林春波，吳 鵬，唐 旭，林錫煌，徐長安

(1.福建農(nóng)林大學(xué)，福建 福州 350002; 2.自然資源部第三海洋研究所, 福建 廈門 361005)

魚肝油主要含有脂溶性維生素A、D3以及DHA、EPA等多種ω-3多不飽和脂類。近年來，越來越多的研究顯示，魚肝油還具有更加廣泛的臨床應(yīng)用，如抗炎、軟化組織血管、改善情緒和認知功能、降低II型糖尿病風(fēng)險、保護骨健康、增強生殖系統(tǒng)功能、營養(yǎng)皮膚、降低癌癥風(fēng)險、保護視力、促進自然減肥等功能[1]。純天然未經(jīng)深度加工的魚肝油含有其他天然成分和有利于人體吸收的活性物質(zhì)，能促使人體更好地吸收、利用、代謝天然維生素。

我國魚肝油市場潛力巨大，但目前行業(yè)內(nèi)還存在一些亟待解決的問題，比較突出的問題就是天然魚肝脂肪油來源緊缺。我國目前所使用的《2015版藥典》規(guī)定魚肝油來源于鮫類動物肝臟。但由于可捕撈的鯊魚種類及數(shù)量日益減少，且多數(shù)屬于保護種，導(dǎo)致可用原料日益萎縮[2]。因此尋找鯊魚肝脂肪油天然替代來源十分重要。

鰩魚是板腮類多種軟骨魚的統(tǒng)稱，屬于鰩形目，主要分鰩科、魟科和鲼科，是鯊魚的近親[3]。近年來，我國鰩魚的捕撈量逐年增加，已經(jīng)成為主要出口水產(chǎn)品。國內(nèi)現(xiàn)階段水產(chǎn)加工企業(yè)在加工鰩魚的過程中，會產(chǎn)生高比例的肝臟副產(chǎn)物，其中肝臟占比超過10%[4]，是經(jīng)濟易得的魚肝油加工原料。但由于脂質(zhì)成份不明確和技術(shù)水平的限制，使得國內(nèi)企業(yè)在鰩魚肝臟高值化利用領(lǐng)域尚處于空白[5]。另一方面，鰩魚加工副產(chǎn)物富含多不飽和脂肪酸，容易氧化酸敗從而變質(zhì)。如不及時利用處理，會造成資源浪費、環(huán)境污染[6]。本研究建立了鰩魚肝油的提取及精煉工藝并分析了理化性質(zhì)、脂肪酸組成，為合理開發(fā)鰩魚加工副產(chǎn)物資源、降低環(huán)境污染、擴充天然魚肝脂肪油來源提供科學(xué)依據(jù)[7]。

1 材料和方法

1.1 實驗材料

鰩魚肝由秦皇島市新港水產(chǎn)有限公司提供，置于-20 ℃冰箱凍藏。鯊魚肝油及鱈魚肝油均由國藥控股星鯊制藥(廈門)有限公司提供。混合脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品與單一脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品，均購于Sigma公司。本實驗所用試劑如氫氧化鈉(NaOH)、磷酸、檸檬酸、活性白土、鹽酸(HCl)、焦性沒食子酸(C6H6O3)、2,6-二叔丁基對甲酚、甲醇(CH3OH, 色譜純)、石油醚、三氟化硼甲醇溶液(濃度14%)、正己烷(色譜純)、無水硫酸鈉等，除另有說明，均為國產(chǎn)分析純，購于廈門市綠茵試劑玻儀有限公司。

1.2 主要儀器和設(shè)備

GCMS-QP2010型氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(SHIMADZU，日本島津)，分析天平[精確度0.000 1 g，賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司]，N-1100型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海愛朗儀器有限公司)，TG16-WS型離心機(長沙維爾康湘鷹離心機有限公司)，KQ-300E型超聲波清洗機(昆山市超聲儀器有限公司)，JMLB-50型膠體磨(上?？苿跈C械設(shè)備有限公司)，DF-101S型集熱式恒溫磁力攪拌器。

1.2 實驗方法

1.2.1 粗鰩魚肝油的提取 粗魚油提取工藝在實際生產(chǎn)中常用堿法和酶法。堿法工藝簡單、提取率較高，但廢液處理會增加成本且造成環(huán)境污染。酶法提取條件溫和，但蛋白酶添加量高，一般添加量在原料的2%(質(zhì)量分數(shù))以上[8-9]，且需加入較多NaOH來調(diào)節(jié)pH，在分離魚油時也存在油水兩相乳化的問題，酶解后廢料內(nèi)蛋白質(zhì)含量很低，無法作為飼料添加劑再利用。除此之外，酶解法還會使魚肝油帶有異味，為后期除臭增加工作量[10]。本研究探索了一種新方法，利用“冷凍-解凍”的方法提取粗油，即利用凍結(jié)、解凍加之物理粉碎，同時超聲輔助提取的方法，原理是利用溫度場的循環(huán)變化使乳狀液中的油水兩相發(fā)生反復(fù)相變，破壞其乳狀的液體系，從而使得油脂從乳狀液中分離出來。此方法與上述堿法和酶法相比，無任何添加物，既降低成本，又無多余雜質(zhì)殘留，也無多余反應(yīng)，不會造成環(huán)境污染。

理論魚肝油含量為鰩魚肝臟的粗脂肪含量，利用索氏提取法進行測定。精密稱取5～10 g鰩魚肝,研細，全部移入濾紙筒內(nèi)。將濾紙筒放入脂肪萃取器的樣品室內(nèi)，連接已干燥至恒重的收集瓶，從萃取器冷凝管上端加入無水乙醚或石油醚至瓶內(nèi)容積的2/3處，水浴加熱，使乙醚或石油醚不斷回流提取6～12 h。取下收集瓶，回收乙醚或石油醚，待收集瓶內(nèi)乙醚剩1～2 mL時水浴蒸干，再于95～105 ℃干燥20 min，放干燥器內(nèi)冷卻0.5 h后稱量M總。理論魚肝油含量=[(M總-M瓶)/M樣]×100%。

取-18 ℃凍藏的鰩魚肝1 kg，以超聲輔助自然解凍，用膠體磨粉碎后裝入離心瓶后放入超聲鍋，在40 kHz下超聲處理2 h，目的是利用超聲的功率特性和空化作用，加速水油分離；靜置12 h后將其置于大容量離心機中，在轉(zhuǎn)速10 000 r/min、25 ℃下離心10 min，分離得上層粗魚肝油，計算提取率。粗魚肝油提取率=(提取的粗魚肝油質(zhì)量/理論魚肝油質(zhì)量)×100%。

1.2.2 粗鰩魚肝油精煉 ①脫膠。準(zhǔn)確稱取100 g粗鰩魚肝油于錐形瓶內(nèi)，加入5 g配制好的脫膠劑(85%磷酸和40%檸檬酸, 體積比為1.5∶1.0)，50 ℃水浴加熱攪拌30 min后，10 000 r/min離心10 min (24 ℃)[11]，將上層脫膠魚肝油移置干凈錐形瓶內(nèi)。稱量并計算提取率。

②脫酸。以NaOH添加量(以油重的百分比計，下同)、加熱時間、加熱溫度為主要影響因素，魚肝油提取率(%)為評價指標(biāo)，采用3因素1水平響應(yīng)面法對魚肝油脫酸工藝進行優(yōu)化。為了綜合多指標(biāo)考察魚肝油脫酸工藝，首先對魚肝油脫酸工藝影響較大的單因素(NaOH添加量、加熱時間、加熱溫度)進行考察，確定優(yōu)化范圍。將脫膠魚肝油準(zhǔn)確稱量于干凈錐形瓶內(nèi)，在其他處理條件一致的情況下，分別設(shè)置合適的NaOH添加量、加熱時間、加熱溫度，以脫酸魚肝油提取率為指標(biāo)[12]，考察其對魚肝油脫酸效果的影響。

③脫色。將脫酸魚肝油準(zhǔn)確稱量于干凈錐形瓶內(nèi)，加入一定量的活性白土在70 ℃下脫色20 min，然后10 000 r/min、24 ℃下離心10 min，獲得上層清油，即脫色魚肝油。稱量并計錄數(shù)據(jù)。

④脫臭。將脫膠魚肝油準(zhǔn)確稱量于干凈蒸餾瓶內(nèi)，40 ℃，60 r/min下減壓蒸餾不等時間進行脫臭處理[13]，獲得脫臭魚肝油。稱量并計錄數(shù)據(jù)。

1.2.3 理化指標(biāo)的檢測 水分及揮發(fā)物含量按照《動植物油脂水分及揮發(fā)物的測定》[14]中電熱干燥箱法測定。酸值按照《食品中酸價的測定》[15]中冷溶劑指示劑滴定法測定。碘值按照《動植物油脂碘值的測定》[16]中的方法測定。過氧化值按照《食品中過氧化值的測定》[17]中的滴定法測定。不皂化物按照《動植物油脂不皂化物測定》[18]中己烷提取法測定。

1.2.4 脂肪酸組成分析 ①樣品前處理。取0.08 g魚肝油于15 mL離心管中，加入2 mL0.5 mol/L的KOH-CH3OH溶液，在65 ℃下皂化30 min，然后冷卻至室溫。加入20滴0.5 mol/L的HCl調(diào)節(jié)pH，使pH小于2，再加入4 mL的BF3·MeOH溶液，煮沸3 min，進行甲酯化[19]。冷卻至室溫后加入4 mL飽和NaCl溶液，用2 mL正己烷萃取，有機相用無水硫酸鈉干燥，用0.22 μm的有機濾膜過濾所得樣品后，使用GC-MS測定脂肪酸相對含量[20]。

②氣相色譜條件。色譜柱：Rtx-5MS (60 m×0.25 mm， 0.25 μm)；載氣：高純 He；分流進樣；進樣量1 μL；檢測溫度：280 ℃；程序升溫：起始柱溫設(shè)定為60 ℃[21]，以15 ℃/min升至160 ℃，保持1 min，再以5 ℃/min升至220 ℃，保持10 min；最后以5 ℃/min升至280 ℃，保持5 min。

2 結(jié)果與討論

2.1 鰩魚肝油精煉工藝參數(shù)的確定

2.1.1 粗鰩魚脂肪油提取 凍融法的原理是利用溫度場的循環(huán)變化，使魚肝油中的油水兩相發(fā)生反復(fù)相變，破壞其乳化體系，從魚肝中分離出油脂。本研究利用凍融法得到的粗油，既無任何添加物，又無多余雜質(zhì)殘留，且提取率(表1)高于臧麗芹等(2013)利用酶解法得到的粗油的提取率(86%)[22]，具有極大的應(yīng)用價值。

表1 凍融法提取粗鰩魚肝油的提取率

2.1.2 脫酸工藝參數(shù)確定 粗鰩魚肝油的脫酸主要是游離脂肪酸與足量的NaOH發(fā)生中和反應(yīng)，使游離脂肪酸皂化[23]。為了降低精煉油的顏色和確保去除痕量成分，須向體系中加入過量NaOH，通過離心和水洗可去除皂和磷脂。實驗發(fā)現(xiàn)NaOH的添加量是影響脫酸效果的主要原因，溫度及加熱時間也有一定影響。為確定最優(yōu)工藝，分別考察了NaOH添加量、加熱溫度及加熱時間3個因素對脫酸提取率和酸值的影響。單因素實驗結(jié)果及酸值測定結(jié)果詳見圖1。

圖1 各因素對提取率及酸值的影響Fig. 1 Influences of different factors on extraction yield and acid value根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)《魚油》[24]可知，對于精制魚油，酸值≤1為一級魚油，酸值≤3為二級魚油。

①NaOH添加量的影響。固定加熱溫度為85 ℃、加熱時間為20 min，考察不同NaOH添加量對脫酸魚肝油提取率和酸值的影響。準(zhǔn)確稱量40 g脫膠魚油，分別加入8、10、12、14 g NaOH進行脫酸。實驗結(jié)果如圖1(a)所示，魚肝油提取率隨著NaOH添加量的增加呈現(xiàn)下降的趨勢，下降趨勢為一個百分點左右，表明NaOH添加量對提取率的影響較大。酸值隨著NaOH添加量的增加也呈現(xiàn)下降趨勢。

②加熱溫度的影響。固定NaOH添加量為20.0%、加熱時間為20 min，考察不同加熱溫度對脫酸魚肝油提取率和酸值的影響。準(zhǔn)確稱量40 g脫膠魚油，分別在65、70、75、80、85 ℃下進行脫酸。實驗結(jié)果如圖1(b)所示，魚肝油提取率隨著溫度的升高呈現(xiàn)極小的下降趨勢，表明加熱溫度對提取率影響不大。酸值隨著溫度的升高呈現(xiàn)下降趨勢。

③加熱時間的影響。固定加熱溫度為85 ℃、NaOH添加量為20.0%，考察不同加熱時間對脫酸魚肝油提取率和酸值的影響。準(zhǔn)確稱量40 g脫膠魚油，分別加熱15、20、25、30 min進行脫酸。實驗結(jié)果如圖1(c)所示，魚肝油提取率隨著加熱時間增加呈現(xiàn)下降趨勢，但變化極小，表明加熱時間對提取率的影響也較小。酸值隨著加熱時間增加也呈現(xiàn)下降趨勢。

④響應(yīng)面實驗方案設(shè)計。在單因素考察的基礎(chǔ)上，以加熱溫度(℃，A)、加熱時間(min，B)、NaOH添加量(%，C)3個因素作自變量，以脫酸魚肝油提取率(%，Y)作因變量，采用響應(yīng)面法優(yōu)化最佳提取工藝。實驗設(shè)計如表2，共17組，每組分別稱取脫膠魚肝油約36 g，實驗結(jié)束后稱量計算提取率。

表2 脫酸魚肝油提取率響應(yīng)面實驗數(shù)據(jù)

⑤模型擬合和提取工藝優(yōu)化。采用Design-Expert 8.0.6對魚肝油脫酸工藝實驗結(jié)果進行多元回歸擬合。經(jīng)過運算后得到魚肝油脫酸提取率(%，Y)、對加熱溫度(℃，A)、加熱時間(min，B)、NaOH添加量(%，C)的模型，其擬合回歸模擬方程如下，其回歸模型的方差分析見表3。Y(提取率)=0.94-7.639×10-3A-8.736×10-3B-0.030C+9.395×10-5A·B+9.197×10-4A·C-1.878×10-3B·C-9.772×10-4A2+1.596×10-3B2+0.013C2。

表3 回歸模型的方差分析結(jié)果

圖2顯示了各因素對魚肝油提取率交互作用的響應(yīng)面實驗結(jié)果。根據(jù)圖2(a)可知，升高溫度對提取率影響不明顯，且加熱時間與加熱溫度相互作用不緊密，因此二者相互不顯著。圖2(b)中，升高溫度對提取率影響不明顯，但NaOH添加量對提取率的影響較大。同時可見二者具有一定的相互作用。由圖2(c)可知，延長加熱時間對提取率影響不明顯，但NaOH添加量對提取率的影響很大，且二者具有一定的相互作用。

利用Design-Expert 8.0.6軟件對上述實驗結(jié)果進行優(yōu)化，以Y最大化為原則，得到優(yōu)化的最佳脫酸工藝條件為：NaOH添加量為20.0%(質(zhì)量分數(shù))，溫度為69.78 ℃，時間為15.72 min。但結(jié)合實際操作的可行性，同時考慮到酸值不僅需要滿足一級魚油標(biāo)準(zhǔn)，也需使游離脂肪酸盡可能去除，由單因素實驗可以得出，加熱溫度為75 ℃時游離脂肪酸基本被完全去除，故確定最優(yōu)工藝條件為：NaOH添加量20.0%(質(zhì)量分數(shù))，加熱溫度75 ℃，加熱時間20 min，預(yù)測提取率為70.16%。用以上條件參數(shù)進行平行實驗3次，平均提取率為70.08%，相對誤差值為0.11%。

2.1.3 脫色工藝參數(shù)的確定 脫色過程是破壞或吸附一級氧化產(chǎn)物，色素和痕量的金屬離子均可以使用活性白土加以去除[25]?；钚园淄撂砑恿?以油重的百分比計，下同)是影響脫色效果的重要原因，因此本研究重點考察了活性白土不同添加量對魚肝油的脫色效果、損失率及提取率的影響，從而確定脫色工藝參數(shù)，詳見表4。

表4 活性白土添加量對顏色、損失率及提取率的影響

圖2 各因素對鰩魚肝油提取率交互作用的響應(yīng)面圖Fig. 2 Response surface diagram of the interaction of various factors on the extraction yield of skate liver oil

由表4可知，當(dāng)活性白土添加量為6%與5%時，得到的脫色魚油較渾濁；當(dāng)活性白土添加量為10%與8%時，得到的脫色魚油均為澄清。隨活性白土添加量的增多，損失率增加。再結(jié)合表1，發(fā)現(xiàn)活性白土添加量為8%時的損失率低且提取率較高，故確定脫色最佳工藝參數(shù)為活性白土添加量為8%。

2.1.3 脫臭工藝參數(shù)的確定 脫臭主要是在高真空條件下，經(jīng)過蒸餾去除油中微量的脂肪酸、醛類、酮類和其他揮發(fā)性化合物，得到口感及氣味溫和的油[26]。根據(jù)文獻資料，本研究固定蒸餾溫度為40 ℃，主要考察蒸餾時間對脫臭的影響，詳見表5。

表5 蒸餾時間對顏色、氣味及提取率的影響

由表5可知，當(dāng)蒸餾時間為20 min及30 min時，雖提取率高，但腥臭味較大，當(dāng)蒸餾時間為60 min時，提取率較高且腥臭味很小，故確定脫臭最佳工藝參數(shù)為在40 ℃、60 r/min下減壓蒸餾60 min。

2.2 精煉鰩魚肝脂肪油的理化性質(zhì)

常規(guī)生產(chǎn)魚肝油過程中得到的粗魚肝油含有不同量的非甘油酯共存成分(如蛋白質(zhì)、磷脂、色素等)[27]。這些雜質(zhì)通過脫膠、脫酸、脫色、脫臭等精煉工藝進行脫除，得到酸值、過氧化值等理化指標(biāo)合格的精制魚肝油(表6)。

表6 精制鰩魚肝油的理化性質(zhì)及與標(biāo)準(zhǔn)的比較

由表6可知，精煉后的鰩魚肝油的理化性質(zhì)均滿足一級魚油標(biāo)準(zhǔn)，其中不溶性雜質(zhì)、不皂化物、酸值、過氧化值以及茴香胺值均遠遠優(yōu)于一級魚油標(biāo)準(zhǔn)的質(zhì)量要求。由此可知，本研究所采用的精煉方法能獲得品質(zhì)較高的魚肝油，獲得的精煉魚肝油顏色為金黃、澄清，略有魚腥味。

2.3 不同來源天然魚肝油的脂肪酸組成分析

魚肝油功能多樣歸因于其豐富的活性物質(zhì)。脂肪酸是魚肝油的主要功能成分，各種動植物油脂中脂肪酸組成及含量均存在較明顯的差異，尤其是特征脂肪酸更是如此[28]。確定不同來源的天然魚肝油脂肪酸組成及其相對含量，能為擴大天然魚肝油來源種類提供理論依據(jù)。圖3為鱈魚肝油、鯊魚肝油、精制鰩魚肝油、粗鰩魚肝油的脂肪酸組成圖譜。對照標(biāo)準(zhǔn)品的目標(biāo)離子、參考離子以及保留時間進行逐個定性，再利用面積歸一法計算每種脂肪酸的相對含量，結(jié)果如表7所示。

圖3 四種魚肝油脂肪酸組成圖譜Fig. 3 Fatty acid composition map of four fish liver oils

表7 四種魚肝油的脂肪酸組成分析

續(xù)表

由表7可知，幾種魚肝油均含有C14～C22脂肪酸23種，其中有飽和脂肪酸5種，單不飽和脂肪酸7種，多不飽和脂肪酸11種。對比粗鰩魚肝油與精制鰩魚肝油的脂肪酸成分，發(fā)現(xiàn)粗鰩魚肝油的不飽和脂肪酸占88.24%，其中多不飽和脂肪酸占45.10%。較為重要的多不飽和脂肪酸EPA和DHA的含量也較高，分別為10.17%與13.61%。精制鰩魚肝油的脂肪酸組成變化不大，不飽和脂肪酸占87.62%，其中多不飽和脂肪酸占44.48%。EPA和DHA的含量也基本無改變，分別為8.65%與15.04%。這說明鰩魚肝油精煉過程對其脂肪酸組成影響較小。

對比鱈魚肝油、鯊魚肝油以及精制和粗鰩魚肝油的脂肪酸組成數(shù)據(jù)(表7)，鱈魚肝油中DHA和EPA含量分別為11.09%和8.78%，鯊魚肝油中DHA和EPA含量分別為12.10%和2.74%，由此可知，本工藝生產(chǎn)的鰩魚肝油中的EPA含量及DHA含量均較高。

2.4 討論

采用凍融法提取鰩魚肝粗油與臧麗芹等利用酶解法提取鰩魚肝油[22]相比，凍融法無任何添加物，成本低，無多余反應(yīng)，無雜質(zhì)殘留，且提取率高達90%，高于酶解法的86%，具有極大的應(yīng)用價值。由脫酸實驗可知酸值在某些特定條件下變化較大：當(dāng)改變NaOH添加量時，加入的堿與游離脂肪酸反應(yīng),隨著NaOH添加量的增加，油脂中的游離脂肪酸更多地被清除，從而導(dǎo)致酸值降低。加熱溫度由75 ℃變?yōu)?0 ℃時酸值下降最為明顯，其中的原因可能是隨溫度上升，分子運動加速，分子間的碰撞幾率增加[5]。溫度繼續(xù)升高，變化不大，由此可推測在75～80 ℃之間堿煉反應(yīng)速度達到最佳，使油脂中的游離脂肪酸在相同時間內(nèi)被較多地清除。加熱時間延長一倍，對酸值的影響在1.0～1.5倍之間，其原因可能是隨著加熱時間的增加，加入的堿與魚肝油中游離脂肪酸進一步反應(yīng)，導(dǎo)致酸值降低。而在25～30 min酸值變化極小，可能是魚肝油中游離脂肪酸基本已反應(yīng)完全。對精煉鰩魚肝油進行檢測分析，同時與粗鰩魚肝油、鱈魚肝油以及鯊魚肝油進行對比，發(fā)現(xiàn)精煉后的鰩魚肝油呈澄清、金黃色，稍有魚腥味，各項理化指標(biāo)均達到了一級魚油標(biāo)準(zhǔn)；精煉前后脂肪酸組成基本沒有太大變化，DHA與EPA含量均較高。但市售鱈魚肝油與鯊魚肝油顏色會更淺一些，因此在鰩魚肝油脫色方面還需要進一步研究。

3 結(jié)論

本研究采用凍融法提取鰩魚肝粗油，無添加物，無雜質(zhì)殘留，提取率達到90%，遠高于酶解法。通過響應(yīng)面實驗獲得鰩魚肝油精煉工藝的最佳參數(shù)，用5%(質(zhì)量分數(shù))的脫膠劑脫膠(40%檸檬酸與85%磷酸按體積比1.0∶1.5混合)，用20%(質(zhì)量分數(shù))NaOH脫酸(75 ℃，20 min)，用8%(質(zhì)量分數(shù))的活性白土脫色，在40 ℃、60 r/min條件下減壓蒸餾60 min脫臭。在此條件下精煉，脂肪酸組成變化十分不明顯，精煉后的鰩魚肝油呈澄清、金黃色，稍有魚腥味，各項理化指標(biāo)均達到了一級魚油標(biāo)準(zhǔn)。同時對精制鰩魚肝油進行了脂肪酸成分分析，得到精制鰩魚肝油含有C14～C22脂肪酸23種，其中飽和脂肪酸7種，單不飽和脂肪酸5種，多不飽和脂肪酸11種；飽和脂肪酸和不飽和脂肪酸分別占脂肪酸總量的12.39%和87.61%；飽和脂肪酸主要是C14:0(豆蔻酸)與C18:0(棕櫚酸)，分別占脂肪酸總量的6.42%和4.47%；單不飽和脂肪酸主要是C16:1-9c與C18:1-9c，分別占脂肪酸總量的7.38%和10.84%；多不飽和脂肪多烯酸主要是C20:5(EPA)與C22:6(DHA)，分別占脂肪酸總量的8.65%和15.04%。與市售鱈魚肝油及鯊魚肝油對比，脂肪酸種類相同且含量相差不大，但主要脂肪酸DHA及EPA含量更高，可為擴大天然魚肝油來源提供科學(xué)依據(jù)。