孫向陽(yáng)，汪 杰，姚紅梅，鄭淼心，李嬋媛，張恕銘，張 慶

（西華大學(xué)食品與生物工程學(xué)院，四川成都 610039）

γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid，GABA）是一種四碳氨基酸，廣泛存在于生物體內(nèi)，由L-谷氨酸經(jīng)谷氨酸脫羧酶（glutamate decarboxylase，GAD）脫羧合成[1]，具有降壓[2]、抗抑郁[3]、預(yù)防糖尿病[4]、緩解疼痛[5]等功能。隨著年齡增長(zhǎng)，人體內(nèi)的GABA 合成能力不斷減弱，會(huì)出現(xiàn)失眠、焦躁、疲乏等癥狀，因此日常進(jìn)食含GABA 的食藥品是補(bǔ)充該功能物質(zhì)的一種有效方式[6]。然而，動(dòng)植物體內(nèi)的GABA 含量低，難以大量提取分離，尋求高效合成GABA 的途徑受到越來(lái)越多研究者的關(guān)注[7]。微生物發(fā)酵合成GABA不受時(shí)間、空間、能源的限制，且兼有低成本、高產(chǎn)量等顯著特點(diǎn)，成為當(dāng)前生產(chǎn)食藥級(jí)GABA 較為理想的途徑[8]。目前微生物產(chǎn)GABA 的研究大多使用單一乳酸菌發(fā)酵[9?12]，而以乳酸菌和酵母菌共發(fā)酵產(chǎn)GABA 的研究鮮有報(bào)道。

對(duì)于底物成分復(fù)雜的發(fā)酵體系，單一純種發(fā)酵具有明顯的應(yīng)用局限，優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)的多菌株協(xié)同發(fā)酵為解決該局限性提供了新的思路[13]。特別是乳酸菌酵母菌之間的良性互動(dòng)，為解決單一純種發(fā)酵某些底物難以代謝的問(wèn)題營(yíng)造了良好的代謝環(huán)境。有研究表明，共生乳酸菌酵母菌的互作可基于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)交換，從而促進(jìn)菌株的生長(zhǎng)代謝以提高目標(biāo)化合物的產(chǎn)量[14]；乳酸菌難以代謝蛋白質(zhì)，引入蛋白質(zhì)代謝能力較強(qiáng)的酵母菌產(chǎn)生的各種氨基酸則可以被乳酸菌良好利用，且酵母菌也可產(chǎn)生維生素和肽類(lèi)等營(yíng)養(yǎng)因子[15]；乳酸菌也可利用酵母菌難以代謝的蘋(píng)果酸等物質(zhì)，產(chǎn)生丙酸、丁酸，作為酵母菌合成風(fēng)味物質(zhì)的前體[16]。基于以上研究，篩選具有共生作用的乳酸菌和酵母菌并采用共發(fā)酵的方式提高GABA 產(chǎn)量是可行的。

屎腸球菌為常見(jiàn)的腸道益生乳酸菌，可改善哺乳動(dòng)物體內(nèi)的腸道環(huán)境，增強(qiáng)免疫能力，對(duì)哺乳動(dòng)物的生長(zhǎng)及腸道菌群的穩(wěn)定具有重要的意義[17]。釀酒酵母為具有潛在益生特性的菌株，廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥及飼料等行業(yè)[18]。通過(guò)合理構(gòu)建屎腸球菌和釀酒酵母的共發(fā)酵條件從而提高GABA 產(chǎn)量，以及研究其高產(chǎn)GABA 機(jī)理具有重要的意義。因此，本研究以前期篩選的產(chǎn)GABA 的屎腸球菌AB157 和釀酒酵母SC-125 為發(fā)酵菌株，研究采用共發(fā)酵提高GABA 產(chǎn)量，通過(guò)響應(yīng)面分析法優(yōu)化共發(fā)酵的發(fā)酵條件，且分析GAD 酶活及互作模式，旨在為具有共生作用的乳酸菌和酵母菌高產(chǎn)GABA 及機(jī)理探討提供一定的理論參考。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

本實(shí)驗(yàn)室篩選鑒定的產(chǎn)GABA 的屎腸球菌AB157[19]（Enterococcus faeciumAB157，NCBI 登錄號(hào)MH578625）和釀酒酵母SC-125（Saccharomyces cerevisiaeSC-125，NCBI 登錄號(hào)為MW279237） 西華大學(xué)古法發(fā)酵（釀造）生物技術(shù)研究所保藏；GABA

色譜純（含量≥98%），上海金穗生物科技有限公司；丹磺酰氯 色譜純（含量≥98%），成都華夏化學(xué)試劑有限公司；L-谷氨酸鈉（L-monosodium glutamate，L-MSG） 分析純（含量≥98.5%），成都科龍化工試劑廠(chǎng)；MRS 肉湯、MRS 選擇性瓊脂、YPD 液體培養(yǎng)基和PDA 選擇性瓊脂參照文獻(xiàn)[20]配制，根據(jù)需要添加不同質(zhì)量濃度的L-MSG。

FA1104 電子天平 上海舜宇恒平有限公司；pHS-3C pH計(jì)成都方舟科技公司；Allerga X-15R 冷凍離心機(jī) 美國(guó)賽默飛公司；JY98-IIIDN 超聲細(xì)胞破碎機(jī) 寧波新芝生物科技有限公司；GM-0.33AL 隔膜真空泵 天津津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；Waters2695高效液相色譜 美國(guó)Waters 公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 共發(fā)酵的單因素實(shí)驗(yàn) 選擇培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的屎腸球菌AB157（8.79 lg （CFU/mL））和釀酒酵母SC-125（7.81 lg （CFU/mL））作為種子。根據(jù)查閱文獻(xiàn)及前期試驗(yàn)篩選[21?22]，以MRS 肉湯為基礎(chǔ)培養(yǎng)基。在總接種量為2%（V/V），分別考察在接種比例為1:1（V/V），L-谷氨酸鈉添加量為12 g/L，靜置發(fā)酵96 h 時(shí)，不同發(fā)酵溫度（30、32、35、38、40 ℃）；在發(fā)酵溫度為35 ℃，L-谷氨酸鈉添加量為12 g/L，靜置發(fā)酵96 h 時(shí)，不同屎腸球菌AB157 和釀酒酵母SC-125 接種比例（1:4、1:2、1:1、2:1、4:1、6:1、1:0、0:1（V/V））；在發(fā)酵溫度為35 ℃，接種比例為4:1（V/V），靜置發(fā)酵96 h 時(shí)，不同L-谷氨酸鈉質(zhì)量濃度（0、4、8、12、16、20 g/L）；及在發(fā)酵溫度為35 ℃，接種比例為4:1（V/V）和L-谷氨酸鈉添加量為12 g/L 時(shí)，不同發(fā)酵時(shí)間（0、12、24、36、48、60、72、84、96、108、120 h）對(duì)屎腸球菌AB157 和釀酒酵母SC-125 共發(fā)酵時(shí)GABA 產(chǎn)量和活菌數(shù)的影響。

1.2.2 響應(yīng)面試驗(yàn) 在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，以發(fā)酵溫度、接種比例和L-谷氨酸鈉質(zhì)量濃度為考察因素，選取相應(yīng)的響應(yīng)面設(shè)計(jì)中心點(diǎn)，以GABA 產(chǎn)量為響應(yīng)值，對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行優(yōu)化試驗(yàn)。因素水平見(jiàn)表1。

1.2.3 GABA 含量測(cè)定 GABA 參照Z(yǔ)hang 等[23]利用丹磺酰氯衍生的方法，采用HPLC 分析。HPLC檢測(cè)條件：色譜柱為ODS-C18柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）；檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm；柱溫30 ℃；進(jìn)樣10 μL；水系為四氫呋喃-甲醇-乙酸鈉溶液（4.1 g/L，乙酸調(diào)pH 至6.2）=1:15:84（V/V/V），有機(jī)系為甲醇；1 mL/min梯度洗脫，水系比例為：80%保持6 min，14 min 降至50%，1 min 降至0%，0%保持5 min，1 min 升至80%，80%保持3 min，總洗脫時(shí)間30 min。

1.2.4 選擇性培養(yǎng)基法測(cè)定活菌數(shù) 待測(cè)菌液適當(dāng)稀釋?zhuān)坎加?jì)數(shù)。其中共發(fā)酵同時(shí)用MRS 選擇性瓊脂和PDA 選擇性瓊脂計(jì)數(shù)，屎腸球菌單菌發(fā)酵用MRS 選擇性瓊脂計(jì)數(shù)，釀酒酵母單菌發(fā)酵用PDA選擇性瓊脂計(jì)數(shù)。

1.2.5 GAD 酶活力測(cè)定

1.2.5.1 GAD 粗酶液制備 參照彭春龍等[24]的試驗(yàn)方法，略有修改，收集最優(yōu)條件下不同發(fā)酵時(shí)期及不同發(fā)酵體系的菌體，10000 r/min，4 ℃離心10 min，PBS 洗滌2 次，保留菌體；加入等體積含2.47 mg/mL磷酸吡哆醛，0.2 mg/mL 溶菌酶的0.02 mol/L 磷酸鈉緩沖液（pH7.2）懸浮菌體，37 ℃振蕩1 h，冰浴細(xì)胞破碎，功率400 W，運(yùn)行時(shí)間5 s，間歇時(shí)間5 s，循環(huán)180 次。破碎液4 ℃、10000 r/min 離心10 min，去除沉淀，即為GAD 粗酶液。

1.2.5.2 GAD 酶活力測(cè)定 取GAD 粗酶液400 μL，與等體積底物溶液（0.02 mol/L 磷酸鈉緩沖液，pH4.4，含12 g/L L-MSG，2.47 mg/mL 磷酸吡哆醛）混合，37 ℃溫浴30 min，置于沸水浴中10 min，離心收集上清液，采用HPLC 測(cè)定生成的GABA，HPLC 條件同1.2.3。酶活（U）定義：在試驗(yàn)條件下，1000 μL 粗酶液1 min 產(chǎn)生1 μmol GABA 的酶量。

1.2.6 無(wú)細(xì)胞上清液對(duì)菌株發(fā)酵產(chǎn)GABA 的影響收集培養(yǎng)至12 h 的屎腸球菌AB157 單菌發(fā)酵液、釀酒酵母SC-125 單菌發(fā)酵液及屎腸球菌AB157 和釀酒酵母SC-125 共發(fā)酵液，調(diào)pH 與MRS 肉湯pH 相等，將發(fā)酵液在8000 r/min 轉(zhuǎn)速下離心10 min，取上清液，過(guò)0.22 μm 有機(jī)濾膜，收集上清液即為無(wú)細(xì)胞上清液（cell-free supernatant，CFS）。

將制備的屎腸球菌AB157 CFS、釀酒酵母SC-125 CFS 和共發(fā)酵CFS 分別按培養(yǎng)基總體積分?jǐn)?shù)20%的量加入到MRS 肉湯（L-MSG 終濃度為12 g/L）中，等體積的MRS 肉湯作對(duì)照[14]。分別接入釀酒酵母SC-125（2%，V/V）和屎腸球菌AB157（2%，V/V）進(jìn)行單一菌株發(fā)酵，35 ℃發(fā)酵96 h，測(cè)定GABA 產(chǎn)量。

1.3 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 20.0 進(jìn)行顯著性分析，柱狀圖折線(xiàn)圖采用Origin 8.5 進(jìn)行繪制，響應(yīng)面采用Design Expert 8.0.6 分析。每組試驗(yàn)三個(gè)平行，所有結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 共發(fā)酵單因素實(shí)驗(yàn)

2.1.1 發(fā)酵溫度對(duì)共發(fā)酵產(chǎn)GABA 和活菌數(shù)的影響

發(fā)酵溫度對(duì)GABA 產(chǎn)量（圖1A）和活菌數(shù)（圖1B）影響結(jié)果如圖1 所示。隨溫度升高，共發(fā)酵及屎腸球菌AB157 單菌發(fā)酵中的GABA 濃度表現(xiàn)為先顯著增加后逐漸降低，在35 ℃達(dá)到GABA 產(chǎn)量最大值，GABA 最高產(chǎn)量為共發(fā)酵4.81 g/L，屎腸球菌AB157單菌發(fā)酵為3.66 g/L，釀酒酵母SC-125 單菌發(fā)酵為0.14 g/L。分析發(fā)酵體系的活菌數(shù)（圖1B）可知，屎腸球菌AB157 在共發(fā)酵和單菌發(fā)酵中，其活菌數(shù)隨溫度的改變變化不大，當(dāng)發(fā)酵溫度高于35 ℃時(shí)，其活菌數(shù)開(kāi)始下降；釀酒酵母SC-125 的活菌數(shù)隨著發(fā)酵溫度的升高逐漸降低，溫度升高其生長(zhǎng)被顯著抑制。發(fā)酵溫度可影響微生物的代謝以及胞內(nèi)催化L-MSG生成GABA 的酶GAD 的酶活力，適宜的發(fā)酵溫度有助于提高GABA 的產(chǎn)量[25?26]。因此，確定共發(fā)酵的溫度為35 ℃。

圖1 發(fā)酵溫度對(duì)GABA 產(chǎn)量及活菌數(shù)的影響Fig.1 Effect of fermentation temperature on GABA yield and viable cell counts

2.1.2 接種比例對(duì)共發(fā)酵產(chǎn)GABA 和活菌數(shù)的影響不同接種比例對(duì)GABA 產(chǎn)量（圖2A）和活菌數(shù)（圖2B）影響結(jié)果如圖2 所示。由圖2A 可知，當(dāng)屎腸球菌AB157 和釀酒酵母SC-125 的接種比例為4:1 時(shí)，GABA 產(chǎn)量最高，達(dá)6.44 g/L。由圖2B 可知，不同接種比例對(duì)屎腸球菌AB157 的活菌數(shù)影響不大；而隨著接種比例的增加，釀酒酵母SC-125 的活菌數(shù)呈下降趨勢(shì)。有研究表明，釀酒酵母可分泌營(yíng)養(yǎng)因子促進(jìn)乳酸菌的代謝，且消耗氧氣和產(chǎn)生CO2為乳酸菌提供良好的生長(zhǎng)環(huán)境[27?29]。適宜的接種比例可為共發(fā)酵體系中微生物的生長(zhǎng)及GABA 的轉(zhuǎn)化合成提供良好的環(huán)境。因此，確定最適接種比例為4:1。

圖2 接種比例對(duì)GABA 產(chǎn)量和活菌數(shù)的影響Fig.2 Effect of inoculum proportions on GABA yield and viable cell counts

2.1.3 底物濃度對(duì)共發(fā)酵產(chǎn)GABA 和活菌數(shù)的影響不同L-谷氨酸鈉質(zhì)量濃度對(duì)GABA 產(chǎn)量（圖3A）和活菌數(shù)（圖3B）影響結(jié)果如圖3 所示。由圖3A 可知，各發(fā)酵體系中的GABA 產(chǎn)量隨著L-谷氨酸鈉濃度的增加表現(xiàn)為先顯著增加后逐漸降低，添加L-谷氨酸鈉12 g/L 時(shí)，共發(fā)酵GABA 產(chǎn)量達(dá)到最大6.56 g/L，此時(shí)屎腸球菌和釀酒酵母單菌發(fā)酵GABA產(chǎn)量分別為3.67 g/L 和0.13 g/L。由圖3B 可知，不同L-谷氨酸鈉濃度對(duì)屎腸球菌AB157 的活菌數(shù)基本無(wú)影響，而在共發(fā)酵體系中，隨著底物濃度增加，釀酒酵母SC-125 的活菌數(shù)呈現(xiàn)先增加后降低的趨勢(shì)。Komatsuzaki 等[30]研究表明，適量的增加L-谷氨酸鈉有利于微生物的生長(zhǎng)和產(chǎn)物GABA 的生成，但L-谷氨酸鈉濃度過(guò)高，發(fā)酵體系的滲透壓增大，微生物的代謝會(huì)受到抑制，GABA 的產(chǎn)量反而降低。因此，確定最適的L-谷氨酸鈉質(zhì)量濃度為12 g/L。

圖3 底物濃度對(duì)GABA 產(chǎn)量及活菌數(shù)的影響Fig.3 Effect of substrate concentration on GABA yield and viable cell counts

2.1.4 發(fā)酵時(shí)間對(duì)共發(fā)酵產(chǎn)GABA 和活菌數(shù)的影響不同發(fā)酵時(shí)間對(duì)GABA 產(chǎn)量（圖4A）和活菌數(shù)（圖4B）影響結(jié)果如圖4 所示。由圖4A 可知，各發(fā)酵體系中的GABA 產(chǎn)量隨著發(fā)酵時(shí)間的延長(zhǎng)而顯著增加，在96 h 時(shí)，共發(fā)酵GABA 產(chǎn)量達(dá)到最大6.57g/L，且高于單菌發(fā)酵，隨后趨于穩(wěn)定。由圖4B可知，屎腸球菌AB157 和釀酒酵母SC-125 的活菌數(shù)隨著發(fā)酵的進(jìn)行其變化趨勢(shì)基本一致，且在達(dá)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期后趨于穩(wěn)定。因此，確定最適宜的發(fā)酵時(shí)間為96 h。

圖4 發(fā)酵時(shí)間對(duì)GABA 產(chǎn)量及活菌數(shù)的影響Fig.4 Effect of fermentation time on GABA yield and viable cell counts

2.2 響應(yīng)面試驗(yàn)優(yōu)化結(jié)果

采用Box-Behnken 響應(yīng)面設(shè)計(jì)結(jié)合單因素試驗(yàn)結(jié)果，以發(fā)酵溫度（A）、接種比例（B）和L-谷氨酸鈉質(zhì)量濃度（C）為自變量，GABA 產(chǎn)量為響應(yīng)值。以發(fā)酵溫度35 ℃、接種比例4:1 和底物濃度12 g/L 為分析中心點(diǎn)（如表2），進(jìn)行響應(yīng)面試驗(yàn)。

表2 響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果Table 2 Response surface experimental design and results

對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合分析，得到以GABA 產(chǎn)量（Y）的回歸方程：

根據(jù)回歸模型方差分析（表3）可知，該模型極顯著，即P<0.0001，F(xiàn)=178.69，且失擬項(xiàng)P>0.05 不顯著，表明該模型可用于發(fā)酵預(yù)測(cè)。此外，R2=0.9957，可以解釋99.57%的響應(yīng)值變化，校正后R2Adj=0.9901與R2接近，表明模型擬合度較好。以上結(jié)果表明該模型擬合度較好，可用于試驗(yàn)預(yù)測(cè)。同時(shí)，發(fā)酵溫度（A）、接種比例（B）、L-谷氨酸鈉質(zhì)量濃度（C）和A2、B2及C2的P值小于0.01，表明對(duì)GABA 的產(chǎn)量影響極顯著；交互項(xiàng)中，AC 達(dá)到極顯著水平（P<0.01），表明發(fā)酵溫度和L-谷氨酸鈉質(zhì)量濃度的交互作用對(duì)GABA 的生成影響最為顯著。由F值可知，影響GABA 產(chǎn)量的因素依次為L(zhǎng)-谷氨酸鈉質(zhì)量濃度>接種比例>發(fā)酵溫度。

表3 回歸模型方差分析Table 3 Analysis of variance of regression model

對(duì)該回歸方程分析，得到最優(yōu)的共發(fā)酵條件為發(fā)酵溫度35.26 ℃、屎腸球菌AB157 和釀酒酵母SC-125 的接種比例4.92:1（V/V）、底物濃度12.24 g/L，該條件下預(yù)測(cè)GABA 產(chǎn)量為6.67 g/L。

為驗(yàn)證預(yù)測(cè)的可靠性，結(jié)合最優(yōu)值和實(shí)際應(yīng)用確定共發(fā)酵因素值為：發(fā)酵溫度35 ℃、接種比例為5:1（V/V）、底物濃度12 g/L。重復(fù)試驗(yàn)三次，試驗(yàn)結(jié)果為，優(yōu)化條件下GABA 產(chǎn)量為6.55±0.09 g/L，與預(yù)測(cè)接近，且GABA 產(chǎn)量與屎腸球菌單菌發(fā)酵（3.67 g/L）相比，提高到1.78 倍。

2.3 GAD 酶活力分析結(jié)果

在最優(yōu)條件下，分析不同時(shí)間以及不同發(fā)酵體系中微生物GAD 酶活力（圖5A）與GABA 產(chǎn)量（圖5B）的關(guān)聯(lián)。GAD 為催化L-MSG 生成GABA 的限速酶[31]，因此GAD 酶活力的檢測(cè)對(duì)于研究GABA的合成能力尤為重要。由圖5A 可知，GAD 酶活隨時(shí)間變化表現(xiàn)為先顯著增加后逐漸降低的趨勢(shì)，在12 h 時(shí)共發(fā)酵體系酶活達(dá)到最高，為1.14 U，此時(shí)屎腸球菌和釀酒酵母單菌發(fā)酵分別為0.84 U 和0.01 U，且發(fā)酵12 h 后，共發(fā)酵體系GAD 酶活顯著高于單菌發(fā)酵體系。由圖5B 可知，共發(fā)酵中GABA 產(chǎn)量顯著高于單菌發(fā)酵。以上結(jié)果表明，共發(fā)酵中GABA產(chǎn)量的顯著提高與GAD 酶活的顯著增強(qiáng)緊密相關(guān)。

圖5 谷氨酸脫羧酶（GAD）酶活力與GABA 產(chǎn)量測(cè)定結(jié)果Fig.5 The result of glutamate decarboxylase （GAD） activity and GABA yield

2.4 添加CFS 對(duì)GABA 產(chǎn)量的影響

有研究表明乳酸菌和酵母菌在發(fā)酵環(huán)境中能夠通過(guò)生物膜包被、群體感應(yīng)或營(yíng)養(yǎng)代謝產(chǎn)物交換等方式進(jìn)行相互作用，從而影響發(fā)酵進(jìn)程[32?33]。本研究通過(guò)分別添加CFS 探究是否存在營(yíng)養(yǎng)代謝產(chǎn)物交換的相互作用影響菌株產(chǎn)GABA，結(jié)果見(jiàn)圖6。結(jié)果表明，添加屎腸球菌AB157 CFS 和共發(fā)酵CFS 后，釀酒酵母SC-125 發(fā)酵產(chǎn)GABA 分別為0.18 g/L 和0.17 g/L，高于對(duì)照組的0.13 g/L；添加釀酒酵母SC-125 的CFS 后，屎腸球菌AB157 發(fā)酵產(chǎn)GABA 為4.61 g/L，高于對(duì)照組的3.77 g/L，但添加共發(fā)酵的CFS 后，對(duì)其產(chǎn)GABA 無(wú)顯著影響，具體原因有待進(jìn)一步研究。上述表明，屎腸球菌AB157 或釀酒酵母SC-125 的CFS 對(duì)GABA 產(chǎn)量提升有幫助，其具體作用機(jī)制接下來(lái)將進(jìn)一步深入研究。

圖6 添加CFS 對(duì)GABA 產(chǎn)量的影響Fig.6 Effect of adding CFS on GABA yield

3 結(jié)論

本試驗(yàn)研究產(chǎn)GABA 屎腸球菌AB157 和釀酒酵母SC-125 采用共發(fā)酵提高GABA 產(chǎn)量，及分析相互作用和關(guān)鍵酶GAD。采用單因素和響應(yīng)面分析法優(yōu)化共發(fā)酵條件，確定在總接種量為2%（V/V）的共發(fā)酵條件為發(fā)酵溫度35 ℃、屎腸球菌AB157和釀酒酵母SC-125 的接種比例5:1（V/V）、底物濃度12 g/L，發(fā)酵時(shí)間96 h，此時(shí)，GABA 產(chǎn)量為6.55 g/L，與屎腸球菌單菌發(fā)酵相比，產(chǎn)量提高到1.78倍；高產(chǎn)GABA 機(jī)制研究表明，共發(fā)酵體系的高GAD酶活及菌株發(fā)酵代謝物的營(yíng)養(yǎng)供給對(duì)GABA 的產(chǎn)量提高有明顯促進(jìn)作用。接下來(lái)，基于屎腸球菌AB157和釀酒酵母SC-125 共培養(yǎng)高產(chǎn)GABA 的相互作用，對(duì)其具體互作機(jī)制將進(jìn)行深入研究。