi)軟化及品質(zhì)變化的研究報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)在冰溫（-0.5±0.3）℃條件下利用1-MCP和MA單獨(dú)及聯(lián)合處理保留萼片和去除萼片火柿，從柿果在貯藏過程中環(huán)境中氣體含量、生理指標(biāo)和營養(yǎng)指標(biāo)等變化的角度探討1-MCP、MA及協(xié)同處理（1-MCP+MA）對(duì)有、無萼片的火柿在貯藏過程中軟化的影響，為采后柿果的貯藏保鮮技術(shù)提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

火柿采摘自北京平谷；1-MCP 國家農(nóng)產(chǎn)品保鮮工程技術(shù)研究中心（天津）。所用試劑均為分析純級(jí)。

1.2 儀器與設(shè)備

Check point便攜式O/CO測(cè)定儀 丹麥Dansensor公司；TA.XT Plus質(zhì)構(gòu)儀 英國SMS公司；TU-1810紫外-可見分光光度計(jì) 北京普析通用儀器有限責(zé)任公司；2010氣相色譜儀 日本島津公司。

1.3 方法

1.3.1 火柿預(yù)處理和實(shí)驗(yàn)分組

火柿于2019年10月采收，采后篩選果實(shí)質(zhì)量（（95±5）g）、顏色指數(shù)（12.5±0.5，顏色指數(shù)＝1 000×*/**）相近且無機(jī)械損傷的柿果作為實(shí)驗(yàn)用果，并立即運(yùn)往實(shí)驗(yàn)室。篩選后的火柿先分為兩組，其中一組人工去除萼片，另一組不作處理。再將兩組火柿分別分為對(duì)照（CK）、MA、1-MCP、1-MCP+MA組，每組12 箱，每箱20 個(gè)火柿。在室溫下1-MCP、1-MCP+MA組用1-MCP（劑量為1.0 μL/L）處理24 h，對(duì)照組和MA組不作處理。將所有組放入精準(zhǔn)溫控庫（（-0.5±0.3）℃）預(yù)冷24 h后，在MA組和1-MCP+MA組箱體上安裝氣調(diào)元件，所有箱蓋扣緊置于精準(zhǔn)溫控庫冰溫（（-0.5±0.3）℃）貯藏60 d。每5 d測(cè)定保鮮箱內(nèi)CO、O體積分?jǐn)?shù)，每15 d測(cè)定其他相應(yīng)指標(biāo)。

1.3.2 硬度測(cè)定

每組隨機(jī)抽取6 個(gè)柿果，使用質(zhì)構(gòu)儀在赤道中部直接測(cè)定果皮硬度，而后在赤道中部去皮測(cè)定果肉硬度。質(zhì)構(gòu)儀參數(shù)設(shè)置為探頭直徑5 mm、預(yù)壓速率1.00 mm/s、下壓速率5 mm/s、壓后上行速率1.00 mm/s、停留間隔5 s、樣品受壓變形60%、觸發(fā)力5 g。以每次測(cè)定最大力值為硬度，測(cè)定重復(fù)3 次，取平均值。

1.3.3 纖維素酶、多聚半乳糖醛酸酶和-半乳糖苷酶活力測(cè)定

纖維素酶（cellulase，CX）、多聚半乳糖醛酸酶（polygalactosidase，PG）的提取參照文獻(xiàn)[20]，采用DNS比色法進(jìn)行測(cè)定，單位為mg/（h·g）。

-半乳糖苷酶（-galactosidase，-Gal）的提取和測(cè)定參照文獻(xiàn)[21]，單位為μmol/（30 min·g）。

1.3.4 O、CO體積分?jǐn)?shù)的測(cè)定

每組使用Check point便攜式O/CO測(cè)定儀從箱體兩側(cè)扎入箱內(nèi)，測(cè)定其O、CO體積分?jǐn)?shù)，測(cè)定后使用膠帶封閉針眼，測(cè)定重復(fù)3 次，取平均值。

1.3.5 呼吸強(qiáng)度和乙烯生成速率的測(cè)定

呼吸強(qiáng)度參照文獻(xiàn)[20]采用靜置法測(cè)定。乙烯生成速率參考Both等的方法并略作修改。每組隨機(jī)選擇5 個(gè)柿果裝入1 L的密封容器中，2.5 h后在容器頂部抽取20 mL氣體，采用氣相色譜儀測(cè)定乙烯體積分?jǐn)?shù)。設(shè)置氣相色譜儀烘箱、進(jìn)樣器和檢測(cè)器的溫度分別為110、50、150 ℃，氮?dú)?、氫氣和壓縮空氣的流速分別為50、50、400 mL/min。乙烯生成速率單位為μL/（kg·h）。

1.3.6 VC、總酚、總黃酮水平的測(cè)定

VC含量測(cè)定：每組中隨機(jī)選擇6 個(gè)柿果取其果肉。將5.0 g果肉勻漿后與45 mL 0.4%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）草酸溶液混合，過濾后將1 mL濾液和9 mL 2,6-二氯苯酚吲哚酚鈉鹽溶液進(jìn)行混合，測(cè)定520 nm波長處的吸光度，重復(fù)測(cè)定3 次，取其平均值，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算VC含量?？偡淤|(zhì)量分?jǐn)?shù)采用福林-酚法進(jìn)行測(cè)定，總黃酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)采用比色法測(cè)定。

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

本實(shí)驗(yàn)中每個(gè)指標(biāo)測(cè)定均重復(fù)3 次，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。采用Excel 2010軟件處理數(shù)據(jù)，采用SPSS 26.0軟件進(jìn)行單因素方差分析，通過單因素方差分析中的Kruskal-Wallis 法及鄧肯多重比較檢驗(yàn)組間差異顯著性，＜0.05表示差異顯著。采用Simca 14.1軟件對(duì)火柿于冰溫貯藏期間不同處理方式下的不同品質(zhì)指標(biāo)數(shù)據(jù)進(jìn)行主成分分析（principal component analysis，PCA），采用Origin 2020軟件作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同處理對(duì)火柿冰溫貯藏期間硬度的影響

如圖1A、B所示，在冰溫貯藏條件下，火柿果皮硬度隨貯藏時(shí)間的延長整體呈下降趨勢(shì)，且在貯藏期第15天后對(duì)照組硬度基本均小于其他處理組，下降幅度最大。至冰溫貯藏期結(jié)束，有萼片和無萼片柿果皮硬度均為1-MCP+MA＞1-MCP＞MA＞對(duì)照，其中除有萼片對(duì)照組硬度高于無萼片對(duì)照組以外，其他無萼片各處理組硬度均高于有萼片處理組。如圖1C、D所示，至冰溫貯藏期結(jié)束，有萼片火柿果肉硬度除1-MCP+MA對(duì)比初始硬度無明顯變化外，1-MCP、MA和對(duì)照組均有所下降，其果肉硬度為1-MCP+MA＞1-MCP＞MA＞對(duì)照（圖1C）；無萼片火柿果肉硬度1-MCP處理組對(duì)比初始硬度增高14.1%，1-MCP+MA處理組對(duì)比初始硬度無明顯變化，其果肉硬度為1-MCP＞1-MCP+MA＞MA＞對(duì)照（圖1D），且無萼片柿果實(shí)果肉硬度各處理組均顯著大于有萼片柿果實(shí)（＜0.05）。硬度是果實(shí)軟化的直觀表現(xiàn)，通過其可評(píng)估貯藏條件的適宜程度，綜上說明，去除萼片處理對(duì)比保留萼片可有效延緩火柿硬度的下降，1-MCP+MA聯(lián)合處理在維持柿果硬度方面效果更佳，進(jìn)而有效保護(hù)柿果組織的完整性。

圖1 冰溫貯藏過程中有萼片和無萼片柿果實(shí)硬度的變化Fig. 1 Changes in the firmness of persimmon fruit with and without calyx lobes during freezing point storage

2.2 不同處理對(duì)火柿冰溫貯藏期間細(xì)胞壁降解相關(guān)酶活力的影響

如圖2A～D所示，火柿冰溫貯藏至第45天時(shí)，有、無萼片火柿對(duì)照組CX、PG活力均高于其他處理組，無萼片各處理組CX、PG活力略低于有萼片組，說明當(dāng)貯藏45 d時(shí)，1-MCP、MA及1-MCP+MA處理均對(duì)火柿CX、PG活力起到抑制作用，且結(jié)合去萼片處理效果更佳。從貯藏期的第45天至結(jié)束，有萼片對(duì)照組CX、PG活力急劇下降，貯藏期結(jié)束時(shí)對(duì)比其他處理組最低；而無萼片對(duì)照組CX、PG活力緩慢下降，至貯藏期結(jié)束時(shí)仍高于其他處理組，說明1-MCP、MA及1-MCP+MA在貯藏中后期均能抑制CX、PG活力，且結(jié)合去萼處理對(duì)CX、PG活力的抑制作用優(yōu)于保留萼片處理，其中尤其以無萼片1-MCP處理組效果最佳。如圖2E、F所示，在冰溫貯藏過程中，至第60天時(shí)，1-MCP+MA處理組-Gal活力顯著大于其他各處理組（＜0.05），有萼片MA處理組-Gal活力低于對(duì)照組，有萼片處理對(duì)比去萼片處理抑制效果顯著，說明有萼片結(jié)合MA處理更能抑制-Gal活力。

圖2 冰溫貯藏過程中有萼片和無萼片柿果CX、PG和β-Gal活力的變化Fig. 2 Changes in CX, PG and β-Gal activities of persimmon fruit with and without calyx lobes during freezing point storage

2.3 不同處理對(duì)火柿冰溫貯藏期間箱內(nèi)氣體成分組成的影響

如圖3A、B所示，在冰溫條件下，隨著貯藏時(shí)間的延長，經(jīng)MA和1-MCP+MA處理的有、無萼片柿果在冰溫貯藏過程中環(huán)境內(nèi)CO體積分?jǐn)?shù)均呈上升趨勢(shì)。貯藏結(jié)束時(shí)，有萼片MA處理組柿果貯藏環(huán)境內(nèi)CO體積分?jǐn)?shù)為2.9%，有萼片1-MCP+MA處理組柿果貯藏環(huán)境內(nèi)CO體積分?jǐn)?shù)為2.3%，整個(gè)貯藏期間上升速率為MA＞1-MCP+MA；無萼片MA處理組柿果貯藏環(huán)境內(nèi)CO體積分?jǐn)?shù)為2.3%，無萼片1-MCP+MA處理組柿果貯藏環(huán)境內(nèi)CO體積分?jǐn)?shù)為2.4%，整個(gè)貯藏期間的上升速率為1-MCP+MA＞MA；其他處理的柿果在冰溫貯藏過程中CO體積分?jǐn)?shù)無明顯變化。對(duì)比有萼片處理結(jié)果，無萼片處理箱體內(nèi)的CO體積分?jǐn)?shù)整體較低，表明萼片的保留增強(qiáng)了柿果的呼吸作用，且MA處理通過箱內(nèi)氣體交換能夠維持高CO、低O平衡，使MA結(jié)合保留萼片、冰溫貯藏處理對(duì)維持貯藏環(huán)境中一定CO水平效果顯著。

圖3 冰溫貯藏過程中有萼片和無萼片柿果箱內(nèi)CO2、O2體積分?jǐn)?shù)變化Fig. 3 Changes in CO2 and O2 conconcentration in boxes containing persimmon fruit with and without calyx lobes during freezing point storage

貯藏環(huán)境中的O體積分?jǐn)?shù)變化趨勢(shì)與CO體積分?jǐn)?shù)相反，如圖3C、D所示，隨著貯藏時(shí)間的延長，有萼片火柿的O體積分?jǐn)?shù)下降速率MA＞1-MCP+MA，至貯藏期結(jié)束，MA組O體積分?jǐn)?shù)顯著低于其他處理組（＜0.05）；去萼片結(jié)合MA、1-MCP+MA處理組箱內(nèi)O體積分?jǐn)?shù)下降速率無明顯差異；有、無萼片1-MCP和對(duì)照組均無明顯變化。由此可知，有萼片時(shí)，MA處理對(duì)于貯藏環(huán)境中O體積分?jǐn)?shù)的降低最有效果。

2.4 不同處理對(duì)火柿冰溫貯藏期間呼吸強(qiáng)度和乙烯生成速率的影響

如圖4A、B所示，經(jīng)不同處理火柿的呼吸強(qiáng)度變化趨勢(shì)基本一致，均為前15 d下降，之后上升，至第30天時(shí)達(dá)到呼吸峰值后再下降，第45天后再次上升。有、無萼片柿果在貯藏第30天時(shí)均出現(xiàn)首次呼吸高峰，具有典型的躍變型果實(shí)呼吸特征，其中有、無萼片對(duì)照組呼吸強(qiáng)度峰值均最高，且有萼片對(duì)照組呼吸強(qiáng)度峰值高于無萼片對(duì)照組；處理組在首次呼吸高峰時(shí)的呼吸強(qiáng)度峰值均維持在較低水平，說明1-MCP、MA、1-MCP+MA在冰溫貯藏前期均可抑制火柿呼吸強(qiáng)度，且1-MCP和1-MCP+MA處理顯著低于對(duì)照（＜0.05），抑制呼吸作用效果顯著。至第60天時(shí)，有萼片和無萼片火柿呼吸強(qiáng)度均為MA＞1-MCP+MA＞對(duì)照＞1-MCP，且有萼片組1-MCP處理組呼吸強(qiáng)度為最低，說明有萼片組1-MCP處理在貯藏后期抑制柿果呼吸強(qiáng)度效果最好。

圖4 冰溫貯藏過程中有萼片和無萼片柿果呼吸強(qiáng)度和乙烯生成速率的變化Fig. 4 Changes in respiration intensity and ethylene production rate of persimmon fruit with and without calyx lobes during freezing point storage

乙烯生成速率與呼吸強(qiáng)度呈正相關(guān)，如圖4C、D所示，有、無萼片火柿在第15天時(shí)均達(dá)到乙烯釋放高峰，其中MA＞1-MCP+MA＞對(duì)照＞1-MCP。有萼片各處理組中除1-MCP+MA外，其他處理均出現(xiàn)不同強(qiáng)度的二次乙烯釋放高峰；而無萼片各處理組在貯藏30 d后不再出現(xiàn)乙烯釋放高峰。此外，在第15天火柿達(dá)到乙烯釋放高峰時(shí)，在有、無萼片的樣品中MA處理組均高于其他處理組，且無萼片MA處理樣品明顯高于有萼片MA處理樣品，推測(cè)是因?yàn)橘A藏環(huán)境內(nèi)高CO體積分?jǐn)?shù)使得乙烯生成速率短暫升高，萼片可進(jìn)行呼吸作用，保留萼片結(jié)合MA處理使得箱內(nèi)CO體積分?jǐn)?shù)較高，而高CO體積分?jǐn)?shù)可抑制乙烯釋放，進(jìn)而使無萼片MA處理組在達(dá)到乙烯釋放高峰時(shí)的峰值顯著高于其他處理組（＜0.05）。綜上說明1-MCP結(jié)合去萼片、冰溫貯藏可較好地抑制火柿的乙烯生成速率，降低貯藏環(huán)境內(nèi)乙烯生成速率，從而延緩火柿的成熟軟化進(jìn)程。

2.5 不同處理對(duì)火柿冰溫貯藏期間VC、總酚、總黃酮水平的影響

如圖5A、B所示，在冰溫貯藏過程中，至第60天時(shí)，有萼片和無萼片處理柿果VC含量均為1-MCP+MA＞1-MCP＞MA＞對(duì)照，且1-MCP+MA、1-MCP處理組VC含量均顯著高于對(duì)照；但對(duì)比初始VC含量，有萼片柿果各處理組略有降低，而無萼片柿果各處理組均有所增加。說明1-MCP、MA、1-MCP+MA處理均可減少火柿VC的損失，其中1-MCP+MA、1-MCP處理效果最佳，結(jié)合去萼片處理，能促進(jìn)火柿VC含量增加，阻止自由基的積累，延緩柿果衰老。如圖5C、D所示，在冰溫貯藏至第60天時(shí)，各處理組總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)均有所降低，但處理組的總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)均高于對(duì)照組，其中去萼片的1-MCP+MA處理組下降幅度最小，顯著高于對(duì)照組（＜0.05），說明該處理能在貯藏中后期有效阻止火柿總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)的降低，控制果肉褐變的發(fā)生，保持火柿營養(yǎng)品質(zhì)。如圖5E、F所示，在冰溫貯藏過程中，至第60天時(shí)，柿果總黃酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)均有所下降，但各處理組的總黃酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)均顯著高于對(duì)照（＜0.05），其中有萼片柿果1-MCP+MA＞1-MCP＞MA＞對(duì)照，無萼片柿果1-MCP＞MA＞1-MCP+MA＞對(duì)照，說明1-MCP、MA、1-MCP+MA處理均可減少火柿總黃酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)的降低。綜上，至冰溫貯藏結(jié)束，有、無萼片對(duì)照組VC、總酚、總黃酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)總為最低，說明1-MCP、MA、1-MCP+MA處理在貯藏中后期均能降低火柿中VC、總酚、總黃酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)的損耗，尤其以1-MCP+MA效果最佳。

圖5 冰溫貯藏過程中有萼片和無萼片柿果VC、總酚和總黃酮水平的變化Fig. 5 Changes in contents of VC, total phenols and total flavonoids in persimmon fruit with and without calyx lobes during freezing point storage

2.6 不同條件處理火柿冰溫貯藏期間品質(zhì)指標(biāo)的PCA結(jié)果

為綜合分析各指標(biāo)與處理?xiàng)l件之間的關(guān)系，引入PCA-X可視化與量化不同指標(biāo)、處理?xiàng)l件之間的相關(guān)性。如圖6A所示，共提取2 個(gè)主成分（principal component，PC）（特征值＞1），其中累計(jì)方差貢獻(xiàn)為0.589，能反映火柿貯藏期間品質(zhì)變化。為更加直觀表現(xiàn)不同指標(biāo)在不同PC下的表現(xiàn)以及與不同處理方式之間的相關(guān)性繪制Biplot雙標(biāo)圖，以火柿在冰溫貯藏期間不同處理方式下的不同品質(zhì)指標(biāo)變化為分析對(duì)象，對(duì)其進(jìn)行相關(guān)性分析，不同處理方式樣品的位置越接近，表示其具有更相近的貯藏品質(zhì)；不同指標(biāo)與處理方式的位置越接近，表示其相關(guān)性越高。如圖6B所示，保留萼片處理與去萼片之間有較明顯的區(qū)域分布差異，其中尤其以去萼片結(jié)合1-MCP+MA、MA處理樣品的位置與有萼片各處理樣品的位置距離最遠(yuǎn)，說明去萼片結(jié)合1-MCP+MA、MA處理對(duì)比對(duì)照所引起的貯藏品質(zhì)變化效果明顯。結(jié)合各指標(biāo)在圖中的位置可知，去萼片處理與柿果VC含量、果肉硬度、O體積分?jǐn)?shù)、CO體積分?jǐn)?shù)、乙烯生成速率、總黃酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)及CX、PG活力的相關(guān)性更高，而保留萼片處理與柿果呼吸強(qiáng)度、果皮硬度、總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)、-Gal活力的相關(guān)性更高。

圖6 不同條件處理火柿冰溫貯藏期間品質(zhì)指標(biāo)的PCA-X載荷圖（A）及其Biplot雙標(biāo)圖（B）Fig. 6 Principal component analysis-X loading plots of quality indicators in persimmon fruit under different treatment conditions during freezing point storage (A) and their corresponding biplot plots (B)

3 討 論

柿果實(shí)采后軟化是一個(gè)復(fù)雜有序的過程，包括營養(yǎng)成分含量的變化、細(xì)胞壁降解相關(guān)酶活力的上升、呼吸作用的增強(qiáng)、乙烯釋放的急劇增加等，這些因素相互影響。果萼是柿果實(shí)的氣體交換器官，同時(shí)也是環(huán)境脅迫的感知器官，比果實(shí)的其他部位對(duì)脅迫因素更加敏感。1-MCP和MA處理已經(jīng)成為延長果蔬保鮮期及提高貯藏品質(zhì)的有效措施，但去除萼片結(jié)合1-MCP或MA處理對(duì)火柿的軟化及貯藏品質(zhì)的影響尚不明確。在本研究中，綜合實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，去除萼片結(jié)合1-MCP、1-MCP+MA處理火柿相對(duì)于保留萼片的火柿，延緩軟化和提高貯藏品質(zhì)效果更好。呼吸強(qiáng)度往往與貯藏環(huán)境內(nèi)O、CO體積分?jǐn)?shù)、乙烯釋放量密切相關(guān)，是衡量果實(shí)生理代謝強(qiáng)弱的重要指標(biāo)。乙烯是調(diào)控果實(shí)成熟、衰老的植物激素，通過與質(zhì)膜上的受體結(jié)合啟動(dòng)下游信號(hào)傳導(dǎo)，引起一系列生理生化反應(yīng)，如提高果實(shí)呼吸強(qiáng)度、促進(jìn)果實(shí)內(nèi)容物質(zhì)分解或轉(zhuǎn)化、加劇果實(shí)軟化等。在本研究中，MA結(jié)合冰溫貯藏能維持火柿貯藏環(huán)境一定的CO體積分?jǐn)?shù)，并降低O體積分?jǐn)?shù)，建立平衡條件下的適宜氣體組成，抑制柿果呼吸作用，且有萼片處理效果優(yōu)于去萼片處理（圖3），可能是因?yàn)槿コ嗥钄嗔嘶鹗镣ㄟ^萼片呼吸作用產(chǎn)生CO的途徑。相同貯藏時(shí)間下，有、無萼片的1-MCP+MA處理組貯藏環(huán)境中體積分?jǐn)?shù)無明顯差異；相同貯藏時(shí)間有萼片1-MCP+MA組貯藏環(huán)境中CO體積分?jǐn)?shù)明顯低于有萼片MA組，去萼片1- MCP+MA組貯藏環(huán)境中CO體積分?jǐn)?shù)總體上低于去萼片MA組（圖3A、B），而1-MCP結(jié)合冰溫貯藏可顯著降低采后火柿的呼吸強(qiáng)度和乙烯生成速率（＜0.05）（圖4），說明1-MCP和去萼片處理同樣具有抑制柿果呼吸作用、降低乙烯生成速率的效果，主要是因?yàn)?-MCP在果實(shí)貯藏成熟過程中通過抑制乙烯受體的感知來阻礙其與受體的正常結(jié)合，并強(qiáng)烈競(jìng)爭(zhēng)乙烯受體，通過金屬原子與乙烯受體緊密結(jié)合，使受體保持鈍化狀態(tài)，抑制乙烯釋放，且本實(shí)驗(yàn)均在冰溫條件下進(jìn)行，冰溫貯藏措施通過減緩柿果代謝活性，對(duì)乙烯釋放同樣起到了抑制作用。此外，本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)有、無萼片火柿在第15天時(shí)均達(dá)到乙烯釋放高峰（圖4C、D），出現(xiàn)在首次呼吸強(qiáng)度高峰（貯藏30 d）之前，推測(cè)是因?yàn)橘A藏環(huán)境中高CO體積分?jǐn)?shù)使乙烯生成速率暫時(shí)升高。不同果實(shí)的呼吸強(qiáng)度高峰與乙烯釋放高峰出現(xiàn)時(shí)間的先后次序不同，在本實(shí)驗(yàn)中，火柿的乙烯釋放高峰先于呼吸強(qiáng)度高峰，且通過對(duì)比發(fā)現(xiàn)，不同處理方式僅影響柿果呼吸強(qiáng)度與乙烯生成速率，并不影響呼吸強(qiáng)度高峰與乙烯釋放高峰的出現(xiàn)時(shí)間。有萼片各處理組中除1-MCP+MA外，其他處理均出現(xiàn)不同程度的二次乙烯釋放高峰（圖4C），而去萼片處理在30 d后不再出現(xiàn)乙烯釋放高峰（圖4D），可能是因?yàn)椴珊笫凉幸蚁┑纳锖铣勺畛醢l(fā)生在果萼中，而去萼片處理使柿果失去了萼片參與的呼吸作用，并且無法將萼片中產(chǎn)生的乙烯擴(kuò)散到其他組織并產(chǎn)生二次乙烯釋放高峰。

果實(shí)呼吸強(qiáng)度和乙烯生成與VC、總酚、總黃酮的合成和降解密切相關(guān)。采后生理代謝受多種因素影響，且在貯藏期間個(gè)體差異較大，因此本實(shí)驗(yàn)火柿中的VC、總酚、總黃酮水平變化有一定的波動(dòng)性。但仍可看出1-MCP、MA、1-MCP+MA結(jié)合冰溫處理均有助于減少火柿在貯藏期間VC、總酚、總黃酮的損失，尤其在貯藏后期，1-MCP+MA處理總體上效果最為顯著（＜0.05），且去萼片處理效果整體上優(yōu)于保留萼片。

柿采后果實(shí)軟化是細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)、組分的改變以及內(nèi)部多糖降解的結(jié)果，其中細(xì)胞壁降解酶（CX、PG、果膠甲酯酶和-Gal）的作用是導(dǎo)致果實(shí)軟化的主要原因。一般細(xì)胞壁降解相關(guān)酶的活力越高，表明果實(shí)硬度越低，軟化程度越高，越不利于貯藏。在經(jīng)過1-MCP、MA、1-MCP+MA處理后，各處理組火柿硬度均高于對(duì)照組（圖1），這與在梨、蘋果、桃、櫻桃等果實(shí)得出的結(jié)論一致，其中尤其以1-MCP、1-MCP+MA結(jié)合去萼片處理效果顯著。此外，本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)1-MCP處理組果肉硬度對(duì)比初始硬度明顯增高，出現(xiàn)非正常硬化，推測(cè)是否由于去除萼片而導(dǎo)致缺氧引起，其生理機(jī)制有待進(jìn)一步研究。對(duì)比CX、PG和-Gal活力實(shí)驗(yàn)結(jié)果（圖2），發(fā)現(xiàn)隨著CX、PG活力的降低，火柿果皮、果肉硬度下降幅度變小，CX、PG活力和柿果硬度呈負(fù)相關(guān)。此外，雖然至第60天時(shí)對(duì)照組CX、PG活力對(duì)比其他處理最低，但硬度依舊最低，柿果軟化最嚴(yán)重。本實(shí)驗(yàn)證明1-MCP處理火柿可通過抑制CX、PG活力來維持柿子的硬度，且去萼片處理對(duì)抑制CX、PG活力效果優(yōu)于保留萼片，推測(cè)是由于去萼片處理降低火柿總體呼吸強(qiáng)度，抑制其內(nèi)部代謝。有研究報(bào)道采后柿果會(huì)因?yàn)樽陨砗粑饔枚?，發(fā)生水分脅迫，進(jìn)而誘導(dǎo)萼片中基因的表達(dá)并誘導(dǎo)產(chǎn)生ABA，而ABA誘導(dǎo)乙烯生物合成酶基因和乙烯生物合成氧化酶基因表達(dá)，促進(jìn)乙烯的產(chǎn)生并擴(kuò)散至果肉組織中，作為次級(jí)信號(hào)激活乙烯自我催化，導(dǎo)致乙烯釋放激增，因此去萼片處理對(duì)CX、PG活力的抑制起到了協(xié)同作用。-Gal主要作用于水果軟化早期的細(xì)胞壁多糖，使細(xì)胞壁發(fā)生膨脹進(jìn)而加速果實(shí)軟化。在本實(shí)驗(yàn)貯藏結(jié)束時(shí)，MA處理組-Gal活力均低于其他處理組（圖2E、F），說明MA處理可抑制-Gal活力，而1-MCP處理對(duì)-Gal活力無明顯抑制作用，推測(cè)與本實(shí)驗(yàn)1-MCP劑量不足以明顯影響-Gal活力有關(guān)，有待進(jìn)一步研究。有萼片火柿中PG、-Gal活力整體上大于去萼片火柿，可能是因?yàn)槿ポ嗥幚碛绊懠?xì)胞中多糖的合成，而PG參與降解細(xì)胞多糖中的多聚半乳糖醛酸，-Gal參與降解多聚醛酸，萼片的去除使PG、-Gal部分代謝通路受到影響，進(jìn)而導(dǎo)致酶活力降低。

4 結(jié) 論

本實(shí)驗(yàn)研究1-MCP、MA、1-MCP+MA處理對(duì)有、無萼片火柿采后冰溫貯藏期間軟化及相關(guān)生理指標(biāo)的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，1-MCP、MA及1-MCP+MA均可不同程度降低火柿軟化速度，而去除萼片預(yù)處理有效延緩了火柿二次乙烯生成高峰的出現(xiàn)，且聯(lián)合1-MCP顯著延緩果肉硬度下降，抑制CX、PG活力，降低呼吸強(qiáng)度、乙烯生成速率以及總黃酮含量的下降，從而延緩了火柿軟化進(jìn)程，提高了貯藏品質(zhì)。